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1、预习报告1、 实验名称:薄层色谱和柱色谱2、 实验目的：1、学习薄层色谱和柱色谱技术的原理和应用 2、掌握薄层色谱和柱色谱分离技术和操作要点。 3、掌握如何正确的配置展开剂3、 实验原理：色谱法的基本原理，是利用混合物各组分在固定相 和流动相中分配平衡常数的差异。简单地说就是，当 流动相流经固定相时，由于固定相对各组分的吸附或 溶解性能的不同，使吸附力较弱或溶解度较小的组分 在固定相中移动的速度较快，在多次反复平衡过程中 导致各组分在固定相中形成了分离的“色带”，从而 得到分离。4、 主要试剂规格及用量1%偶氮苯的甲苯溶液，1%苏丹的甲苯溶液，1%的羧甲基纤维素钠（CMC）水溶液，硅胶G，立即
2、比为9:1的甲苯-乙酸乙酯。五、实验装置图（见实验记录本）六、实验步骤 （一）薄层色谱实验步骤： 1、薄层板的制备（此实验中不考虑，有直接的可用） 2、取两块薄层板，分别在距一端1cm处用铅笔轻轻地画一条 线，作为起始线。用分别两根毛细管，分别取偶氮苯、苏丹 甲苯溶液和其混合液放在起始线上，取两个样点，且两样点 相距1到1.5厘米，且样点的直径不超过2毫米。如果样点 颜色太浅，可以等其变干后在重复几次。 3、用上述的甲苯-乙酸乙酯作为展开剂，待样点干燥后，小心 放入已加入展开剂的广口瓶中，点样一端应进入展开剂 0.5cm，盖好瓶盖，观察实验现象，观察展开剂前沿上升至离 板的上端1cm处取出，尽
3、快用铅笔在展开剂上升的前沿处划 一记号，比较两者的Rf值的大小。（二）柱色谱实验步骤 1、 在色谱柱上端放一个干燥的漏斗，将吸附剂倒入其中， 并轻轻的敲打色柱柱身使其填充均匀，然后加入洗脱剂湿 润。 2、当溶剂下降到吸附剂表面时立即开始使用色谱柱，用滴管 把样品溶液转移到上色谱柱中，并用少量溶剂分几次洗涤 柱壁上所沾试液，直至无色。样品加完后，打开下旋塞， 使样品进入石英砂层后，再加入洗脱剂进行洗脱。 3、在分有色物质是，直接观察到分离后的“色带”，然后用 洗脱剂将分离后的“色带”依次自柱中洗脱出来，再用适 宜的溶剂将溶质萃取出来。7、 注意事项 （1）薄层色谱 1、吸附剂必须均匀地填在柱内，没有气泡、没有裂缝，否则 将影响洗脱和分离。 2、加入沙子的目的是使加料时不致把吸附剂冲起，影响分高 效果。若无沙子，也可用滤纸覆盖在吸附剂表面。 3、为了保持柱子的均一性，使整个吸附剂浸泡在溶剂或溶液 中是必要的。否则当柱中溶剂或溶液流干时，就会使柱身干 裂，影响渗滤和显色的效果。 （2）柱色谱 1、制板时，硅胶用水调成刚好能流动的糊状物为佳，勿太浓 或太稀，并即刻铺在层析板上。做好的层析板应均匀一致， 否则会影响分离效果。 2、待溶剂前沿离层析板顶端仅12mm时方能取出，否则色点 分离不完全。但溶剂不能冲顶，否则色点会扩散而影响分离 效果。