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1、Studies on chemical constituents from Duchesnea indica (Andr.) Focke ZHANG Lan-Tian1*, DUAN Hong-Quan2, LU Xin-Hua1, ZHENG Zhi-Hui1, ZHANG Hua1, HE Jian-Gong1(1. North China Pharmaceutical Group New Drug Research and Development Co., Ltd，Hebei ， Shijiazhuang 050015, China; 2. Basic Medical Research
2、Center, School of Pharmaceutical Sciences， Tianjin Medical University， Tianjin 300070， China)Abstract Objective: To study the chemical constituents of Duchesnea indica (Andr.) Focke. Methods: Chemical constituents were isolated by repeated column chromatography (silica gel, Toyopearl HW-40C and prep
3、arative HPLC). The structures were elucidated on the basis of spectral data analysis. Results: ten compouds were isolated and their structures were identified as follow：2-3-dihydroxyurs-12,18-en-27-oic acid（1），2-3-dihydroxyurs-12,19-en-27-oic acid（2）, Corosolic acid（3）, Ursolic acid（4）, Pomolic acid
4、 acetate（5）, Pomolic acid（6）, Euscaphic acid)（7）, Doianoterpene D（8）, 4-hydroxy-trans-cinnacic acid（9）, 3-hydroxy-4-methoxy-trans-cinnacic acid（10）.Conclusion: compound 1，2，5，6，810 were first isolated from Duchesnea indica (Andr.) Focke. Key words Duchesnea indica (Andr.) Focke; triterpene蛇莓化学成分的研究张
5、兰天1通信作者 *张兰天，Tel：（0311）85992995，E-mail：作者简介：张兰天，（1977- ），女，河北沧州人，博士，从事天然药物的研究。，段宏泉2，路新华1，郑智慧1，张华1，贺建功1(1. 华北制药集团新药研究开发有限责任公司 河北 石家庄050015；2. 天津医科大学 基础医学研究中心 药学院，天津300070) 摘要 目的：研究蛇莓Duchesnea indica (Andr.) Focke.中的化学成分。方法：采用硅胶柱色谱、凝胶柱色谱、反相HPLC制备色谱等多种方法分离纯化得到化合物，采用波谱方法鉴定化合物的结构。结果：从蛇莓中分离得到10个化合物，2-3-di
6、hydroxyurs-12,18-en-27-oic acid（1），2-3-dihydroxyurs-12,19-en-27-oic acid（2），2-羟基乌苏酸(Corosolic acid)（3），乌苏酸(Ursolic acid)（4），3-O-乙酰坡模醇 (Pomolic acid acetate) （5），坡模酸(Pomolic acid)（6），蔷薇酸 (Euscaphic acid)（7），Doianoterpene D（8），4-hydroxy-trans-cinnacic acid（9），3-hydroxy-4-methoxy-trans-cinnacic acid（10
7、）。结论：化合物1，2，5，6，810为首次从该植物中分离得到。关键词 蛇莓；乌苏烷三萜蛇莓为蔷薇科龙吐珠属多年生草本植物，又名蛇泡草，蛇果藤等，分布于辽宁，湖北，湖南，广东，广西等地1。中药蛇莓Duchesnea indica (Andr.) Focke.为蛇莓的全草，具有清热、凉血、消肿、解毒的功效，民间多用于治疗热病、咳嗽、痢疾、惊痫、湿疹等1。近年的文献研究表明，蛇莓全草中有三萜、黄酮、香豆素、甾醇等化学成分，另外药理研究表明，蛇莓具有抗癌、抑菌、增强免疫的效果，对心血管、平滑肌、中枢神经系统、内分泌也有一定的作用2-12。鉴于蛇莓中的化学成分未见系统报道，且资源丰富、具有较高的药用价
8、值，本文采用一系列现代的提取分离技术，得到10个化合物，通过各种有机波谱解析鉴定了其化学结构，分别为2-3-dihydroxyurs-12,18-en-27-oic acid（1），2-3-dihydroxyurs-12,19-en-27-oic acid（2），2-羟基乌苏酸(Corosolic acid) （3），乌苏酸(Ursolic acid)（4），3-O-乙酰坡模醇 (Pomolic acid acetate)（5），坡模酸(Pomolic acid) （6），蔷薇酸 (Euscaphic acid)（7），Doianoterpene D（8），4-hydroxy-trans-ci
9、nnacic acid（9），3-hydroxy-4-methoxy-trans-cinnacic acid（10），其中化合物1，2，5，6，810为首次从该植物中分离得到。1 仪器、试剂及药材核磁共振仪: Bruker AVANCE 300 instrument(TMS内标)；质谱仪：日本电子JEOL JMS-SX102A；制备高效液相色谱仪: PU-2089 (泵), RI-2031 和 UV-2075(检测器) (日本分光公司(JASCO)；制备HPLC色谱柱:YMC-Pack ODS-A SH-343-5 (20 mm X 250 mm,YMC)。 凝胶色谱柱：Toyopearl H
10、W-40C (Tosoh)；柱色谱和薄层色谱用硅胶均系青岛海洋化工厂生产，所用试剂均为分析纯。药材采自湖北(2004年12月)，由中南民族大学生命科学学院万定荣教授鉴定，标本(D20040905)存放于天津医科大学药学院。2 提取分离 取自然干燥的蛇莓全草4.5 kg，粉碎后用95 %的乙醇加热回流提取3次，每次6 h。提取液减压浓缩，得浸膏870g，浸膏加水混悬后，分别用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇进行萃取，得乙酸乙酯提取物109 g。乙酸乙酯提取物经反复硅胶柱色谱、凝胶渗透色谱分离，制备高压液相色谱纯化得到化合物8（21.3 mg），9（17.2 mg），10（9.1 mg），正丁醇提取物分离
11、得到化合物1（40.0 mg），2（35.0 mg），3（7.0 mg），4（30.0 mg），5（10.0 mg）6（7.0 mg），7（15.0 mg）。3 结构鉴定化合物1 白色无定形粉末。根据ESI-MS+ m/z：493 M+Na+，推测分子式为C30H46O4。1H-NMR ( CD3OD ) 高磁场可以观察到7个角甲基峰 dH ： 0.87，0.92，0.99，1.01，1.04，1.73 ( each 3H，s )，1.09 ( 1H，d，J = 7.0 Hz )；低磁场可以观察到 dH ：3.31 ( 1H，overlapped )，dH ：3.93 (1H，m)，烯氢信号d
12、H ：5.38 (1H，br s ) 。13C-NMR( CD3OD ) 和DEPT可以观察到：化合物1共有30个碳，其中高磁场观察到7个角甲基 dC ：17.8，18.6，19.2，19.9，22.4，22.6，29.7；中低磁场观察到8个亚甲基CH2 ( dC 19.2，24.3，27.5，29.4，32.3，35.6，35.7，43.0 )，5个次甲基CH ( dC 35.9，48.7，49.3，67.1，79.9 )，5个季碳C ( dC 39.3，39.5，40.3，45.8，49.0 )；2个双键 ( dC 127.0，139.9 ；dC 134.3，137.0 )和1个羰基碳 d
13、C180.3峰。其中2个次甲基碳 CH ( dC：67.1，79.9 )推测连接有吸电子基团羟基。由化合物其中一个甲基的化学位移1.73 ( each 3H，s )可推测该甲基和双键相连。以上波谱数据推测该化合物为三萜类化合物。由化合物的1H-NMR和13C-NMR，结合化合物的HSQC，HMBC可以推测该化合物可能为乌苏烷型三萜结构，为了进一步确定该化合物的空间结构，我们测定了化合物1的NOESY谱图，得到：H-3与H-23，H-2与H-25分别呈现很强的NOE相关性，推测2、3位羟基的空间构型分别为2，3。结合以上波谱解析和文献检索，化合物1与文献4报道的从该植物中分离得到的三萜2，3-d
14、ihydroxyurs-12,18-en-27-oic acid的13C-NMR数据一致。鉴定该化合物为2-3-dihydroxyurs-12,18-en-27-oic acid。化合物2 白色无定形粉末。根据ESI-MS+ m/z：493M+Na+，推测分子式为C30H46O4。1H-NMR (CD3OD ) 高磁场观察到7个角甲基峰 dH ： 0.85，0.87， 0.97，0.99，1.01，1.52，1.54 ( each 3H，br s )，；低磁场显示 dH ：3.43(1H，s )，dH ：4.01 (1H，m )，dH ：5.46 (1H，br s )。 化合物2的13C-NM
15、R (CD3OD) 和DEPT的波谱数据与化合物1的波谱特征一致，推测化合物2也为乌苏烷型三萜，并且有两个双键。比较这两个化合物的波谱数据可知，化合物2和1具有相同的A，B，C环，最大差异是化合物2的双键位置发生了变化。为了进一步确定其结构，我们测定了化合物2的2D-NMR：HSQC，HMBC，为了进一步确定化合物2的立体结构，测定了NOE，波谱数据显示：H-3与H-23，H-2与H-25分别呈现很强的NOE相关性，推测2、3位的羟基空间构型分别为2，3。结合以上波谱解析，并与文献12报道的从该植物中分离得到的三萜2-3-dihydroxyurs-12,19-en-27-oic acid的13
16、C-NMR一致，鉴定该化合物为2-3-dihydroxyurs-12,19-en-27-oic acid。化合物3 白色无定型粉末。根据ESI-MS+ m/z：495M+Na+，推测分子式为 C30H48O4。1H-NMR ( CD3OD ) ddH ：0.81 ( 3H，s )，0.85 ( 3H，s )，0.88 ( 3H ，d， J = 6.5 Hz )，0.97 ( 3H，s )，1.02 ( 6H，s )，1.12 ( 3H，s )，2.21 ( 1H，d，J = 11.4 Hz )，2.91 ( 1H，d，J = 9.6 Hz，3-H )，3.61 ( 1H，m，2-H )，5.2
17、4 ( 1H，brs，12-H )。以上波谱数据与文献13报道的数据一致，鉴定该化合物为2-羟基乌苏酸(Corosolic acid)。化合物4 白色无定型粉末。ESI-MS+ m/z：479 M+Na+，推测分子式为 C30H48O3 。1H-NMR ( C5D5N ) dH ：0.90 ( 3H，s )，0.96 ( 3H，d，J = 6.3 Hz )，1.01 ( 3H，d，J = 6.3 Hz )，1.03 ( 3H，s )，1.06 ( 3H，s )，1.24 ( 3H，s )，1.25 ( 3H， s )，2.13 ( 1H，dt，J = 3.7，13.1 Hz )，2.34 (
18、1H，dt，J = 4.4，13.5 Hz )，2.64 ( 1H， d，J = 11.3 Hz )，3.46 ( 1H，dd，J = 5.9，10.2 Hz，3-H )，5.50 ( 1H，brs，12-H )。以上波谱数据与文献14报道的数据基本一致，鉴定该化合物为乌苏酸(Ursolic acid)。化合物5 白色无定型粉末。ESI-MS+ m/z：537M+Na+，推测分子式为C32H50O5 。1H-NMR ( CDCl3 ) dH ：0.73 ( 3H，s )，0.85 ( 3H，s )，0.87 ( 3H，s )，0.88 ( 3H，s )，0.94 ( 3H，s )，1.21 (
19、 3H，s )，1.25 ( 3H，s )，2.05 ( 3H，s，CH3CO ) , 2.54 ( 1H，s )，4.50 ( 1H，t，J = 8.5 Hz )，5.35 ( 1H，brs，12-H )。以上波谱数据与文献15报道的数据一致，鉴定该化合物为3-O-乙酰坡模醇 (Pomolic acid acetate)。化合物6 白色无定型粉末。ESI-MS+ m/z：495M+Na+，推测分子式为C30H48O4。1H-NMR ( CD3OD ) dH ：0.93 ( 3H，s)，1.05 ( 3H，s)，1.14 ( 3H，s)，1.26 ( 3H，s)，1.48 ( 3H，s), 1
20、.76 ( 3H，s)，1.14 ( 3H，d，J = 6.4 Hz)，H 3.46 ( 1H，dd，J = 5.7， 10.0 Hz，3-H)，5.64 ( 1H, br s, 12-H)。以上波谱数据与文献16报道的数据基本一致，鉴定该化合物为坡模酸(Pomolic acid)。化合物7 白色无定型粉末。ESI-MS+ m/z：495M+Na+，推测分子式为C30H48O4 。1H-NMR ( CD3OD ) dH ：0.79 ( 3H，s )，0.87 ( 3H，s )， 0.93 ( 3H， d，J = 6.5 Hz )，0.99 ( 3H，s )，0.99 ( 3H，s )，1.19
21、 ( 3H，s )，1.35 ( 3H，s )，2.5 ( 1H，s，18-H )，2.6 ( 1H， m )，3.31 ( overlap )，3.93 ( 1H，m，2-H )，5.29 ( 1H，brs，12-H )。以上波谱数据与文献16报道的数据基本一致，鉴定该化合物为蔷薇酸 (Euscaphic acid)。化合物8 白色无定型粉末。根据EI-MS+ m/z：320 M+Na+，推测分子式为C20H32O3。1H-NMR (CD3OD )观察到3个甲基单峰dH ：0.83 ( 3H，s)， 0.90 (3 H， s)，1.33 ( 3H， s)；5个亚甲基质子峰，dH ：2.62
22、( 1H， m， 1-H)，0.75 ( 1H，m，1-H)， 1.54 ( 2H， s， 15-H)，2.37 ( 1H， m，2-H)， 2.20 ( 1H， d，J =11.8 Hz，14-H), 1.97 ( 1H， m，11-H)；2个次甲基质子峰dH ：1.01 ( 1H，dd， J = 12.1， 12.5Hz， 5-H)，1.72 ( 1H，m，13-H)。13C-NMR波谱数据表明化合物8的结构是贝壳杉烷类型二萜骨架的化合物，与文献17中Doianoterpene D的波谱数据一致，鉴定该化合物为Doianoterpene D。化合物9 棕色油状物。根据ESI-MS+ m/z
23、：187M+Na+，推测分子式为C9H8O3。1H-NMR (CD3OD )观察到低磁场有6个次甲基 dH ：6.28 ( 1H，d，J = 15.9 Hz )，7.60 ( 1H，d，J = 15.9 Hz )，6.80 ( 21H，m )，7.42 ( 21H，m )。以上波谱数据，与文献18中的4-hydroxy-trans-cinnacic acid一致，鉴定该化合物为4-hydroxy-trans-cinnacic acid。化合物10 棕色油状物。根据ESI-MS+ m/z：217 M+Na+，推测分子式为C10H10O4。1H-NMR (CD3OD )观察到1个甲基dH ：3.8
24、9 ( 3H，s )，4个不饱和双键的氢 dH：6.80 (1H，d，J = 8.2 Hz )，7.05 ( 1H，d，J = 8.2 Hz ，J = 6.3 Hz )，7.17 ( 1H，d，J = 1.9 Hz )，6.30 ( 1H，d，J = 15.9 Hz )，7.59 ( 1H，d，J = 15.9 Hz )。以上波谱数据与文献19中的3-hydroxy-4-methoxy-trans-cinnacic acid一致，鉴定该化合物为3-hydroxy-4-methoxy-trans-cinnacic acid。4 结果与讨论本研究报道了从蛇莓中分离得到的10个化合物，其中化合物1，
25、2，5，6，810为首次从该植物中分离得到，鉴于该植物的药理活性有必要进一步进行深入研究。参考文献1 江苏新医学院，中药大辞典，上海：上海科学技术出版社，1975，12392彭江南，陆蕴如，陈德昌，蛇莓化学成分的研究，中草药，1995， 22(7)：339-3413 叶亮，杨峻山，蛇莓中鞣花酸类及三萜类成分的研究，药学学报，1996， 31(11)：844-8484王强，杜晨霞、马念春等，蛇莓化学成分研究，河南科学，2006，24(4)：502-5045Mitsuhashi， Tatsuo， Shibuya， Yuichi，Endo et a， Seed oil of Duchesnea in
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