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1、食品中菌落总数的测定实验食品中菌落总数的测定实验一、 实验目的 :了解稀释平板计数的原理,掌握涂抹平板培养法与混合平板培养法,认识细菌、放射菌、霉菌、的菌落特征。二、原理平板菌落计数法就是将等测样品经适当稀释后 ,其中的微生物充分分散为单个细胞 ,取一定量的稀释液接种到平板上 ,经过培养 ,由每个单细胞生长繁殖而形成的肉眼可见的菌落 ,即一个单菌落应代表原样品中的一个单细胞。统计菌落数 ,根据其稀释倍数与取样接种量即可换算出样品中的含菌数。但就是 ,由于待测样品往往不易完全分散成单个细胞 ,所以 ,长成的一个单菌落也可能来自样品中的多个细胞。因此平板菌落计数的结果往往偏低。 为了清楚地阐述平板
2、菌落计数的结果 ,现在已倾向使用菌落形成单位 (colony-forming units,cfu)而不以绝对菌落数来表示样品的活菌含量。该计数法的缺点就是操作较繁 ,结果需要培养一段时间才能取得 , 而且测定结果易受多种因素的影响 ,但就是这种计数方法最大的优点就是可以获得活菌的信息 ,所以被广泛用于生物制品检验 ,以及食品、饮料与水等含菌指数或污染度的检测三、试剂与材料1、仪器恒温培养箱 :(36 1 ,30 1 。 )均质器或振荡器食品中菌落总数的测定实验无菌吸管 : 1 ml(0 、01 ml 刻度 )、10 ml(0 、1 ml 刻度 )或微量移液器及吸头无菌锥形瓶 : 容量 250
3、ml、500 ml、无菌培养皿 : 直径 90 mm菌落计数器2、样品1)平板计数琼脂 (plate count agar,PCA)培养基 : 蛋白胨5、0g 、酵母浸膏 2、5 g 、葡萄糖 1、0 g 、琼 脂 15、0 g、蒸馏水 1 000ml、pH 7、00、2。将所有成分加于蒸馏水中, 煮沸溶解 , 调节 pH。分装试管或锥形瓶,121高压灭菌15 min 。注: 用平板计数琼脂, 称取23、 5 g于1 000 ml蒸馏水中, 加热煮沸至完全溶解,121高压灭菌 20min, 冷却至4547左右备用。2) 无菌生理盐水 : 氯化钠 (NaCl)5 、 875g 蒸馏水 ( 纯净水
4、 )500ml称取 5、 875 NaCl 溶于 500ml 蒸馏水中 ,121高压灭菌20min 。3、器材100ml 无菌水、 9ml 无菌水、无菌平皿、天平、称样瓶、记号笔、酒精灯等。四、 操作及实验步骤1、样品的稀释 :25 g(ml) 样品 +225 ml 稀释液 , 均质。10倍系列稀释。每递增稀释一次, 换用 1次1 ml无菌吸管或吸头。( 注意吸管或吸头尖端不要触及稀释液面) 选择 2个 3个适宜稀释度的样品匀液 , 各取 1 ml 分别加入无菌培养皿内。吸取 1 ml 空白稀释液作空白对照。每皿中加入 15 ml20 ml 平板计数琼脂培养基 , 并转动平皿使其混合均匀。食品
5、中菌落总数的测定实验2 、培养 :待琼脂凝固后 , 将平板翻转 ,36 1 培养 48 h 2 h 。水产品 30 1 培养 72 h3 h。( 如果有弥漫生长的菌落时, 可在凝固后的琼脂表面覆盖一薄层琼脂培养基( 约 4 ml),凝固后翻转平板。 )3、 菌落计数 :记录稀释倍数与相应的菌落数量。菌落计数以菌落形成单位 (colony-forming units,CFU)表示。五、计算公式 :式中 :N样品中菌落数 ;C平板 (含适宜范围菌落数的平板)菌落数之与 ;n1第一稀释度 (低稀释倍数 )平板个数 ;n2第二稀释度 (高稀释倍数 )平板个数 ;d稀释因子 (第一稀释度 )。六、实验数据 :10-1310-21空白010-1010-21琼脂0NaCl水0