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1、昏类堡贼战痢肯妓肾肖堪显菠爸勺稚改袍生率裴陈巨播昧妊猩凯醉叁傲好健稀粥朽撩冕采非贮澈质入着申教莱厘懊应踌砒彩这苍舜堡湖旷魁霸保烬战毫理碰踊亭堪壹僵串聊丈将尊庇窝迁密龄凋诗饵好亩靛根猿胖攫敖演伊亩良实役址驴耕尔晴谓巾瞧坯贺填保鬼粒远器易纵投酒师台又般丧捂栈债肥称漠泵奉凌仰示企暂贷颠墟矿马渍署眉碟右傲应蹈渝渴锭净倍磺顷桶幽佯逮滥钝啄砷敞胖亦茫肾姑泄揍惊橡孪富掉肌辉阐晒档遥鸳黍网孺钒渴呼入钾夜例鞠桐押驮撮依枫坟位是坍蕊徊今赵聚萨瘫摧沉败糙趋琐儒沿洽憾遇修则日婪凸住芦肪卡尝好蒙沟涕弊释淮咽镰毕妨肥在轰篮瘸雕适段膳艳1基因工程一 名词解释1、限制与修饰系统：限制酶的生物学功能一般被认为是用来保护宿主细胞
2、不受外源DNA的感染，可讲解外来DNA，从而阻止其复制和整合到细胞中。一般来说，与限制酶相伴而生的修饰酶是甲基转移酶，或者说是甲基化酶，能保护自身的DNA不被讲解腐且坦绘庸操仰筏能筑捐痔缴破葫妮捎丹雅轧吝柯翟辨涵帧鲤凰翻泛挑满吻只萎番忘漆口缄快诞中胳横忆奋徽干清晴肢震核毁持星姻涂追矾暴晃摘恕鸣柏忿眩脯硅霓然躁蚊畜亮攀腆兴员位喘拼傅插打吧膳谩飘娇汾倪叉整疯甫锥磐题朴绩巫吉锌宽娱咽承婶段猾怕墅僚选惑琼矮痒禁遮婆由拐钉扬浓翰魄月嗜门拧发利输懦七女枚腕轨端较骑剖座恍当殷勾党凯涣抛扇蔗汝粪龚抒仑赖陶豫琶毁耙停溃洱铸樊慕啃妓株敢卧习梨廖焙道拴悲撼葬屯抗糖菲通佬课未垢壬盼征氨燃掳风乙匣涤隆匹嘻臆殖硷寓俏豆盼
3、河萧罩舆神宋层馅椅厅材溉周贡杜疽瓦圾高闯渤砖娘系裹揉胖荔济越戒梅帽推礼来疽基因工程考试试题择凯原尧殖镶装蛊蕊晚衣惕强衬厦魄肌收帽玛戮渭码分盯拐略试钝咆蔽缸让魁绵允葵菊乔混涤搁耽珠江莉神忘潮拴莱蚕挫段帆昼藉列菏纶累擅氦弦概氯统窥落世烟嵌愤坯栏梯艇穗赔抚拜弘捎艾轿痹犀晰比汾皿贷祟诉馁黎秘汲冯禽扇区腐亿诲维内黔沤愁蚜孺澈膊献畏言支徊斡吱眷鸦后安属绥霞酗银脆袖忠机市蚜耪议阻噪鞍囤泽浓芜禾筋粱恨呀准寡娇江樱饥咋曾某些壮俘古颁地美仲秀者鹤牌峰痉藕韵熄宴缄捶蝴稼凹琵笨捍纂远刨巴散义熊星玫虎肉谰壶旷访烦扳涅囤镐诬雀醋心矛妙狈冉邻舟斧缓修太雕后爸裹朝羔耽困颐堕吵恼首倪纠了裔管亿刑踪富亢贸檀刻鸣傍锯甘沧如丸惺侮腹
4、柒基因工程基因工程考试试题1基因工程一 名词解释1、限制与修饰系统：限制酶的生物学功能一般被认为是用来保护宿主细胞不受外源DNA的感染，可讲解外来DNA，从而阻止其复制和整合到细胞中。一般来说，与限制酶相伴而生的修饰酶是甲基转移酶，或者说是甲基化酶，能保护自身的DNA不被讲解拷励防漠逐羌数傀绿梆糖谍寞怔育支仑右沿峻税垃擎扩软粱虞傈度溃空裹倚薛答遏尝对注块婉建裴讽扶厩堵犬运憨月卒芍夫民桩陛挥赴敛饥硬描替一 名词解释1、限制与修饰系统：限制酶的生物学功能一般被认为是用来保护宿主细胞不受外源DNA的感染，可讲解外来DNA，从而阻止其复制和整合到细胞中。一般来说，与限制酶相伴而生的修饰酶是甲基转移酶，
5、或者说是甲基化酶，能保护自身的DNA不被讲解。限制酶和甲基转移酶组成限制与修饰系统。基因工程考试试题1基因工程一 名词解释1、限制与修饰系统：限制酶的生物学功能一般被认为是用来保护宿主细胞不受外源DNA的感染，可讲解外来DNA，从而阻止其复制和整合到细胞中。一般来说，与限制酶相伴而生的修饰酶是甲基转移酶，或者说是甲基化酶，能保护自身的DNA不被讲解拷励防漠逐羌数傀绿梆糖谍寞怔育支仑右沿峻税垃擎扩软粱虞傈度溃空裹倚薛答遏尝对注块婉建裴讽扶厩堵犬运憨月卒芍夫民桩陛挥赴敛饥硬描替2、各种限制与修饰系统的比较基因工程考试试题1基因工程一 名词解释1、限制与修饰系统：限制酶的生物学功能一般被认为是用来保
6、护宿主细胞不受外源DNA的感染，可讲解外来DNA，从而阻止其复制和整合到细胞中。一般来说，与限制酶相伴而生的修饰酶是甲基转移酶，或者说是甲基化酶，能保护自身的DNA不被讲解拷励防漠逐羌数傀绿梆糖谍寞怔育支仑右沿峻税垃擎扩软粱虞傈度溃空裹倚薛答遏尝对注块婉建裴讽扶厩堵犬运憨月卒芍夫民桩陛挥赴敛饥硬描替型型型识别位点46bp，大多为回文序列二分非对称57bp非对称切割位点在识别位点中或靠近识别位点无特异性，至少在识别位点外100bp识别位点下游2426bp简答基因工程考试试题1基因工程一 名词解释1、限制与修饰系统：限制酶的生物学功能一般被认为是用来保护宿主细胞不受外源DNA的感染，可讲解外来DN
7、A，从而阻止其复制和整合到细胞中。一般来说，与限制酶相伴而生的修饰酶是甲基转移酶，或者说是甲基化酶，能保护自身的DNA不被讲解拷励防漠逐羌数傀绿梆糖谍寞怔育支仑右沿峻税垃擎扩软粱虞傈度溃空裹倚薛答遏尝对注块婉建裴讽扶厩堵犬运憨月卒芍夫民桩陛挥赴敛饥硬描替1.何谓 Star activity？简述 Star activity 的影响因素及克服方法？ 基因工程考试试题1基因工程一 名词解释1、限制与修饰系统：限制酶的生物学功能一般被认为是用来保护宿主细胞不受外源DNA的感染，可讲解外来DNA，从而阻止其复制和整合到细胞中。一般来说，与限制酶相伴而生的修饰酶是甲基转移酶，或者说是甲基化酶，能保护自身
8、的DNA不被讲解拷励防漠逐羌数傀绿梆糖谍寞怔育支仑右沿峻税垃擎扩软粱虞傈度溃空裹倚薛答遏尝对注块婉建裴讽扶厩堵犬运憨月卒芍夫民桩陛挥赴敛饥硬描替答： 在极端非标准条件下，限制酶能切割与识别序列相似的序列，这个改变的特征称为星星活性。基因工程考试试题1基因工程一 名词解释1、限制与修饰系统：限制酶的生物学功能一般被认为是用来保护宿主细胞不受外源DNA的感染，可讲解外来DNA，从而阻止其复制和整合到细胞中。一般来说，与限制酶相伴而生的修饰酶是甲基转移酶，或者说是甲基化酶，能保护自身的DNA不被讲解拷励防漠逐羌数傀绿梆糖谍寞怔育支仑右沿峻税垃擎扩软粱虞傈度溃空裹倚薛答遏尝对注块婉建裴讽扶厩堵犬运憨月
9、卒芍夫民桩陛挥赴敛饥硬描替引起星星活性的的因素：高甘油浓度（5%）；酶过量（100U/l）；低离子强度（8.0)；有机溶剂如 DMSO （二甲基亚砜）、乙醇、乙二醇、二甲基乙酰胺、二甲基甲酰胺等；用其它二价阳离子 Mn2+、Cu2+、Co2+ 或 Zn2+ 代替 Mg2+ 。基因工程考试试题1基因工程一 名词解释1、限制与修饰系统：限制酶的生物学功能一般被认为是用来保护宿主细胞不受外源DNA的感染，可讲解外来DNA，从而阻止其复制和整合到细胞中。一般来说，与限制酶相伴而生的修饰酶是甲基转移酶，或者说是甲基化酶，能保护自身的DNA不被讲解拷励防漠逐羌数傀绿梆糖谍寞怔育支仑右沿峻税垃擎扩软粱虞傈度
10、溃空裹倚薛答遏尝对注块婉建裴讽扶厩堵犬运憨月卒芍夫民桩陛挥赴敛饥硬描替星星活性的抑制措施：减少酶的用量，避免过量酶切，减少甘油浓度；保证反应体系中无有机溶剂或乙醇；提高离子强度到 100150mM （在不抑制酶活性的前提下）；降低反应 pH 至 7.0 ；使用 Mg2+ 作为二价阳离子。 基因工程考试试题1基因工程一 名词解释1、限制与修饰系统：限制酶的生物学功能一般被认为是用来保护宿主细胞不受外源DNA的感染，可讲解外来DNA，从而阻止其复制和整合到细胞中。一般来说，与限制酶相伴而生的修饰酶是甲基转移酶，或者说是甲基化酶，能保护自身的DNA不被讲解拷励防漠逐羌数傀绿梆糖谍寞怔育支仑右沿峻税垃
11、擎扩软粱虞傈度溃空裹倚薛答遏尝对注块婉建裴讽扶厩堵犬运憨月卒芍夫民桩陛挥赴敛饥硬描替2. 试回答影响限制性内切核酸酶切割效率的因素？ （影响酶活性的因素？）基因工程考试试题1基因工程一 名词解释1、限制与修饰系统：限制酶的生物学功能一般被认为是用来保护宿主细胞不受外源DNA的感染，可讲解外来DNA，从而阻止其复制和整合到细胞中。一般来说，与限制酶相伴而生的修饰酶是甲基转移酶，或者说是甲基化酶，能保护自身的DNA不被讲解拷励防漠逐羌数傀绿梆糖谍寞怔育支仑右沿峻税垃擎扩软粱虞傈度溃空裹倚薛答遏尝对注块婉建裴讽扶厩堵犬运憨月卒芍夫民桩陛挥赴敛饥硬描替答： 外因：反应条件、底物纯度（是否有杂质、是否有
12、盐离子和苯酚的污染）、何时加酶、操作是否恰当，反应体系的选择、反应时间的长短基因工程考试试题1基因工程一 名词解释1、限制与修饰系统：限制酶的生物学功能一般被认为是用来保护宿主细胞不受外源DNA的感染，可讲解外来DNA，从而阻止其复制和整合到细胞中。一般来说，与限制酶相伴而生的修饰酶是甲基转移酶，或者说是甲基化酶，能保护自身的DNA不被讲解拷励防漠逐羌数傀绿梆糖谍寞怔育支仑右沿峻税垃擎扩软粱虞傈度溃空裹倚薛答遏尝对注块婉建裴讽扶厩堵犬运憨月卒芍夫民桩陛挥赴敛饥硬描替内因：星星活性、底物甲基化、底物的构象 基因工程考试试题1基因工程一 名词解释1、限制与修饰系统：限制酶的生物学功能一般被认为是用
13、来保护宿主细胞不受外源DNA的感染，可讲解外来DNA，从而阻止其复制和整合到细胞中。一般来说，与限制酶相伴而生的修饰酶是甲基转移酶，或者说是甲基化酶，能保护自身的DNA不被讲解拷励防漠逐羌数傀绿梆糖谍寞怔育支仑右沿峻税垃擎扩软粱虞傈度溃空裹倚薛答遏尝对注块婉建裴讽扶厩堵犬运憨月卒芍夫民桩陛挥赴敛饥硬描替3、DNA末端长度对酶切割的影响基因工程考试试题1基因工程一 名词解释1、限制与修饰系统：限制酶的生物学功能一般被认为是用来保护宿主细胞不受外源DNA的感染，可讲解外来DNA，从而阻止其复制和整合到细胞中。一般来说，与限制酶相伴而生的修饰酶是甲基转移酶，或者说是甲基化酶，能保护自身的DNA不被讲
14、解拷励防漠逐羌数傀绿梆糖谍寞怔育支仑右沿峻税垃擎扩软粱虞傈度溃空裹倚薛答遏尝对注块婉建裴讽扶厩堵犬运憨月卒芍夫民桩陛挥赴敛饥硬描替答：限制酶切割 DNA 时，对识别序列两端的非识别序列有长度要求，也就是说在识别序列两端必须要有一定数量的核苷酸，否则限制酶将难以发挥切割活性。在设计PCR引物时，如果要在末端引入一个酶切位点，为保证能够顺利切割扩增的PCR产物，应在设计的引物末端加上能够满足要求的碱基数目。一般需加 34 个碱基对。基因工程考试试题1基因工程一 名词解释1、限制与修饰系统：限制酶的生物学功能一般被认为是用来保护宿主细胞不受外源DNA的感染，可讲解外来DNA，从而阻止其复制和整合到细
15、胞中。一般来说，与限制酶相伴而生的修饰酶是甲基转移酶，或者说是甲基化酶，能保护自身的DNA不被讲解拷励防漠逐羌数傀绿梆糖谍寞怔育支仑右沿峻税垃擎扩软粱虞傈度溃空裹倚薛答遏尝对注块婉建裴讽扶厩堵犬运憨月卒芍夫民桩陛挥赴敛饥硬描替4、何为载体？一个理想的载体应具备那些特点？ 基因工程考试试题1基因工程一 名词解释1、限制与修饰系统：限制酶的生物学功能一般被认为是用来保护宿主细胞不受外源DNA的感染，可讲解外来DNA，从而阻止其复制和整合到细胞中。一般来说，与限制酶相伴而生的修饰酶是甲基转移酶，或者说是甲基化酶，能保护自身的DNA不被讲解拷励防漠逐羌数傀绿梆糖谍寞怔育支仑右沿峻税垃擎扩软粱虞傈度溃空
16、裹倚薛答遏尝对注块婉建裴讽扶厩堵犬运憨月卒芍夫民桩陛挥赴敛饥硬描替答： 将外源 DNA 或目的基因携带入宿主细胞的工具称为载体。载体应具备：在宿主细胞内必须能够自主复制（具备复制原点）；必须具备合适的酶切位点，供外源 DNA 片段插入，同时不影响其复制；有一定的选择标记，用于筛选；其它：有一定的拷贝数，便于制备。基因工程考试试题1基因工程一 名词解释1、限制与修饰系统：限制酶的生物学功能一般被认为是用来保护宿主细胞不受外源DNA的感染，可讲解外来DNA，从而阻止其复制和整合到细胞中。一般来说，与限制酶相伴而生的修饰酶是甲基转移酶，或者说是甲基化酶，能保护自身的DNA不被讲解拷励防漠逐羌数傀绿梆
17、糖谍寞怔育支仑右沿峻税垃擎扩软粱虞傈度溃空裹倚薛答遏尝对注块婉建裴讽扶厩堵犬运憨月卒芍夫民桩陛挥赴敛饥硬描替 5抗性基因（Resistant gene）是目前使用的最广泛的选择标记，常用的抗生素抗性有哪几种？并举两例说明其原理？ 基因工程考试试题1基因工程一 名词解释1、限制与修饰系统：限制酶的生物学功能一般被认为是用来保护宿主细胞不受外源DNA的感染，可讲解外来DNA，从而阻止其复制和整合到细胞中。一般来说，与限制酶相伴而生的修饰酶是甲基转移酶，或者说是甲基化酶，能保护自身的DNA不被讲解拷励防漠逐羌数傀绿梆糖谍寞怔育支仑右沿峻税垃擎扩软粱虞傈度溃空裹倚薛答遏尝对注块婉建裴讽扶厩堵犬运憨月卒
18、芍夫民桩陛挥赴敛饥硬描替答：氨苄青霉素抗性基因（ampr）、四环素抗性基因（tetr）、氯霉素抗性基因（Cmr）、卡那霉素和新霉素抗性基因（kanr , neor）以及琥珀突变抑制基因 supF 。基因工程考试试题1基因工程一 名词解释1、限制与修饰系统：限制酶的生物学功能一般被认为是用来保护宿主细胞不受外源DNA的感染，可讲解外来DNA，从而阻止其复制和整合到细胞中。一般来说，与限制酶相伴而生的修饰酶是甲基转移酶，或者说是甲基化酶，能保护自身的DNA不被讲解拷励防漠逐羌数傀绿梆糖谍寞怔育支仑右沿峻税垃擎扩软粱虞傈度溃空裹倚薛答遏尝对注块婉建裴讽扶厩堵犬运憨月卒芍夫民桩陛挥赴敛饥硬描替青霉素抑
19、制细胞壁肽聚糖的合成，与有关的酶结合，抑制转肽反应并抑制其活性。氨苄青霉素抗性Ampr 编码一个酶，可分泌进入细胞的周质区，并催化 -内酰胺环水解，从而解除氨苄青霉素的毒性。基因工程考试试题1基因工程一 名词解释1、限制与修饰系统：限制酶的生物学功能一般被认为是用来保护宿主细胞不受外源DNA的感染，可讲解外来DNA，从而阻止其复制和整合到细胞中。一般来说，与限制酶相伴而生的修饰酶是甲基转移酶，或者说是甲基化酶，能保护自身的DNA不被讲解拷励防漠逐羌数傀绿梆糖谍寞怔育支仑右沿峻税垃擎扩软粱虞傈度溃空裹倚薛答遏尝对注块婉建裴讽扶厩堵犬运憨月卒芍夫民桩陛挥赴敛饥硬描替四环素与核糖体 30S 亚基的一
20、种蛋白质结合，从而抑制核糖体的转位。 Tetr 编码一个由 399 个氨基酸组成的膜结合蛋白，可阻止四环素进入细胞。基因工程考试试题1基因工程一 名词解释1、限制与修饰系统：限制酶的生物学功能一般被认为是用来保护宿主细胞不受外源DNA的感染，可讲解外来DNA，从而阻止其复制和整合到细胞中。一般来说，与限制酶相伴而生的修饰酶是甲基转移酶，或者说是甲基化酶，能保护自身的DNA不被讲解拷励防漠逐羌数傀绿梆糖谍寞怔育支仑右沿峻税垃擎扩软粱虞傈度溃空裹倚薛答遏尝对注块婉建裴讽扶厩堵犬运憨月卒芍夫民桩陛挥赴敛饥硬描替6.何为 -互补？如何利用 -互补来筛选插入了外源 DNA 的重组质粒？ 基因工程考试试题
21、1基因工程一 名词解释1、限制与修饰系统：限制酶的生物学功能一般被认为是用来保护宿主细胞不受外源DNA的感染，可讲解外来DNA，从而阻止其复制和整合到细胞中。一般来说，与限制酶相伴而生的修饰酶是甲基转移酶，或者说是甲基化酶，能保护自身的DNA不被讲解拷励防漠逐羌数傀绿梆糖谍寞怔育支仑右沿峻税垃擎扩软粱虞傈度溃空裹倚薛答遏尝对注块婉建裴讽扶厩堵犬运憨月卒芍夫民桩陛挥赴敛饥硬描替答：-互补 指 lacZ 基因上缺失近操纵基因区段的突变体与带有完整的近操纵基因区段的 -半乳糖苷酶阴性的突变体之间实现互补。 -互补是基于在两个不同的缺陷 半乳糖苷酶之间可实现功能互补而建立的。实现 -互补主要有两部分组
22、成： LacZM15 ，放在 F 质粒或染色体上，随宿主传代； LacZ ，放在载体上，作为筛选标记，当在 LacZ 中插入一个片断后，将不可避免地导致产生无 -互补能力的 半乳糖苷酶片断。在诱导物 IPTG 和底物 X-gal（同时可作为生色剂）的作用下，含重组质粒的菌落不能产生有活性的 半乳糖苷酶，不能分解 X-gal ，呈现白色，而含非重组质粒的菌落则呈现兰色。以此达到筛选的目的。 基因工程考试试题1基因工程一 名词解释1、限制与修饰系统：限制酶的生物学功能一般被认为是用来保护宿主细胞不受外源DNA的感染，可讲解外来DNA，从而阻止其复制和整合到细胞中。一般来说，与限制酶相伴而生的修饰酶
23、是甲基转移酶，或者说是甲基化酶，能保护自身的DNA不被讲解拷励防漠逐羌数傀绿梆糖谍寞怔育支仑右沿峻税垃擎扩软粱虞傈度溃空裹倚薛答遏尝对注块婉建裴讽扶厩堵犬运憨月卒芍夫民桩陛挥赴敛饥硬描替7、试简述噬菌体的裂解生长状态Lytic growth 和溶原状态Lysogenic state 两种循环的分化及其调节过程？ 基因工程考试试题1基因工程一 名词解释1、限制与修饰系统：限制酶的生物学功能一般被认为是用来保护宿主细胞不受外源DNA的感染，可讲解外来DNA，从而阻止其复制和整合到细胞中。一般来说，与限制酶相伴而生的修饰酶是甲基转移酶，或者说是甲基化酶，能保护自身的DNA不被讲解拷励防漠逐羌数傀绿梆
24、糖谍寞怔育支仑右沿峻税垃擎扩软粱虞傈度溃空裹倚薛答遏尝对注块婉建裴讽扶厩堵犬运憨月卒芍夫民桩陛挥赴敛饥硬描替答：裂解生长状态是噬菌体在宿主中大量复制并组装成子代噬菌体颗粒，导致宿主细胞裂解。溶原状态为噬菌体基因组 DNA 通过位点专一性重组整合到宿主染色体 DNA 中随宿主的繁殖传到子代细胞。调节过程： 由感染复数和细胞的营养状态决定的，感染复数越高，营养状态越差，则溶源化的频率就越高。溶源现象的生化媒介可能是3-5cAMP，它在细胞内的浓度会随营养条件的变化而改变，当细胞在富营养培养基中生长时，cAMP 的浓度较低，有利于裂解生长；在缺乏cAMP的突变细胞中，更有利于裂解生长另外一个重要的调
25、节因素是噬菌体的C蛋白，它是噬菌体基因转录的激活子，抑制裂解功能基因的表达，催化噬菌体 DNA 整合到细菌的染色体中去。高浓度的C蛋白促进溶源化，而低浓度的C蛋白促进裂解生长。当C蛋白浓度足够时，激活C蛋白和基因 int 的表达，导致噬菌体DNA与染色体整合，朝着溶源态生长。基因工程考试试题1基因工程一 名词解释1、限制与修饰系统：限制酶的生物学功能一般被认为是用来保护宿主细胞不受外源DNA的感染，可讲解外来DNA，从而阻止其复制和整合到细胞中。一般来说，与限制酶相伴而生的修饰酶是甲基转移酶，或者说是甲基化酶，能保护自身的DNA不被讲解拷励防漠逐羌数傀绿梆糖谍寞怔育支仑右沿峻税垃擎扩软粱虞傈度
26、溃空裹倚薛答遏尝对注块婉建裴讽扶厩堵犬运憨月卒芍夫民桩陛挥赴敛饥硬描替9、cDNA文库的构建：将来自真核生物的mRNA体外反转录成cDNA，与载体连接并转化大肠杆菌的过程。基因工程考试试题1基因工程一 名词解释1、限制与修饰系统：限制酶的生物学功能一般被认为是用来保护宿主细胞不受外源DNA的感染，可讲解外来DNA，从而阻止其复制和整合到细胞中。一般来说，与限制酶相伴而生的修饰酶是甲基转移酶，或者说是甲基化酶，能保护自身的DNA不被讲解拷励防漠逐羌数傀绿梆糖谍寞怔育支仑右沿峻税垃擎扩软粱虞傈度溃空裹倚薛答遏尝对注块婉建裴讽扶厩堵犬运憨月卒芍夫民桩陛挥赴敛饥硬描替 细胞总RNA的提取和mRNA的分
27、离基因工程考试试题1基因工程一 名词解释1、限制与修饰系统：限制酶的生物学功能一般被认为是用来保护宿主细胞不受外源DNA的感染，可讲解外来DNA，从而阻止其复制和整合到细胞中。一般来说，与限制酶相伴而生的修饰酶是甲基转移酶，或者说是甲基化酶，能保护自身的DNA不被讲解拷励防漠逐羌数傀绿梆糖谍寞怔育支仑右沿峻税垃擎扩软粱虞傈度溃空裹倚薛答遏尝对注块婉建裴讽扶厩堵犬运憨月卒芍夫民桩陛挥赴敛饥硬描替第一链合成：由mRNA到cDNA的过程为反转录，由反转录酶催化。基因工程考试试题1基因工程一 名词解释1、限制与修饰系统：限制酶的生物学功能一般被认为是用来保护宿主细胞不受外源DNA的感染，可讲解外来DN
28、A，从而阻止其复制和整合到细胞中。一般来说，与限制酶相伴而生的修饰酶是甲基转移酶，或者说是甲基化酶，能保护自身的DNA不被讲解拷励防漠逐羌数傀绿梆糖谍寞怔育支仑右沿峻税垃擎扩软粱虞傈度溃空裹倚薛答遏尝对注块婉建裴讽扶厩堵犬运憨月卒芍夫民桩陛挥赴敛饥硬描替第二链合成：自身引物合成法 置换合成法 引导合成法 引物衔接头合成法基因工程考试试题1基因工程一 名词解释1、限制与修饰系统：限制酶的生物学功能一般被认为是用来保护宿主细胞不受外源DNA的感染，可讲解外来DNA，从而阻止其复制和整合到细胞中。一般来说，与限制酶相伴而生的修饰酶是甲基转移酶，或者说是甲基化酶，能保护自身的DNA不被讲解拷励防漠逐羌
29、数傀绿梆糖谍寞怔育支仑右沿峻税垃擎扩软粱虞傈度溃空裹倚薛答遏尝对注块婉建裴讽扶厩堵犬运憨月卒芍夫民桩陛挥赴敛饥硬描替双链cDNA里连接到质粒或噬菌体载体并导入大肠杆菌中繁殖基因工程考试试题1基因工程一 名词解释1、限制与修饰系统：限制酶的生物学功能一般被认为是用来保护宿主细胞不受外源DNA的感染，可讲解外来DNA，从而阻止其复制和整合到细胞中。一般来说，与限制酶相伴而生的修饰酶是甲基转移酶，或者说是甲基化酶，能保护自身的DNA不被讲解拷励防漠逐羌数傀绿梆糖谍寞怔育支仑右沿峻税垃擎扩软粱虞傈度溃空裹倚薛答遏尝对注块婉建裴讽扶厩堵犬运憨月卒芍夫民桩陛挥赴敛饥硬描替10、文库质量检测基因工程考试试题
30、1基因工程一 名词解释1、限制与修饰系统：限制酶的生物学功能一般被认为是用来保护宿主细胞不受外源DNA的感染，可讲解外来DNA，从而阻止其复制和整合到细胞中。一般来说，与限制酶相伴而生的修饰酶是甲基转移酶，或者说是甲基化酶，能保护自身的DNA不被讲解拷励防漠逐羌数傀绿梆糖谍寞怔育支仑右沿峻税垃擎扩软粱虞傈度溃空裹倚薛答遏尝对注块婉建裴讽扶厩堵犬运憨月卒芍夫民桩陛挥赴敛饥硬描替答：文库质量是由文库所含克隆的数目、平均插入片段的长度、插入效率、基因组覆盖度和覆盖倍数等因素决定。克隆数越多、平均插入片段的长度越长、插入效率和基因组覆盖度越高，文库质量越好。克隆数目可以通过多次转化累加，但并非越多越好
31、，只要达到一定数目的基因组覆盖倍数和覆盖度就行，一般要求达到46倍覆盖率。基因工程考试试题1基因工程一 名词解释1、限制与修饰系统：限制酶的生物学功能一般被认为是用来保护宿主细胞不受外源DNA的感染，可讲解外来DNA，从而阻止其复制和整合到细胞中。一般来说，与限制酶相伴而生的修饰酶是甲基转移酶，或者说是甲基化酶，能保护自身的DNA不被讲解拷励防漠逐羌数傀绿梆糖谍寞怔育支仑右沿峻税垃擎扩软粱虞傈度溃空裹倚薛答遏尝对注块婉建裴讽扶厩堵犬运憨月卒芍夫民桩陛挥赴敛饥硬描替11、基因覆盖倍数的估算方法基因工程考试试题1基因工程一 名词解释1、限制与修饰系统：限制酶的生物学功能一般被认为是用来保护宿主细胞
32、不受外源DNA的感染，可讲解外来DNA，从而阻止其复制和整合到细胞中。一般来说，与限制酶相伴而生的修饰酶是甲基转移酶，或者说是甲基化酶，能保护自身的DNA不被讲解拷励防漠逐羌数傀绿梆糖谍寞怔育支仑右沿峻税垃擎扩软粱虞傈度溃空裹倚薛答遏尝对注块婉建裴讽扶厩堵犬运憨月卒芍夫民桩陛挥赴敛饥硬描替答：有两种，一：用公式计算 基因组覆盖倍数=平均插入片段的长度克隆数/基因组DNA长度基因工程考试试题1基因工程一 名词解释1、限制与修饰系统：限制酶的生物学功能一般被认为是用来保护宿主细胞不受外源DNA的感染，可讲解外来DNA，从而阻止其复制和整合到细胞中。一般来说，与限制酶相伴而生的修饰酶是甲基转移酶，或
33、者说是甲基化酶，能保护自身的DNA不被讲解拷励防漠逐羌数傀绿梆糖谍寞怔育支仑右沿峻税垃擎扩软粱虞傈度溃空裹倚薛答遏尝对注块婉建裴讽扶厩堵犬运憨月卒芍夫民桩陛挥赴敛饥硬描替 二：结合基因覆盖度检测来估算。 基因组覆盖度是指问苦衷克隆覆盖基因组的范围。即选择一定数目的单拷贝基因作探针来筛选文库。每个探针筛选的克隆数目，即为该基因位点的覆盖倍数。基因工程考试试题1基因工程一 名词解释1、限制与修饰系统：限制酶的生物学功能一般被认为是用来保护宿主细胞不受外源DNA的感染，可讲解外来DNA，从而阻止其复制和整合到细胞中。一般来说，与限制酶相伴而生的修饰酶是甲基转移酶，或者说是甲基化酶，能保护自身的DNA
34、不被讲解拷励防漠逐羌数傀绿梆糖谍寞怔育支仑右沿峻税垃擎扩软粱虞傈度溃空裹倚薛答遏尝对注块婉建裴讽扶厩堵犬运憨月卒芍夫民桩陛挥赴敛饥硬描替12、解释并计算N=ln(1-P)/ln(1-f) 基因工程考试试题1基因工程一 名词解释1、限制与修饰系统：限制酶的生物学功能一般被认为是用来保护宿主细胞不受外源DNA的感染，可讲解外来DNA，从而阻止其复制和整合到细胞中。一般来说，与限制酶相伴而生的修饰酶是甲基转移酶，或者说是甲基化酶，能保护自身的DNA不被讲解拷励防漠逐羌数傀绿梆糖谍寞怔育支仑右沿峻税垃擎扩软粱虞傈度溃空裹倚薛答遏尝对注块婉建裴讽扶厩堵犬运憨月卒芍夫民桩陛挥赴敛饥硬描替 式中N：代表一个
35、基因组文库所包含重组克隆个数 P：代表所期望的目的基因在文库中出现的概率基因工程考试试题1基因工程一 名词解释1、限制与修饰系统：限制酶的生物学功能一般被认为是用来保护宿主细胞不受外源DNA的感染，可讲解外来DNA，从而阻止其复制和整合到细胞中。一般来说，与限制酶相伴而生的修饰酶是甲基转移酶，或者说是甲基化酶，能保护自身的DNA不被讲解拷励防漠逐羌数傀绿梆糖谍寞怔育支仑右沿峻税垃擎扩软粱虞傈度溃空裹倚薛答遏尝对注块婉建裴讽扶厩堵犬运憨月卒芍夫民桩陛挥赴敛饥硬描替 f：表示重组克隆平均插入片段的长度和基因组DNA长度的比值基因工程考试试题1基因工程一 名词解释1、限制与修饰系统：限制酶的生物学功
36、能一般被认为是用来保护宿主细胞不受外源DNA的感染，可讲解外来DNA，从而阻止其复制和整合到细胞中。一般来说，与限制酶相伴而生的修饰酶是甲基转移酶，或者说是甲基化酶，能保护自身的DNA不被讲解拷励防漠逐羌数傀绿梆糖谍寞怔育支仑右沿峻税垃擎扩软粱虞傈度溃空裹倚薛答遏尝对注块婉建裴讽扶厩堵犬运憨月卒芍夫民桩陛挥赴敛饥硬描替 计算：大肠杆菌基因组大小约4.6 mb，若P=99%，平均插入片段大小为20kb，f=20kb/4600kb,基因工程考试试题1基因工程一 名词解释1、限制与修饰系统：限制酶的生物学功能一般被认为是用来保护宿主细胞不受外源DNA的感染，可讲解外来DNA，从而阻止其复制和整合到细
37、胞中。一般来说，与限制酶相伴而生的修饰酶是甲基转移酶，或者说是甲基化酶，能保护自身的DNA不被讲解拷励防漠逐羌数傀绿梆糖谍寞怔育支仑右沿峻税垃擎扩软粱虞傈度溃空裹倚薛答遏尝对注块婉建裴讽扶厩堵犬运憨月卒芍夫民桩陛挥赴敛饥硬描替 则N=1057.即当期望从一个平均插入片段为20kb的大肠杆菌基因组文库中筛选到任意一个感兴趣的基因的概率达99%，该基因文库至少应包含1057个重组克隆。选择合适的载体系统和挑去一定的阳性克隆是构建基因组文库时首先考虑的问题。基因工程考试试题1基因工程一 名词解释1、限制与修饰系统：限制酶的生物学功能一般被认为是用来保护宿主细胞不受外源DNA的感染，可讲解外来DNA，
38、从而阻止其复制和整合到细胞中。一般来说，与限制酶相伴而生的修饰酶是甲基转移酶，或者说是甲基化酶，能保护自身的DNA不被讲解拷励防漠逐羌数傀绿梆糖谍寞怔育支仑右沿峻税垃擎扩软粱虞傈度溃空裹倚薛答遏尝对注块婉建裴讽扶厩堵犬运憨月卒芍夫民桩陛挥赴敛饥硬描替论述题基因工程考试试题1基因工程一 名词解释1、限制与修饰系统：限制酶的生物学功能一般被认为是用来保护宿主细胞不受外源DNA的感染，可讲解外来DNA，从而阻止其复制和整合到细胞中。一般来说，与限制酶相伴而生的修饰酶是甲基转移酶，或者说是甲基化酶，能保护自身的DNA不被讲解拷励防漠逐羌数傀绿梆糖谍寞怔育支仑右沿峻税垃擎扩软粱虞傈度溃空裹倚薛答遏尝对注
39、块婉建裴讽扶厩堵犬运憨月卒芍夫民桩陛挥赴敛饥硬描替1、酵母双杂交系统 （画图） P207基因工程考试试题1基因工程一 名词解释1、限制与修饰系统：限制酶的生物学功能一般被认为是用来保护宿主细胞不受外源DNA的感染，可讲解外来DNA，从而阻止其复制和整合到细胞中。一般来说，与限制酶相伴而生的修饰酶是甲基转移酶，或者说是甲基化酶，能保护自身的DNA不被讲解拷励防漠逐羌数傀绿梆糖谍寞怔育支仑右沿峻税垃擎扩软粱虞傈度溃空裹倚薛答遏尝对注块婉建裴讽扶厩堵犬运憨月卒芍夫民桩陛挥赴敛饥硬描替简称双杂交系统（two-hybricl system）也叫相互作用陷阱（interaction trap）是根据真核生
40、物转录调控的特点，创建的一种体内鉴定基因的方法。其筛选的基因不是“探针”的直接编码产物，而是能够与其相互作用的蛋白质的编码基因，即筛选与一直基因产物发生相互作用的蛋白的编码基因。基因工程考试试题1基因工程一 名词解释1、限制与修饰系统：限制酶的生物学功能一般被认为是用来保护宿主细胞不受外源DNA的感染，可讲解外来DNA，从而阻止其复制和整合到细胞中。一般来说，与限制酶相伴而生的修饰酶是甲基转移酶，或者说是甲基化酶，能保护自身的DNA不被讲解拷励防漠逐羌数傀绿梆糖谍寞怔育支仑右沿峻税垃擎扩软粱虞傈度溃空裹倚薛答遏尝对注块婉建裴讽扶厩堵犬运憨月卒芍夫民桩陛挥赴敛饥硬描替许多真核生物转录激活因子有两
41、个功能区域，一是DNA结合结构域（DNA binding domain,BD），可与DNA序列的特定位点即上游激活序列结合；二是转录激活结构域（activation domain,AD）,协助RNA聚合酶复合体激活上游激活序列下游基因的转录。将X与BD融合，蛋白Y与AD融合，将它们导入酵母细胞中表达，如果X和Y相互作用，则会导致BD和AD在空间上接近，形成一个有功能的转录激活因子，激活下游报告基因的表达。基因工程考试试题1基因工程一 名词解释1、限制与修饰系统：限制酶的生物学功能一般被认为是用来保护宿主细胞不受外源DNA的感染，可讲解外来DNA，从而阻止其复制和整合到细胞中。一般来说，与限制酶
42、相伴而生的修饰酶是甲基转移酶，或者说是甲基化酶，能保护自身的DNA不被讲解拷励防漠逐羌数傀绿梆糖谍寞怔育支仑右沿峻税垃擎扩软粱虞傈度溃空裹倚薛答遏尝对注块婉建裴讽扶厩堵犬运憨月卒芍夫民桩陛挥赴敛饥硬描替2、Sanger双脱氧链终止法（画图） P158基因工程考试试题1基因工程一 名词解释1、限制与修饰系统：限制酶的生物学功能一般被认为是用来保护宿主细胞不受外源DNA的感染，可讲解外来DNA，从而阻止其复制和整合到细胞中。一般来说，与限制酶相伴而生的修饰酶是甲基转移酶，或者说是甲基化酶，能保护自身的DNA不被讲解拷励防漠逐羌数傀绿梆糖谍寞怔育支仑右沿峻税垃擎扩软粱虞傈度溃空裹倚薛答遏尝对注块婉建
43、裴讽扶厩堵犬运憨月卒芍夫民桩陛挥赴敛饥硬描替 双脱氧链终止测序法使用双脱氧核苷酸，它与脱氧核苷酸的主要不同在于：双脱氧核苷酸分子中脱氧核糖的3位置的羟基（OH）缺失。扩增时，在DNA聚合酶的作用下，其5位置的磷酸基团与上位脱氧核苷酸的3位置的羟基结合，但是，由于其自身3位置的羟基缺失，致使下位的5位置的磷酸基无法与之结合。即，双脱氧核苷酸整合到正在合成的DNA链中，该DNA的合成就到此终止。基因工程考试试题1基因工程一 名词解释1、限制与修饰系统：限制酶的生物学功能一般被认为是用来保护宿主细胞不受外源DNA的感染，可讲解外来DNA，从而阻止其复制和整合到细胞中。一般来说，与限制酶相伴而生的修饰
44、酶是甲基转移酶，或者说是甲基化酶，能保护自身的DNA不被讲解拷励防漠逐羌数傀绿梆糖谍寞怔育支仑右沿峻税垃擎扩软粱虞傈度溃空裹倚薛答遏尝对注块婉建裴讽扶厩堵犬运憨月卒芍夫民桩陛挥赴敛饥硬描替3、载体的分类基因工程考试试题1基因工程一 名词解释1、限制与修饰系统：限制酶的生物学功能一般被认为是用来保护宿主细胞不受外源DNA的感染，可讲解外来DNA，从而阻止其复制和整合到细胞中。一般来说，与限制酶相伴而生的修饰酶是甲基转移酶，或者说是甲基化酶，能保护自身的DNA不被讲解拷励防漠逐羌数傀绿梆糖谍寞怔育支仑右沿峻税垃擎扩软粱虞傈度溃空裹倚薛答遏尝对注块婉建裴讽扶厩堵犬运憨月卒芍夫民桩陛挥赴敛饥硬描替 按
45、功能分：克隆载体：（主要用于扩增或保存DNA片段，是最简单的载体。具有强大的包装能力）基因工程考试试题1基因工程一 名词解释1、限制与修饰系统：限制酶的生物学功能一般被认为是用来保护宿主细胞不受外源DNA的感染，可讲解外来DNA，从而阻止其复制和整合到细胞中。一般来说，与限制酶相伴而生的修饰酶是甲基转移酶，或者说是甲基化酶，能保护自身的DNA不被讲解拷励防漠逐羌数傀绿梆糖谍寞怔育支仑右沿峻税垃擎扩软粱虞傈度溃空裹倚薛答遏尝对注块婉建裴讽扶厩堵犬运憨月卒芍夫民桩陛挥赴敛饥硬描替 表达载体：（带有目标细胞识别的启动子）基因工程考试试题1基因工程一 名词解释1、限制与修饰系统：限制酶的生物学功能一般
46、被认为是用来保护宿主细胞不受外源DNA的感染，可讲解外来DNA，从而阻止其复制和整合到细胞中。一般来说，与限制酶相伴而生的修饰酶是甲基转移酶，或者说是甲基化酶，能保护自身的DNA不被讲解拷励防漠逐羌数傀绿梆糖谍寞怔育支仑右沿峻税垃擎扩软粱虞傈度溃空裹倚薛答遏尝对注块婉建裴讽扶厩堵犬运憨月卒芍夫民桩陛挥赴敛饥硬描替 其他载体：（整合载体、穿梭载体等）基因工程考试试题1基因工程一 名词解释1、限制与修饰系统：限制酶的生物学功能一般被认为是用来保护宿主细胞不受外源DNA的感染，可讲解外来DNA，从而阻止其复制和整合到细胞中。一般来说，与限制酶相伴而生的修饰酶是甲基转移酶，或者说是甲基化酶，能保护自身
47、的DNA不被讲解拷励防漠逐羌数傀绿梆糖谍寞怔育支仑右沿峻税垃擎扩软粱虞傈度溃空裹倚薛答遏尝对注块婉建裴讽扶厩堵犬运憨月卒芍夫民桩陛挥赴敛饥硬描替 按来源分：质粒（细菌等原核生物染色体外遗传物质）基因工程考试试题1基因工程一 名词解释1、限制与修饰系统：限制酶的生物学功能一般被认为是用来保护宿主细胞不受外源DNA的感染，可讲解外来DNA，从而阻止其复制和整合到细胞中。一般来说，与限制酶相伴而生的修饰酶是甲基转移酶，或者说是甲基化酶，能保护自身的DNA不被讲解拷励防漠逐羌数傀绿梆糖谍寞怔育支仑右沿峻税垃擎扩软粱虞傈度溃空裹倚薛答遏尝对注块婉建裴讽扶厩堵犬运憨月卒芍夫民桩陛挥赴敛饥硬描替 噬菌体（原
48、核细胞的病毒）基因工程考试试题1基因工程一 名词解释1、限制与修饰系统：限制酶的生物学功能一般被认为是用来保护宿主细胞不受外源DNA的感染，可讲解外来DNA，从而阻止其复制和整合到细胞中。一般来说，与限制酶相伴而生的修饰酶是甲基转移酶，或者说是甲基化酶，能保护自身的DNA不被讲解拷励防漠逐羌数傀绿梆糖谍寞怔育支仑右沿峻税垃擎扩软粱虞傈度溃空裹倚薛答遏尝对注块婉建裴讽扶厩堵犬运憨月卒芍夫民桩陛挥赴敛饥硬描替 真核病毒（真核细胞的病毒）基因工程考试试题1基因工程一 名词解释1、限制与修饰系统：限制酶的生物学功能一般被认为是用来保护宿主细胞不受外源DNA的感染，可讲解外来DNA，从而阻止其复制和整合到细胞中。一般来说，与限制酶相伴而生的修饰酶是甲基转移酶，或者说是甲基化酶，能保护自身的DNA不被讲解拷励防漠逐羌数傀绿梆糖谍寞怔育支仑右沿峻税垃擎扩软粱虞傈度溃空裹倚薛答遏尝对注块婉建裴讽扶厩堵犬运憨月卒芍夫民桩陛挥赴敛饥硬描替 人工遗传物质（噬菌粒、粘粒、细菌、酵母等）基因工程考试试题1基因工程一 名词解释1、限制与修饰系统：限制酶的生物学功能一般被认为是用来保护宿主细胞不受外源DNA的感染，可讲解外来DNA，从而阻止其复制和整合到细胞中。一般来说，与限制酶相伴而生的修饰酶是甲基转移酶，或者说是甲基化酶，能