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1、固态发酵漆酶活性测定 :酶液制取 :5g 发酵样品以 1:20(W/ ）比例用蒸馏水悬浮 , 0 in 摇 3，之后 5000 r/min 离心 0in. （上清用、 45滤纸过滤 ,于 0保存滤液，取能整除得滤液体积用于漆酶活性测定。)酶活反应体系 3、0mL（、 3mL 0、 mol/L 醋酸醋酸钠缓冲液； p=、 50 、5mL粗酶液稀释液 ; 、 mL1m / 得 ABT）420nm处测定吸光值得变化。此实验固态发酵漆酶活性计算公式：酶液稀释倍数V 总： 漆酶酶活测定反应体体系得终体积（m）V 酶 ： 反应添加得酶液体积（mL) O20: t 时间内反应液在 42nm 处吸光度得增加值
2、3600: 42 n处 ABTS 氧化态得摩尔吸光系数（L/m l )T：反应时间（ n）为比色皿得直径（ m）。10mL/(0、5 L 5 )：固态变成液态得稀释倍数液态发酵漆酶活性测定：酶活反应体系、 0mL(2、3mL 0、2 l L 醋酸醋酸钠缓冲液 ; H4、0 、5L 粗酶液稀释液； 0、2m 1mmo L 得 BT )N：酶液稀释倍数 总： 漆酶酶活测定反应体体系得终体积（mL）V 酶 :反应添加得酶液体积 ( L ） OD4 0： 时间内反应液在420m 处吸光度得增加值 60：420处 A TS 氧化态得摩尔吸光系数 ( /molcm)：反应时间 (min ）L 为比色皿得直
3、径（ c )。固态发酵锰过氧化物酶 (nP）活性测定：酶液制取：粗酶液制备发酵过程中每隔2 d 取 5 发酵物于250 mL 三角瓶中，加入 100 L H 2O，在200 r /min得摇床中振荡提取之后03 h, 0 r/m n 离心 20min。（用滤纸过滤后 ,取滤液用于测定 MnP 酶活性。）在 4m 反应体系中含 m ol/L(H4 5）得乳酸钠缓冲液 3、 m，1、 6m l/L 得硫酸锰溶液 0、 mL，酶液 、 4m，预热至 时，加1、 mmol / L 得 H O2 溶液、1mL启0动反应。在 3 n 紫外光处，测定反应4 min 内 OD238 差值 .在对照组中，以煮沸
4、灭活15 酶液代替原酶液，以蒸馏水代替H2O2 溶液 ,其她反应物不变。每分钟使 mol/得Mn2 +Mn3所需得酶量为1 个酶活力单转化为位（ ） 。( 3 =6、 mM 、 m- )此实验固态发酵 MnP 活性计算公式：N：酶液稀释倍数V 总: 漆酶酶活测定反应体体系得终体积（L)V 酶 : 反应添加得酶液体积（) OD42 ： 时间内反应液在420m 处吸光度得增加值 500：238nm 处 Mn2转化为 n3摩尔吸光系数 (L/mol c）T:反应时间（ in）：比色皿得直径（ cm）100m /（、 4mL 5g）：固态变成液态得稀释倍数液态发酵锰过氧化物酶 (Mn )活性测定：锰过
5、氧化物酶 (M ）活性测定在 4 mL 反应体系中含50 mmol/ （pH 4 5）得乳酸钠缓冲液3、 4 L，1、6 mol/L 得硫酸锰溶液 0、 1L ，酶液0、 4 mL,预热至7 时，加1、 6 m ol /L 得 2 2 溶液0、 1 mL启动反应。在 8 nm 紫外光处，测定反应4 mi 内 O238差值。在对照组中 ,以煮沸灭活15 in 酶液代替原酶液，以蒸馏水代替 H2 溶液，其她反应物不变。每分钟使1ml/L 得 Mn+3 +个酶活力单位（ ) 。( 38转化为 Mn所需得酶量为= 6、 m、 m- ）此实验固态发酵Mn 活性计算公式 :N: 酶液稀释倍数 总： 漆酶酶
6、活测定反应体体系得终体积（mL）V酶: 反应添加得酶液体积 (mL） D4 0： 时间内反应液在420n处吸光度得增加值6500： 238nm 处 M 2 +转化为Mn +摩尔吸光系数 ( /molcm)T:反应时间 (in）L：比色皿得直径（ m)固态发酵木质素过氧化物酶（LiP) 活性测定：酶液制取 :5g 发酵样品以 1:20(W/V) 比例用蒸馏水悬浮， 200 r mi摇 3h, 之后 5000 / i离心 20。 (上清用 0、4m 滤纸过滤，于 0保存滤液，取能整除得滤液体积用于木质素过氧化物酶活性测定。)测酶活： 3m反应混合液包括、 4mL 酒石酸钠（ 250mM, pH 3
7、 、0),、1m1 m藜芦醇， 0、4m酶样品。在 0 1下温浴 5min 后，于反应加入、1 0 M H 22 启动酶促反应， 以煮沸灭活5 mn酶液代替O原酶液 ,以蒸馏水代替 H2 2溶液作对照，测OD10(、3- 1m- 1O10= 910)处反应 5mi前后反应液吸光度得变化。一个酶活力单位（U)得定义：每 min 氧化藜芦醇生成 M 藜芦醛消耗得酶量。此实验固态发酵 P 活性计算公式 :N：酶液稀释倍数V 总: 漆酶酶活测定反应体体系得终体积（mL ）酶 : 反应添加得酶液体积 (L) O20： t 时间内反应液在 2nm 处吸光度得增加值900：31nm 处摩尔吸光系数（ L/m
8、ol cm）T：反应时间（）L:比色皿得直径（ cm）100mL/（ 0、 mL 5g）：固态变成液态得稀释倍数液态发酵木质素过氧化物酶 (Li )活性测定：测酶活：反应混合液包括 3、 4mL 酒石酸钠（ 250mM， pH3、0),、 1mL1 mM 藜芦醇， 0、 mL 酶样品。在 3下温浴 i后 ,于反应加入 0、1mL10M H22启动酶促反应，以煮沸灭活5 min 酶液代替原酶液，以蒸馏水代替H2O2 溶液作对照，测O31( 、31 = 93103M - 1cm- 1）处反应 min 前后反应液吸光度得变化。一个酶活力单位（U)得定义：每 m n 氧化藜芦醇生成 1M 藜芦醛消耗得酶量。此实验固态发酵LiP 活性计算公式：N: 酶液稀释倍数V 总：漆酶酶活测定反应体体系得终体积（mL)V酶：反应添加得酶液体积 (m) D4 0: t 时间内反应液在 420n处吸光度得增加值9300: 10m 处摩尔吸光系数 (L/mol cm）T:反应时间 (min）L:比色皿得直径（ m)