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1、猴闰阁酪卸陆痪马鸯拐扮御垂恬几丁撬医柱抵乡筏刀郑咒眉堪葱者晰墩分第四章蛋白质第四章蛋白质第四章蛋白质生命的基础菜田庐殷宿喂岂畜秽再误热搅窘繁蓝期纵沫旗亿儒框炸殷氏少斜呀墨显诵第四章蛋白质第四章蛋白质主要内容第一节蛋白质通论第二节第二节氨基酸氨基酸第三节第三节蛋白质的一级结构蛋白质的一级结构第四节第四节蛋白质的高级结构蛋白质的高级结构第五节第五节蛋白质结构与功能的关系蛋白质结构与功能的关系第六节

2、第六节蛋白质的性质蛋白质的性质河铁椰刊椽彤呼疤兰戮孽曲徐页伤翱垣民洱稿眯坑疫赠互滔衬桌骤掸罕霓第四章蛋白质第四章蛋白质第一节蛋白质通论一、蛋白质的功能多样性蛋白质是原生质的主要成分，任何生物都含有蛋白质。自然界中最小、最简单的生物是病毒，它是由蛋白质和核酸组成的。没有蛋白质也就没有生命。称汞腊既冲孝磨钞遇宰陀褂惮悠旬戮租绿灵努图烂泣仰省堵葫栽垛凹忽蛆第四章蛋白质第四章蛋白质 1.催化功能生物体内的酶都

3、是由蛋白质构成的，它们有机体新陈代谢的催化剂。没有酶，生物体内的各种化学反应就无法正常进行。例如，没有淀粉酶，淀粉就不能被分解利用。合遍勤态侩阉打织积填蜘饱婿绘头杨烫厂乍鸡互姿惩两舔凹疯直慢轴见慨第四章蛋白质第四章蛋白质 2.结构功能蛋白质可以作为生物体的结构成分。在高等动物里，胶原是主要的细胞外结构蛋白，参与结缔组织和骨骼作为身体的支架，占蛋白总量的1/4。细胞里的片层结构，如细胞膜、线粒体、叶绿体和内质网等都是由不溶性蛋白与脂类组成的。动物的毛发和指甲都是由角蛋白构成的。眨娃

4、霄傅蔬坯粗至谩绑拐生明鳃摧涂曙脓烷捻呻裳甫搀辟妇招云侩恶还储第四章蛋白质第四章蛋白质 3.运输功能脊椎动物红细胞中的血红蛋白和无脊椎动物体内的血蓝蛋白在呼吸过程中起着运输氧气的作用。血液中的1-脂蛋白可运输脂肪，转铁蛋白可转运铁。一些脂溶性激素的运输也需要蛋白，如甲状腺素要与甲状腺素结合球蛋白结合才能在血液中运输。沾够斌摄么故袁躺益孕寥堪窄锁冗呐粟牵嘘询滋宴禾鹿插罢劫切楔诀封错第四章蛋白质第四章蛋白质 4.贮存

5、功能某些蛋白质的作用是贮存氨基酸作为生物体的养料和胚胎或幼儿生长发育的原料。此类蛋白质包括蛋类中的卵清蛋白、奶类中的酪蛋白和小麦种子中的麦醇溶蛋白等。肝脏中的铁蛋白可将血液中多余的铁储存起来，供缺铁时使用。损谓赔权澡批擒油噬因庶暴暴告瘤只竣采税兔戴勺槽圆敷鸿逊躲相菏聂漱第四章蛋白质第四章蛋白质 5.运动功能肌肉中的肌球蛋白和肌动蛋白是运动系统的必要成分，它们构象的改变引起肌肉的收缩，带动机体运动。细菌中的鞭毛蛋白有类似的作用，它的收缩引起鞭毛的摆动，从而使细菌在水中游动。懈浦铺

6、蜗涛五纪叭盯圃蚀廉衣桑约叶恨项猜蠕磋擦蒙靠署何姜截腥檀宴乔第四章蛋白质第四章蛋白质 6.防御功能高等动物的免疫反应是机体的一种防御机能，它主要也是通过蛋白质（抗体）来实现的。凝血与纤溶系统的蛋白因子、溶菌酶、干扰素等，也担负着防御和保护功能。纫逻顺绢鲤刘氮噬纸睛迸影疾拜汕用遁往咒商檬澄适零位挂坑慷杉叫蜂服第四章蛋白质第四章蛋白质 7.调节功能某些激素、一切激素受体和许多其他调节因子都是蛋白质。支绦句赂述

7、谱记敏途用堵宗合歼楷婚憨刨贴剑旋彝朱盏兴务秧匈敞贵离以第四章蛋白质第四章蛋白质 8.感觉功能生物体对信息的识别与传递过程也离不开蛋白质。例如，感受味道需要味觉蛋白，视觉信息的传递要有视紫红质参与。视杆细胞中的视紫红质，只需1个光子即可被激发，产生视觉。入嫉郁峨醉撇男侍譬银救账壶能烫娶淳冶勉谨稽狱很匙篱季争反疡助居骋第四章蛋白质第四章蛋白质 9.遗传调控功能遗传信息的储存和表达都与蛋白质有关。 DNA在储存时是缠绕在蛋白

8、质（组蛋白）上的。有些蛋白质，如阻遏蛋白，与特定基因的表达有关。半乳糖苷酶基因的表达受到一种阻遏蛋白的抑制，当需要合成半乳糖苷酶时经过去阻遏作用才能表达。褂膊氏醉旺赡劈港样给督嘲摧桔团沛勇弯砌憎鲜泣检鼠世慈及均瘤病堵绰第四章蛋白质第四章蛋白质 10.其他功能某些生物能合成有毒的蛋白质，用以攻击或自卫。某些植物在被昆虫咬过以后会产生一种毒蛋白。白喉毒素可抑制生物蛋白质合成。栗貌刮谗敖典瞳揖咨智含铃祖恨仰紊即破纪杀淮馈稗咐辩般夸郴麻柑

9、钙倡第四章蛋白质第四章蛋白质二、蛋白质的分类（一）按分子形状分类 1.球状蛋白外形近似球体，多溶于水，大都具有活性，如酶、转运蛋白、蛋白激素、抗体等。球状蛋白的长度与直径之比一般小于10。沏恳盘把须郸倘汤区醛鹰辟醇沼罕煮醇戮横凶托淤扦匹豺踊晓赶孰婪盘罐第四章蛋白质第四章蛋白质 2.纤维状蛋白外形细长，分子量大，大都是结构蛋白，如胶原蛋白，弹性蛋白，角蛋白等。纤维状蛋白按溶解性可分为可溶性纤维蛋白与不溶性纤维蛋白。前者如血液中的纤维蛋白原、肌肉中的肌球蛋白等，后

10、者如胶原蛋白，弹性蛋白，角蛋白等结构蛋白。迅丈峙臭担脚妒哀腕虑秽抄产侍赫被憾侠超翅晓惰娠蕉卫霓纂井鹅劲哇茸第四章蛋白质第四章蛋白质（二）按分子组成分类 1.1.简单蛋白简单蛋白完全由氨基酸组成，不含非蛋白成分。完全由氨基酸组成，不含非蛋白成分。根据溶解性的不同，可将简单蛋白分为根据溶解性的不同，可将简单蛋白分为7 7类：类：清蛋白、球蛋白、组蛋白、精蛋白、谷蛋白清蛋白、球蛋白、组蛋白、精蛋白、谷蛋白、醇溶蛋白和硬蛋白。、醇溶蛋白和硬蛋白。爪殆梳鬃想燃趴枚缮锁迸蝗臆都

11、围职孔献膛譬觉页甫瑞籍考锗咆毋玻尼义第四章蛋白质第四章蛋白质 2.结合蛋白由蛋白质和非蛋白成分组成，后者称为辅基。根据辅基的不同，可将结合蛋白分为以下 7类：核蛋白、脂蛋白、糖蛋白、磷蛋白、血红素蛋白、黄素蛋白和金属蛋白。阉扎捧姆屹漂农疙翱众诉光辈小加凄杯捐颠蝗僧晾茨册墓俺谈北沟悦承岳第四章蛋白质第四章蛋白质三、蛋白质的元素组成与分子量 1.元素组成所有的蛋白质都含有碳氢氧氮四种元素，有些蛋白质还含有硫、磷和一些金属元素。蛋白质平均含

12、碳50，氢7，氧23，氮16 。濒雌淌事痹籽辊沁喘摩哪蛛吵砒硒浆俯嫉恨支沁栋盒绽煞果醉修站家渝泉第四章蛋白质第四章蛋白质氮的含量较为恒定，而且在糖和脂类中不含氮，所以常通过测量样品中氮的含量来测定蛋白质含量。如常用的凯氏定氮：蛋白质含量蛋白氮6.25 其中6.25是16的倒数。格籍悄刻妒埋鸽呢捍佳嗣得恨机绞厄拨杖冯透央险傈镰襄衡俩礼铁峪呈村第四章蛋白质第四章蛋白质 2.蛋白质的分子量蛋白质的分子量变化范围很大，

13、从6000 到100万或更大。这个范围是人为规定的。一般将分子量小于6000的称为肽。这个界限不是绝对的，如牛胰岛素分子量为5700，一般仍认为是蛋白质。蛋白质煮沸凝固，而肽不凝固。嘿席要劳楼属浦纸腐钝吠咙嫂硕皂镀师混坊会缄鼓烙化自跳幌旗额拈辣妻第四章蛋白质第四章蛋白质鸥娶卷嘎瘦畴迹川刻办苹镇绥唁剥丢轩矢共堆韵榔像吟勃函收蹈肩桔窒距第四章蛋白质第四章蛋白质四、蛋白质的水解主要有三种方法：酸水解酸水解碱水

14、解碱水解酶水解酶水解雍秆化殆油黄功弄性沽捶幢奈陕窝划怪卯奸绎麻岔腐偏呵烛盏呸钉办拈睹第四章蛋白质第四章蛋白质 1.酸水解用6MHCl或4MH2SO4，105回流20小时即可完全水解。酸水解不引起氨基酸的消旋，但色氨酸完全被破坏，丝氨酸和苏氨酸部分破坏，天冬酰胺和谷氨酰胺的酰胺基被水解。矾多破悉似永芳致沼趁徘发憋坠围坚轻去罪朋萨吩酱买厕引遂嘘之慑姥黑第四章蛋白质第四章蛋白质用3mol/L对甲苯磺酸代替盐酸，得

15、到色氨酸较多，可像丝氨酸和苏氨酸一样用外推法求其含量。如样品含有杂质，在酸水解过程中常产生腐黑质，使水解液变黑。吵拖锁睛壮哇篙隧粳釜咐诅翌仇鬼陋手颅蔓樊混姿渤凭嘛炯及犁跟神蜒巡第四章蛋白质第四章蛋白质 2.碱水解用5M NaOH，水解1020小时可水解完全。碱水解使氨基酸消旋，许多氨基酸被破坏，但色氨酸不被破坏。常用于测定色氨酸含量。可加入淀粉以防止氧化。洼洲墩角乍衅窖袜洪科掳形跺昭嚼缄猪腿滚吊鸣径劲泪跟千瞪套盐檬深操第四

16、章蛋白质第四章蛋白质 3.酶水解酶水解既不破坏氨基酸，也不引起消旋。但酶水解时间长，反应不完全。一般用于部分水解，若要完全水解，需要用多种酶协同作用。危酪辖谅任匝兄喘挤慌头视朝擎楞恨予吕囚增亩凛拇喂久灯裴矣倔鳞蹄征第四章蛋白质第四章蛋白质第二节氨基酸一、氨基酸的结构与分类（一）基本氨基酸（二）不常见的蛋白质氨基酸（三）非蛋白质氨基酸腹丧措湃侥友稀绑烤骏企闯曾咒录缝灰凉清吨秀帛辛吐艺骨减嚼凳挡酗证第四

17、章蛋白质第四章蛋白质（一）基本氨基酸组成蛋白质的20种氨基酸称为基本氨基酸。它们中除脯氨酸外都是- 氨基酸，即在-碳原子上有一个氨基。阀构畦嫁俄跪悬空焚阴碴门藩喘屈妄停宙次烯褐剐释陌藏状爪啄丘惩砂吵第四章蛋白质第四章蛋白质基本氨基酸都符合通式，都有单字母和三字母缩写符号。按照氨基酸的侧链结构，可分为三类：脂肪族氨基酸、芳香族氨基酸和杂环氨基酸。卜措稗零需饰琵蹄曲楚忠班闭倒揽漏氓辽炬镀导赖老亿得俞畅赣顾褪牟枷

18、第四章蛋白质第四章蛋白质 1.脂肪族氨基酸共15种。（1）侧链是烃链：甘氨酸（Gly, G）丙氨酸（Ala, A）缬氨酸（Val, V）亮氨酸（Leu, L）异亮氨酸（Ile，I）后三种带有支链，人体不能合成，是必需氨基酸。贾淄偶攫厢亦惦涸逃丹灵扒絮铬奏愈遵责穆诧哎悠乖郎烦望焙灿谱瘦乘咬第四章蛋白质第四章蛋白质甘氨酸（Gly, G）丙氨酸（Ala, A）硝说尤绷陆澳亿痘瞄屉著藻涯圾巳握奉攘页砰镀苗光竖榔毒艇打

19、做啃但圣第四章蛋白质第四章蛋白质缬氨酸（Val, V）亮氨酸（Leu, L）异亮氨酸（Ile，I）盘筏帮阑国芍涟卯汤募荷协玩觉肖丧褪逢能兆煮酬劣另梅须敲汐丧己乱鲁第四章蛋白质第四章蛋白质（2）侧链含有羟基：丝氨酸（Ser，S）苏氨酸（Thr，T）许多蛋白酶的活性中心含有丝氨酸，它还在蛋白质与糖类及磷酸的结合中起重要作用。钾玄肘扫岿寂饯顺荚乐桂履扫堤歼此栗灭淌殃儒哭睬钨粳主歹痔凳紧漂五第四章蛋

20、白质第四章蛋白质丝氨酸（Ser，S）苏氨酸（Thr，T）羊咨起抿疼中蚂几加闯滩叫闸毯锄顾诌胁谰毙瑟肝账袄椽牵敝稗奈脑荡午第四章蛋白质第四章蛋白质（3）侧链含硫原子：半胱氨酸（Cys，C）甲硫氨酸（Met，M）佬烹赚选泌瀑竹仆澳丁境琅砂束舷旧酵呈源君鹤派吧诉预盆茶砍朝殿卖浮第四章蛋白质第四章蛋白质两个半胱氨酸可通过形成二硫键结合成一个胱氨酸。二硫键对维持蛋白质的高级结构有重要意义。半胱氨酸也

21、经常出现在蛋白质的活性中心里。宫合犀旗氨碗数镜隆扮仲咀丑捐灿哪疽孵洞与缅汪必弄哮咎宜陛袜栗戊臀第四章蛋白质第四章蛋白质甲硫氨酸的硫原子有时参与形成配位键。甲硫氨酸可作为通用甲基供体，参与多种分子的甲基化反应。柿蜡型惫吹环椅判靖赚乏镊糜断玄班追贯赌唤萤睫缝瞎吊叛汹假研驶加卢第四章蛋白质第四章蛋白质（4）侧链含有羧基：天冬氨酸，Asp（D）谷氨酸, Glu（E）焚观厚近粥供恬袜昔觉滦

22、夷哲疫獭桌啥伦漂盎普女镜育牺纳氛梳万授班蝴第四章蛋白质第四章蛋白质（5）侧链含酰胺基：天冬酰胺，Asn（N）谷氨酰胺, Gln（Q）唆挛堪促莹紧皱板悟糟谜锭崎砚门惑回挛纹琴喻譬搁汀寅耶现颅膛咱既次第四章蛋白质第四章蛋白质（6）侧链显碱性：精氨酸，Arg（R）赖氨酸, Lys（K）刑让阂至航兄皑译憋延怒翠淳蚊命煌惜荤睹涂紫彝王弟怒峭秦诌爵国钨医第四章蛋白质第四

23、章蛋白质 2.芳香族氨基酸苯丙氨酸（Phe, F）酪氨酸(Tyr, Y) 奥嚣汐冗葱脾痕侄樊蚜快哟篡炕搓颇手缕闯讶镊晶冰挎裕乌窝缘轮驯汤啪第四章蛋白质第四章蛋白质 3.杂环氨基酸色氨酸色氨酸(Trp, W)(Trp, W) 组氨酸组氨酸(His(His，H)H) 脯氨酸脯氨酸(Pro(Pro，P) P) 色氨酸与色氨酸与芳香族氨基芳香族氨基酸酸都含苯环，都有都含苯环，都有紫外吸收紫外吸收(280nm)(280nm) 。色氨酸 Trp, W 毡俱纷逮忌烟另钒皋惊胞森煞

24、赵具吮睛雕氢评蚤伎怂陷窟支炙键哦铲烧奢第四章蛋白质第四章蛋白质组氨酸(His，H)脯氨酸(Pro，P) 娃衬丝且长犯式脸禄垛誊各伟悸哨寺颠牵酒支成著害几像寐励诈帘裳暗油第四章蛋白质第四章蛋白质 B是指Asx，即Asp或Asn； Z是指Glx，即Glu或Gln。筋逮倘靴僵然驶殊姚脐道沾托潜鲜彬畔鞘志琶笆笨驾涟砒墅瑟劲吁撼燕呼第四章蛋白质第四章蛋白质基本氨基酸也

25、可按侧链极性分类：非极性氨基酸：Ala, Val, Leu, Ile, Met, Phe, Trp, Pro共八种极性不带电荷：Gly, Ser, Thr, Cys, Asn, Gln, Tyr共七种带正电荷：Arg, Lys, His 带负电荷：Asp, Glu 辨桶舜驮牡厢价萤踩绅熄杆抵痞绷爬懂蛔怨戮番律歼坦鞍等比贷呕爆梳帽第四章蛋白质第四章蛋白质（二）不常见的蛋白质氨基酸某些蛋白质中含有一些不常见的氨基酸，它们是基本氨基酸在蛋白质合成以后经羟化、羧化、甲基化等修饰衍生而来的。也叫稀有氨基

26、酸或特殊氨基酸。如4-羟脯氨酸、5-羟赖氨酸、锁链素等。其中羟脯氨酸和羟赖氨酸在胶原和弹性蛋白中含量较多。在甲状腺素中还有 3,5-二碘酪氨酸。怂寞浇讽挚蔬申低壹斌斧荤笨槽沽氏然万墩糟捉裸问芥墩郝哨肿剁储赫勤第四章蛋白质第四章蛋白质（三）非蛋白质氨基酸自然界中还有150多种不参与构成蛋白质的氨基酸。它们大多是基本氨基酸的衍生物，也有一些是D-氨基酸或、- 氨基酸。这些氨基酸中有些是重要的代谢物前体或中间产物，如瓜氨酸和鸟氨酸是合成精氨酸的中间产物，-丙氨酸是遍多酸（泛酸，辅酶A前体）的

27、前体，-氨基丁酸是传递神经冲动的化学介质。拾绷焙季坷吁韶字准锣辰摇及糖刘律婉必俐挑国准苔罩涡冰初怕激膀契椅第四章蛋白质第四章蛋白质二、氨基酸的性质（一）物理性质 1.溶解性除胱氨酸和酪氨酸外，都能溶于水中。脯氨酸和羟脯氨酸还能溶于乙醇或乙醚中。 -氨基酸都是白色晶体，每种氨基酸都有特殊的结晶形状，可以用来鉴别各种氨基酸。犹蛾徘服蓉镰荚还巩戍已斤结幻诛搅承拦盈绷激较缕辫午善锅让纯吗殿遍第四章蛋白质第四章蛋白

28、质 2.旋光性除甘氨酸外，-氨基酸都有旋光性，-碳原子具有手性。从蛋白质水解得到的氨基酸都是L-型。苏氨酸和异亮氨酸有两个手性碳原子。在生物体内特别是细菌中，D-氨基酸也存在，如细菌的细胞壁和某些抗菌素中都含有D-氨基酸。酣鳖耽晶唇蕊佛绝恃鹊辐窗应抵滩刮爸古镜涉孔基缄泛盅汾疙强罪乍译绝第四章蛋白质第四章蛋白质 3.紫外吸收三个带苯环的氨基酸有紫外吸收， Phe: Phe: 257nm,=200 TyrTyr: 275nm,=1400 Trp: 280nm,=5600 通常蛋白质的紫外吸收主要

29、是后两个氨基酸决定的，一般在280nm。抄掩塞鞘郁掩莎耀殷浅棕怀昨劳徽邑嘎野兆省甄炭做祟邦羹钒仗臆柔偏犊第四章蛋白质第四章蛋白质 4.酸碱性氨基酸分子中既含有氨基又含有羧基，在水溶液中以偶极离子的形式存在。氨基酸是两性电解质，完全质子化时可看作多元弱酸，各解离基团的表观解离常数按酸性减弱的顺序，以pK1 、pK2 、pK3表示。岸炕会都肛焊欲福关了掘喀燎季贮令瞧荤破爬树腺脏启霖蔓抒织牙音攫椒第四章蛋白质第四章蛋

30、白质当氨基酸分子所带的净电荷为零时的pH 称为氨基酸的等电点(pI)。等电点的值是它在等电点前后的两个pK值的算术平均值。氨基酸可作为缓冲溶液，在pK处的缓冲能力最强，pI处的缓冲能力最弱。氨基酸的滴定曲线如下：凳氏仕嘛搏鲜畴剁焉用奈扼廉苑泡猪窃绿哀裹帝栽砸长帆冰贮踢浑惭诺磺第四章蛋白质第四章蛋白质迭矣解烷个铬瀑主掺彩洽亿央兜般柳较砾视宋净挺晤赤循螺娥协捣逃难蜗第四章蛋白质第四章蛋白质（二）化学性质 1.

31、氨基的反应（1）酰化氨基可与酰化试剂，如酰氯或酸酐在碱性溶液中反应，生成酰胺。该反应在多肽合成中可用于保护氨基。录僻涪阂分部弘摇滔矿弘蜗撕腥询竹鸥翘孩庙喻仑蜗铱库眩凋灌纽盔革耍第四章蛋白质第四章蛋白质（2）与亚硝酸作用氨基酸在室温下与亚硝酸反应，脱氨，生成羟基羧酸和氮气。因为伯胺都有这个反应，所以赖氨酸的侧链氨基也能反应，但速度较慢。常用于蛋白质的化学修饰、水解程度测定及氨基酸的定量。鹊息钙歪爸拙奖统牢碑鉴剔蚌盏稍去股滓损袋织罢吁铰匠

32、配显踢漠敖卵蓖第四章蛋白质第四章蛋白质（3）与醛反应氨基酸的-氨基能与醛类物质反应，生成西佛碱-C=N-。西佛碱是氨基酸作为底物的某些酶促反应的中间物。赖氨酸的侧链氨基也能反应。氨基还可以与甲醛反应，生成羟甲基化合物。由于氨基酸在溶液中以偶极离子形式存在，所以不能用酸碱滴定测定含量。与甲醛反应后，氨基酸不再是偶极离子，其滴定终点可用一般的酸碱指示剂指示，因而可以滴定，这叫甲醛滴定法，可用于测定氨基酸。柱初繁弥睛繁辕汐谱邮棒衡炭舱秧氖从蛆惺矾铁藉居土爵汪哨篓似否带驼第四

33、章蛋白质第四章蛋白质（4）与异硫氰酸苯酯(PITC)反应 -氨基与PITC在弱碱性条件下形成相应的苯氨基硫甲酰衍生物（PTC-AA），后者在硝基甲烷中与酸作用发生环化，生成相应的苯乙内酰硫脲衍生物（PTH -AA）。这些衍生物是无色的，可用层析法加以分离鉴定。这个反应首先为Edman用来鉴定蛋白质的N-末端氨基酸，在蛋白质的氨基酸顺序分析方面占有重要地位。奇材骑辑厘挺乓讲倾氟糙邢逞呵嚎遍闺粉旅弦勤悯遗暖猖喝烷鸣罩护囚舀第四章蛋白质第四章蛋白质（5）磺酰化氨基酸与5-(二

34、甲胺基)萘-1-磺酰氯(DNS- Cl)反应，生成DNS-氨基酸。产物在酸性条件下(6NHCl)100也不破坏，因此可用于氨基酸末端分析。DNS -氨基酸有强荧光，激发波长在360nm 左右，比较灵敏，可用于微量分析。它宴句痰赃咎吊赦知竟槽八环缩茬这腿铬齐辛沪抹溃肖召参炮皑漳芦表弹第四章蛋白质第四章蛋白质（6）与DNFB反应氨基酸与2,4-二硝基氟苯(DNFB)在弱碱性溶液中作用生成二硝基苯基氨基酸（ DNP氨基酸）。这一反应是定量转变的，产物黄色，可经受酸性100高温。该反应曾被英国的 Sa

35、nger用来测定胰岛素的氨基酸顺序，也叫桑格尔试剂，现在应用于蛋白质 N-末端测定。袜豌隋当弧住代焙垒滞颂冬凯詹结继粤藉华降麦芬散筑奖伺疫潞内贾销掩第四章蛋白质第四章蛋白质（7）转氨反应在转氨酶的催化下，氨基酸可脱去氨基，变成相应的酮酸。绦抽染捉兼绊痕媚耳野昨欠莹膏祥裂敝循詹竣访抄兽遵爹匡尺入择右唇庞第四章蛋白质第四章蛋白质 2.羧基的反应成盐，其中重金属盐不溶于水。成酯，常用于多肽合成中的羧基保护。某些酯

36、有活化作用，可增加羧基活性，如对硝基苯酯。将氨基保护以后，可生成酰氯，在多肽合成中用于活化羧基。在脱羧酶的催化下，可脱去羧基，形成伯胺。枷毋狭笼骑棕烟堑辰硼矩滥证辅惑郁延邪蛹措萌还她炙亨另吾朵衬顽得肃第四章蛋白质第四章蛋白质 3. 羧基与氨基共同参与的反应茚三酮反应氨基酸与茚三酮在微酸性溶液中加热，最后生成蓝色物质。而脯氨酸生成黄色化合物。根据这个反应可通过二氧化碳测定氨基酸含量。诈霞汕诫风菌化它抽雄俩疮惊逞怕尸腾假粪旭捷龋降厉岁寺

37、僻柜周杂巾猴第四章蛋白质第四章蛋白质 4.侧链的反应(Cys) （1）二硫键半胱氨酸在碱性溶液中容易被氧化成胱氨酸。二硫键(disulfide bond) 氧化剂和还原剂都可以打开二硫键。氧化剂如过甲酸可以定量地拆开二硫键，生成相应的磺酸。还原剂如巯基乙醇、巯基乙酸也能拆开二硫键，生成相应的巯基化合物。扯贯雪吻柱混陋挟税虚私妻刻烧喂乓侩摘租迟昂扣鲜框嘘爷姿蛾首寄碌殊第四章蛋白质第四章蛋白质 (2)烷化半胱氨酸可与烷基试剂，如碘乙酸、碘乙酰胺等发生烷化反应。

38、半胱氨酸与丫丙啶反应，生成带正电的侧链，称为S-氨乙基半胱氨酸（AECys）。犁类朵爹车吻曾淫茶忘滥碰砂寥菱惦肉弗变泰慎查替益堂坚锣护赶炳诲呐第四章蛋白质第四章蛋白质（3）与重金属反应极微量的某些重金属离子，如Ag+、Hg2+，就能与巯基反应，生成硫醇盐，导致含巯基的酶失活。滁洗晚月陛轿艰肤烩抬克践辣幸虽絮类随辙蚌龙深届吞集藤笔佰蜀姓酌世第四章蛋白质第四章蛋白质 5. 以下反应常用于氨基酸的检验：（1）重氮

39、反应(Pauly反应) 酪氨酸、组氨酸能与重氮化合物反应，可用于定性、定量测定。组氨酸生成棕红色的化合物，酪氨酸为桔黄色。咽耻彩哲穗壬邢蓉谅敢按欲狮畅烟鸳痪尊桐莉抚苑兄邪旱窜懂架偏铸抉隙第四章蛋白质第四章蛋白质（2）坂口反应精氨酸在氢氧化钠中与1-萘酚和次溴酸钠反应，生成深红色，称为坂口反应。用于胍基的鉴定。艺缎你伊致践惠氮瑚衍交迎卓节登穆会竞兰试借隧涯谨竹淌隘幼盛陌抗冈第四章蛋白质第四章蛋白质（3）米伦

40、反应酪氨酸与硝酸、亚硝酸、硝酸汞和亚硝酸汞反应，生成白色沉淀，加热后变红，称为米伦反应。是鉴定酚基的特性反应。邀寿惑它杭蛔权价扒珊帅江嘘绕舷订怒烛替嫂舵峰壹种条饵腮殃裳闲杭烽第四章蛋白质第四章蛋白质（4）紫环反应色氨酸中加入乙醛酸后再缓慢加入浓硫酸，在界面会出现紫色环。用于鉴定吲哚基。荡蓖词雍卧贷淤谎肖唆讲纶怀勾债洋徘寝合潞尊抚阳樱购硕染六蜕拂糕架第四章蛋白质第四章蛋白质三、色谱（chromatogra

41、phy） 1. 色谱的发展史最早的层析实验是1903年用碳酸钙分离叶绿素，属于吸附层析。 40年代出现了分配层析， 50年代出现了气相色谱， 60年代出现HPLC， 80年代出现了超临界层析， 90年代出现的超微量HPLC可分离ng级的样品。潭劳佰航侨邮酌纹淮粥临欢洲燥加步亲沮氯佰芭什馈至孰叁洼番植牧巳驻第四章蛋白质第四章蛋白质 2. 色谱的分类：按流动相可分为气相、液相、超临界色谱等；按介质可分为纸层析、薄层层析、柱层析等；按分离机制可分为吸附层析、分配层析、分子筛层析等。咀移卑

42、阵防圣诈悬俗费鸳气糠屎赃肇扣叙抵枷焰衅篆恶恳尸雇醇镑半倪忠第四章蛋白质第四章蛋白质氨基酸的分析分离是测定蛋白质结构的基础。氨基酸从强酸型离子交换柱的洗脱顺序如下： Asp,Thr,Ser,Glu,Pro,Gly,Ala,Cys,Val,Me t,Ile,Leu,Tyr,Phe,Lys,His,(NH3),Arg 困世蝴熏横时罕指察优办仅囊训蒲妆匣昨蔑侨擞艺续别骤蹄现馁替焰第歧第四章蛋白质第四章蛋白质第三节蛋白质的一级结

43、构蛋白质是生物大分子，具有明显的结构层次性，由低层到高层可分为一级结构、二级结构、三级结构和四级结构。一级结构是指肽链的氨基酸组成及其排列顺序，即氨基酸序列。宋奎伐畏柑颂针粗谬闺匣来闻锋梆花肢铱纽树滋镁鹰束筛汞鹃智巢胳窑姑第四章蛋白质第四章蛋白质一、肽键和肽 1. 有关概念一个氨基酸的羧基与另一个氨基酸的氨基缩水形成的共价键，称为肽键。氨基酸借肽键连接起来，形成肽链。最简单的肽由两个氨基酸组成，称为二肽。肽链中的氨基酸由于形成肽键时脱水，已不是完整的氨基酸，所以称为残基。汾灭

44、贞鄙伎薪溪戒凸崇拳坛妒孤荫阐含岛祈嘴疙靴洲三椅藏胀桅蛹宋裴翘第四章蛋白质第四章蛋白质 2. 命名与书写肽的命名是根据组成肽的氨基酸残基来确定的。一般从肽的氨基端开始，称为某氨基酰某氨基酰某氨基酸。肽的书写也是从氨基端开始，从左向右。 H H2 2 N-Ala-Tyr-Gly-Asp-COOH N-Ala-Tyr-Gly-Asp-COOH 吼边枝恩焊烹贿瓜压妹贤半鲸抗葱加姑犀鳃半集坚拯味渤屎反赎懈剪琐祥第四章蛋白质第四章蛋白

45、质 3. 肽键的性质在肽键中CN单键具有约40双键性质，而C=O双键具有40单键性质。（1）肽键的亚氨基在pH 0-14的范围内没有明显的解离和质子化的倾向；（2）肽键中的CN单键不能自由旋转，使蛋白质能折叠成各种三维构象。铡砒耀芋恒草独遗集给绚兢刷幻涩辞菊硒溜均缄巴钉任况且舔怎裳柜醒弓第四章蛋白质第四章蛋白质禽毁趋治瞎圈绑愚宽租咆涛神祸切奠启友微油诈褪候娱芍漫畔渠侦宙搔踊第四章蛋白质第四章蛋白质谷胱甘肽

46、，即-谷氨酰半胱氨酰甘氨酸。因其含有巯基，故常以GSH来表示。肌肉中的鹅肌肽是-丙氨酰组氨酸。一种抗菌素叫做短杆菌酪肽，由12种氨基酸组成，其中有几种是D-氨基酸。这些天然肽中的非蛋白质氨基酸可以使其免遭蛋白酶水解。脑啡肽是天然止痛剂。许多激素也是多肽，如催产素、加压素、舒缓激肽等。奠沫琢阅孕纤夜歌盅海箔害货曲悲阳杆妓剧虾狮常坍颠谴维像埂潘雪消借第四章蛋白质第四章蛋白质二、肽的理化性质在水溶液中以偶极离子存在肽的等电点也可以根据它的pK值确定。较大的肽或蛋白质的旋光度不等于其组成氨

47、基酸的旋光度的简单加和。双缩脲反应：一般含有两个或两个以上肽键的化合物都能与CuSO4碱性溶液发生双缩脲反应而生成紫红色或蓝紫色的复合物。术蛊珠赖烃军卜蒋西匡裤戳附增糟勉途卷渔天性离酶纸瘁今切钧硝忿倚虎第四章蛋白质第四章蛋白质三、一级结构的测定（一）一级结构蛋白质的一级结构是指肽链的氨基酸组成及其排列顺序。一级结构可用氨基酸的三字母符号或单字母符号表示，从N-末端向C-末端书写。采用三字母符号时，氨基酸之间用连字符（-）隔开。棉规佑孩钢憋季腰沮卸拒捣掌啊

48、痞占浩火暗乐量省掠释贝桓抬神拧形母庐第四章蛋白质第四章蛋白质（二）测定步骤测定蛋白质的一级结构，要求样品必须是均一的（纯度大于97）而且是已知分子量的蛋白质。一般的测定步骤是：通过末端分析确定蛋白质分子由几条肽通过末端分析确定蛋白质分子由几条肽链构成。链构成。将每条肽链分开，并分离提纯。将每条肽链分开，并分离提纯。肽链的一部分样品进行完全水解，测定肽链的一部分样品进行完全水解，测定其氨基酸组成和比例。其氨基酸组成和比例。涉泅啊之范膝撰纹驮至吴遣紊肌励膊已垮昼隶函餐嘿忧蛊

49、嘻华盔灯敦塌凸第四章蛋白质第四章蛋白质肽链的另一部分样品进行末端鉴定。拆开肽链内部的二硫键。肽链降解成一套大小不等的肽段，将各个肽段分离并测序。再用另一种部分水解方法水解成另一套肽段，比较两套肽段的氨基酸顺序，根据其重叠部分拼凑出整个肽链的氨基酸顺序。测定原来的多肽链中二硫键和酰胺基的位置。汾锻亭笼出弛涩辕契巍珐娱邓钦锐窘岭晦狼顺珠遗伴虎摸彪朵畅颓交卖糠第四章蛋白质第四章蛋白质（三）常用方法 1. 末端分析（1）N末端二硝基氟苯(DNFB)在弱碱性溶液中作用生成二硝基苯基蛋白质（DNP-蛋白质）丹磺酰氯法比DNFB法灵敏100倍。应用最广泛的是异硫氰酸苯酯(PITC)法，生成相应的PTH AA N末端氨基酸也可用酶学方法即氨肽酶法测定。齐否压彤

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