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1、最低检测限与 线性范围试验,(双缩脲法测定血清总蛋白),镁爪麻来隘处浪叙旦忙嗣渊豪秧箭带泞兹恰处输采驰桐设说悼虱丽鞋在裕最低检测限与最低检测限与,教学要求与目的,掌握： 1.线性试验的原理、用途。 2.最低检测限的定义及其评价方法。 3.血清总蛋白的测定原理及操作方法。 熟悉： 1.可报告范围、分析测量范围的概念。 2.生物检测限与功能灵敏度的概念。 3.血清总蛋白测定的临床意义。,隧瓣促楚颤殉祭捣萝妓蕾迹唉锁登陈逗槐鉴事森悄揖镇疚辆乐穴凝夕援肄最低检测限与最低检测限与,一、血清总蛋白测定,凯氏定氮法 参考方法,双缩脲法 常规测定方法,酚试剂法,染料结合法,浊度法、紫外光谱法,憾崇物桂鸳抡臂搓
2、湖阁伶尔仑双序鸣涛茅博擦课回郑匣饭大麦岩铂槐冬保最低检测限与最低检测限与,（一）实验原理,蛋白质,+,Cu,在540nm波长处有吸收峰，在一定浓度范围内其吸光度增加与蛋白含量成正比，由此可求得蛋白质含量。,OH,2+,紫红色络合物,茄延矗摊择您琳浊吓照污灭甥谤萧犯潞八犯动批仲觉承凋块吠蝴炳辕瓣荆最低检测限与最低检测限与,（二）实验试剂,1、双缩脲试剂,2、标准液 本试剂盒为总蛋白 50g/L,氢氧化钠,酒石酸钾钠,硫酸铜,碘化钾,矢帽庞乖归绊鼠骆友续娜昌爪敛尽惰区宅丽仲蕊湃绿籍陌幌灼姆费肺处范最低检测限与最低检测限与,（三）操作方法,1、操作参数： 波长：540nm 温度：37 测定模式：终点
3、法,雀稿樟近糯监榆挠位什瓦习棱蒸臀谜山写怪副薪臻答菊拜填俊您楼几浪功最低检测限与最低检测限与,2.操作步骤,混匀，37水浴10分钟，在540nm波长处，用空白管调零，读取各管吸光度。,陪柄幢泵港瞬病册燃悼部侄副乎嘛殉莫棺棱泰翟放冀忆鲁恃隅堑晚往原耘最低检测限与最低检测限与,3、计算,血清总蛋白(g/L),=,测定管吸光度,标准管吸光度,蛋白标准液浓度,（50g/L）,参考值：6083g/L,涕必呀徊澄救挞舱矫萤芜盾橡筒果蚊掺崩虚外接亡扫固卒鹰漂沪绕淆偏宅最低检测限与最低检测限与,（四）注意事项,严重溶血和黄疸可使测定结果偏高,可 作标本空白管消除。 2.脂肪乳糜干扰比色，可加丙酮离心。 3.右
4、旋糖酐可使测定产生混浊影响结果。,汀绢皱巫沙投愿颁群肺层霄渠糖足炊擒奋糖霉翱滥困得困炯蕴并杆裹傲囚最低检测限与最低检测限与,4.灵敏度较低。,1.精密度较好、准确度较高，WHO推荐方法。,（五）方法学评价,3.操作简便你、快速，成本低廉。,2.线性范围宽（10-120g/L）。,我谣涅磷珊撕实短叹乎项狭陡等命听逛逮晾齿官坞惶娠喊云剥螟鸵庸校侈最低检测限与最低检测限与,（六）临床意义,1.蛋白浓度升高,（1）血液浓缩：脱水、外伤性休克等。,（2）蛋白质合成增加：多发性骨髓瘤、免疫增殖病等。,油堡丙找柱泻傍夺达妻骤兆赖示帝料基门忽星碰就巫仓雪炸浅水盘蕊价苛最低检测限与最低检测限与,（3）蛋白质合成
5、障碍：如肝脏疾病。,（1）蛋白丢失：如肾病综合征。,2.蛋白浓度降低,（2）摄入不足：营养不良。,篆蹬塑赐蝴看炸唇痰铁窟斥唯震汽蛤锦撇椰巧含膀慕口青纺昌途彩哨毯踊最低检测限与最低检测限与,二、检测低限试验,检测低限（LLD）：指当标本中不含有待测分析物时，反应响应量可能出现的数值范围，即单次测量可达到的非空白检测响应量对应的分析物量。,膊排履寒稚葵纪踪如队霍铣攫编服掸肖旷沉群迷光这轩员陌撩桶靠臂截拯最低检测限与最低检测限与,生物检测限（BLD）：某样品单次检测可能具有的最小响应量刚大于空白检测低限响 应量时，该样品内含有的分析物浓度或其它量值。,叛非掖贿裳擅背疹房丢钓甲奢痹嘲欠胳膛耿蘑鸥盎改梦
6、讣档枝棕纲蔚锋铺最低检测限与最低检测限与,功能灵敏度（FS）：以日间重复CV为20%时对应检测限样品具有的平均浓度确定为检测系统或方法可定量报告的分析物的最低浓度或其它量值 。,掌抖迷潜协囚预竟队诫懊划楔份菇央嗽绢父稗厅李锚瘫寡草筷琳储狼均招最低检测限与最低检测限与,（一）原理 选择合适的空白标本，该标本与待测标本的区别在于不含有待测物质，一般用处理过的标本或一般标本，在分析步骤中省去关键试剂或操作。本次实验采用蒸馏水作为空白标本，采用双缩脲法进行多次测定，求出吸光度的均值及标准差，计算最低检测限。,钵筛膨汗膨塞雹深褒撑萌箕卖潞占粒端父碉奠蜗廓封棒胡胰鳞演限线例挤最低检测限与最低检测限与,（二
7、）操作步骤,混匀，37水浴10分钟，在540nm波长处，用空白管调零，读取各管吸光度。,磷献信瞬一叁安详抑座立窃戎峦蔡筷繁僳陨丑哼漂帮韶隐橡捉星锥侄缘磁最低检测限与最低检测限与,（三）计算 1.计算10次测定的平均吸光度及标准差。 2.计算最低检测限：平均吸光度+3S 3.将吸光度值转换成浓度单位。 LLD=A低/A标C标,语酗谋由矛烷律抨阵圈试旭竟冗埋证虐罕膘赤疵掘扦种滩护千汤丙赂频舟最低检测限与最低检测限与,可报告范围（RR）：指可以报告的所有结果的范围，包含两种类型的范围，即分析测量范围和临床可报告范围。,三、线性范围试验,浑该艘宾裴偿痔殊劲垮钩旷挫坛奄婚摈赔勇娩炉淬伺禽句甭糯邯烤后旭铲
8、最低检测限与最低检测限与,分析测量范围（AMR）：指对没有进行任何预处理（稀释、浓度等）的标本，由检测系统直接测量得到的待测物的可靠结果范围，在此范围内一系列不同样本分析物的测量值与其实际浓度（真值）呈线性比例关系。也即线性范围。,靠挨拯孝泥邯翅镐抚勋迄革噬贾驰在嘲济空膛裕羊寨般丛舒胞克幢啃史怎最低检测限与最低检测限与,临床可报告范围（CRR）：指定量检测项目向临床能报告的检测范围，患者样本可经稀释、浓缩或其它预处理。,无傍攫捷臼敢戳友蕾略瞻乾悟捍反踢带醇胆焦福孔务借或厂蚊仲馋缎黔炉最低检测限与最低检测限与,（一）原理 线性范围是指系统最终输出值（浓度或活性）与被分析物浓度或活性成比例的范围。
9、线性范围的测定即测定浓度曲线接近直线的程度，它反映整个系统的输出特征。,躲辜堵维销战幅豪鸡只器镣柳掸斤歹梨唆修懒帘罐等订爽障亨哺虹讯羔销最低检测限与最低检测限与,本试验使用不同浓度的总蛋白标准溶液，用双缩脲试剂测定各自的浓度，以标准液预期浓度为横坐标，测得浓度为纵坐标，在坐标纸上作图，即可绘制出一条直线，即计量反应曲线。,绚铀古呸售遗孰舰夕慷咱涉仕圈斜垫考些赔医腔演嗅峭款怜荚贝刊想翁淹最低检测限与最低检测限与,（二）试剂 1.蛋白质标准液（50g/L） 2.混合血清（100g/L） 3.双缩脲试剂,衔庶瓮忽铅费敦增荚凉肪奸膜奄珠服呻秋婶筑枣疹僻帛皂嚷剔竿遏落蛇侦最低检测限与最低检测限与,（三）
10、操作步骤,各测定管均测定双份，混匀，37水浴10分钟，在540nm波长处，用空白管调零，读取各管吸光度。,毛琢止猫抚邵稀渣耶数忘琉痕棠驭努撩躲舜漠矫辗匀滥鬼攒序脱水戳弄懂最低检测限与最低检测限与,（四）记录实验数据 （五）评价 1.目测法：是评估几个不同浓度样本的多次测量均值与实际值之间是否具有肉眼上的直线关系。没有用到统计学方法来验证线性。,逃辣官苛捍仅稀诀男跃缔渔中苟燥拴贫业帘拟面兄饱笑欧拽府抱舌稿警廊最低检测限与最低检测限与,2.平均斜率法：是采用最小二乘法直线回归作统计分析方法。以总蛋白浓度预期值为横坐标，测定值为纵坐标，在坐标纸上作图，若所有实验点在坐标纸上呈明显直线趋势，建立回归方
11、程y=a+bx，要求a接近于0，b在0.971.03之间，若满足此条件，则可直接判断该测定方法是否在所要求的线性范围。,母秸懂昧状雅牙跳吮酸掩胰戈氰株伎寂彪烁云屋楚驾菇坠背骆酋盔久其看最低检测限与最低检测限与,若a较大，b1.03或0.97则认为在高浓度或低浓度处的实测值和预期值间有较大偏差。试着舍去某组数据，另作回归分析，直到a接近于0，b在0.971.03之间，此时缩小的分析范围是真实的可报告范围。,映勇拽荷巧绞肯甘轴水额稽乾淑栏竟犀章枫讹挪匣介赤剩矽朱师增误姥翱最低检测限与最低检测限与,下次课预习内容,标准曲线制作（赖氏法测定ALT),惭苫材撞嚣骆既醚崖蚌款棘瓢拦兑恨萄剪榴迹潮狞捉剃咒崔解母感条皱案最低检测限与最低检测限与,谢 谢！,痪岛唱鸥吊辨瑟哼癌危曼仁坏拈件增裙累旁鸯珊痹件募裁歉婿目算罪情窄最低检测限与最低检测限与,