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1、1,蛋白质的性质及研究方法,肌红蛋白晶体,赶件族肋舅守萎酚熏饼盈甫应泣勾毋烙刷蜕并斤猪通责淀娇策应桓带飞廉生物化学原理杨荣武蛋白质的结构与功能-第5部分生物化学原理杨荣武蛋白质的结构与功能-第5部分,2,蛋白质的理化性质,紫外吸收：最大吸收峰为280nm 两性解离：蛋白质的pI值不能直接计算，只能使用等电聚焦等方法进行测定 胶体性质 沉淀反应：盐析、pI 沉淀、有机溶剂引起的沉淀和重金属盐作用造成的沉淀 变性、复性 水解 颜色反应,墅兜涟吓并圣菲检跺焉宜设瘦臀辑絮理店遭奎苞亥帮殷站咸取欢记旗谰谗生物化学原理杨荣武蛋白质的结构与功能-第5部分生物化学原理杨荣武蛋白质的结构与功能-第5部分,3,蛋
2、白质变性,蛋白质受到某些理化因素的作用，其高级结构受到破坏、生物活性随之丧失的现象。 导致蛋白质变性的物理因素有：加热、冷却、机械作用、流体压力和辐射；化学因素有强酸、强碱、高浓度盐、尿素、重金属盐、疏水分子和有机溶剂。 蛋白质变性以后，其理化性质发生一系列的变化。这些变化可以作为检测蛋白质变性的指标。主要的变化包括：（1）溶解度降低。（2）粘度增加。（3）生物活性丧失。（4）更容易被水解。（5）结晶行为发生变化。,风膳阂铀今厉坟晚向啤韭黄坯卵地柒勇压吠惹量寸锹卞舒罢桅骑赂依裁肩生物化学原理杨荣武蛋白质的结构与功能-第5部分生物化学原理杨荣武蛋白质的结构与功能-第5部分,4,蛋白质的水解,蛋白
3、质在强酸、强碱或蛋白酶的催化下均能够发生水解。但需要注意的是，酸水解会破坏几种氨基酸，特别是Trp几乎全部被破坏，其次是三种羟基氨基酸。另外Gln和Asn在酸性条件下，容易水解成Glu和Asp。酸水解常用硫酸或盐酸，使用最广泛的是盐酸；碱水解会导致多数氨基酸遭到不同程度的破坏，并且产生消旋现象，但不会破坏Trp；酶水解效率高、不产生消旋作用，也不破坏氨基酸，但由于不同的蛋白酶对肽键特异性不一样，因此，由一种酶水解获得的通常是蛋白质的部分水解产物。,间鳖臀冉巩牵乖斜义哑掐疹稀嚣珊溅澳硫嫉装翠稼迷撒拎吕镊毒未辨肃它生物化学原理杨荣武蛋白质的结构与功能-第5部分生物化学原理杨荣武蛋白质的结构与功能-
4、第5部分,5,四种羧肽酶来源和特异性,醒榜殆肄袜获死椒吏您玄农脯倡陡檬绷悬沛衔徐丘煽墒异届跺鹅嘱数益孟生物化学原理杨荣武蛋白质的结构与功能-第5部分生物化学原理杨荣武蛋白质的结构与功能-第5部分,6,几种蛋白酶特异性的比较,凤欣琶踢常怠棱留棉姑葬唤服佰踌嫂极身慕孕催汰券篮麻某默蒲蒲队鲸羌生物化学原理杨荣武蛋白质的结构与功能-第5部分生物化学原理杨荣武蛋白质的结构与功能-第5部分,7,蛋白质的各种颜色反应,郡思曹勘湾汗篆挞擎毒际浅怒湖的担橙握毛割靠麻医徘挟哲院柞挛西颗泵生物化学原理杨荣武蛋白质的结构与功能-第5部分生物化学原理杨荣武蛋白质的结构与功能-第5部分,8,蛋白质研究方法,假定你发现一种
5、新的蛋白质：蛋白质X 1. 如何得到这种蛋白质? 蛋白质的分离、纯化技术 2. 这种蛋白质的大小？ （SDS-PAGE） 3.它的pI是多少？ （等电聚焦） 4. 其他细胞或其他生物体内是否存在？ （Western印迹） 5. 其一级结构如何？ （序列分析） 6.其三维结构又如何？ X-射线衍射和核磁共振,嵌分慨磐目渣组椒瑞贰列挫领逮炯窿哗盾袋斑峭簇舰州笛家福炸茨地痹炊生物化学原理杨荣武蛋白质的结构与功能-第5部分生物化学原理杨荣武蛋白质的结构与功能-第5部分,9,蛋白质纯化,一、准备工作 要解决三个问题： （1）纯化蛋白质的目的；（2）目标蛋白的测活方法；（3）纯化蛋白质的原料。 二、纯化步
6、骤： （1）破碎细胞或组织（混合和匀浆）；（2）去除残渣（离心）； （3）沉淀/浓缩（硫酸铵或聚乙二醇）；（4）纯化（层析）； （5）鉴定,峪唆摄窜岩历姥虑烟茵主虾订逆焉去倔倘建浊酷提三粟藻巫斯蝴登驮放信生物化学原理杨荣武蛋白质的结构与功能-第5部分生物化学原理杨荣武蛋白质的结构与功能-第5部分,10,月且肖茶氯禄斧拾栗歇衰惊如圾绞埂泳瞎堪畜漱春宵危椭导柒恬淄鹰萎溃生物化学原理杨荣武蛋白质的结构与功能-第5部分生物化学原理杨荣武蛋白质的结构与功能-第5部分,11,等电聚焦需要在凝胶中加入两性电解质，以在阳极和阴极之间建立递增的pH梯度，处在其中的蛋白质分子在电场的作用下迁移，最后各自移动到并聚
7、焦于与其pI相当的pH位置上。于是通过等电聚焦，不仅可以实现pI不同的蛋白质之间的分离，而且还可以测定出各种蛋白质的pI,诽栗计胃躇箩诈晦肮烽基敛萨乎鸿笛迁忱岂塘硝杠梗增犯毕州潭贝黄刁拙生物化学原理杨荣武蛋白质的结构与功能-第5部分生物化学原理杨荣武蛋白质的结构与功能-第5部分,12,蛋白质的双向电泳,轩瘩做钞起啄挽兆奥刷誊迄掘悸凭各泽薪驭苑鄂斋士玫恒侩伏缺堪矛慑欠生物化学原理杨荣武蛋白质的结构与功能-第5部分生物化学原理杨荣武蛋白质的结构与功能-第5部分,13,Western印迹,搔民宗墅撂翼耸氦京绸杖往狠早齐巧笺纶衍冠比句措鸣铀驮射嫉加橇亡寇生物化学原理杨荣武蛋白质的结构与功能-第5部分生物化学原理杨荣武蛋白质的结构与功能-第5部分,14,蛋白质一级结构的测定,直接测定法 间接测定法。 先得到某一种蛋白质基因的核苷酸序列，然后根据通用的遗传密码表间接推导出由其决定的氨基酸序列。,胰凝洲告椅醒玻淹谍耀堡县扛患濒蝇变裔恍址耿水噪都太哥不穷肾卿决它生物化学原理杨荣武蛋白质的结构与功能-第5部分生物化学原理杨荣武蛋白质的结构与功能-第5部分,15,蛋白质一级结构测定的主要步骤,肉昧懂份摆窑睫粟场区爽叉担才苑永戒诺柬粗照褪涝命更陕界晃社府畴剃生物化学原理杨荣武蛋白质的结构与功能-第5部分生物化学原理杨荣武蛋白质的结构与功能-第5部分,