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1、实验分离以尿素为氮源的微生物,脲，又称尿素，,是蛋白质的降解产物，会污染环境，但可以被含脲酶的微生物分解。,实验原理：,含有脲酶的细菌可以从尿素中得到源，而其他细菌不能得到源，因此可以用以尿素为唯一源的培养基选择出这些微生物。,尿素在脲酶的降解下产生，使培养基的变为碱性，酚红遇碱由红黄色变成红色，因此可以用酚红鉴定。,选择培养基,全营养培养基,尿素为唯一氮源的培养基,土壤稀释液 （多种微生物）,结果如何？,设备及用品： 实验材料： ()全营养固体培养基：蛋白胨、酵母提取物、琼脂糖、加水。 ()尿素固体培养基：葡萄糖、 、酚红、琼脂糖、加水。灭菌冷却到时加入经玻璃漏斗过滤（使其无菌）的尿素溶液（
2、内含脲）。 ）土样。,. 酚红的作用是什么？ . 凝固剂为什么使用琼脂糖，而不是琼脂？ . 能否连同尿素一起进行灭菌？如何操作？,实验步骤：,观察,注意：尿素经过玻璃漏斗过滤后加入,培养基的配制和灭菌,倒平板,接种,全营养固体培养基（对照组）,尿素固体培养基（实验组）,玻璃刮刀、涂布分离,培养,对照组： 实验组：,制备细菌悬液,倒置，恒温培养箱，左右,菌落数量和种类多而杂,菌落少、单一，菌落周围出现 红色区域,制备细菌悬液：,的无菌水,的无菌水,土壤,土样,无菌水,微量移液器的使用,培养基上 、稀释液涂布结果,尿素培养基上 、稀释液涂布结果,恒温培养,注意事项 为使结果接近真实值可将同一稀释度
3、加到三个或三个以上的平皿中，经涂布，培养计算出菌落平均数。 涂布平板法所选择的稀释度很重要，一般取三个稀释度,同一稀释倍数的三个重复的菌落数相差较大，表明试验不精确，需要重新实验。,微生物的培养与观察,稀释涂布平板法可用于测定活菌数：,每克样品中的菌落数() 其中，代表某一稀释度下平板上生长的平均菌落数，代表涂布平板时所用的稀释液的体积()，代表稀释倍数。,例如 若某同学将毫升的菌液稀释成倍， 涂布分离后，个平板的菌数依次为：个， 个，个。请问，你能算出该试管中的细菌数大 约是多少吗？,实例：在做分解尿素的细菌的筛选与统计菌落数目的实验时，同学从对应的倍稀释的培养基中筛选出大约个菌落，但是其他
4、同学在同样的稀释度下只选择出大约个菌落。分析其原因。,原因：土样不同，培养基污染或操作失误(或者是混入了其他的含氮物质),例：根据分离以尿素为氮源的微生物实验，回答下列问题： 写出脲酶降解尿素的反应式； 该实验分离细菌时用浓度为和土壤稀释接种，更容易形成单菌落的. 同学筛选出的菌落为个，其他同学只选择出个，并且他在设计实验时并没有设置对照。你认为同学结果产生的原因可能有哪些 如何设计对照实验排除可能影响实验结果的因素： 涂布平板的所有操作怎样保证无菌？,(),脲酶,土壤稀释,可能是土样不同，也可能是 培养基污染或操作失误,一是由其他同学用与同学一样的土壤进行实验，如果与同学一致则证明无误。如果
5、不同，则证明同学存在操作或培养基配制配制有问题。,二是将同学配制的培养基在不加土样的情况下进行培养， 作为空白对照，以证明培养基是否受到污染。,从操作的各个细节保证“无菌”，都应在火焰旁进行。,小结：通过这个事例可以看出，实验结果要有说服力，对照的设置是必不可少的。,方案一：由其他同学用与同学相同土样进行实验,方案二：将同学配制的培养基在不加土样的情况下进行培养，作为空白对照，以证明培养基是否受到污染。,结果预测：如果结果与同学一致，则证明无误；如果结果不同，则证明同学存在操作失误或培养基的配制有问题。,颜色：,预期： 酚红由黄变红。说明有分解尿素的细菌存在，且随着培养时间的延长，红色区域的面积越来越大。,中性,碱性,细菌,黄色 红色,酚红：酸碱指示剂，变色范围：pH6.48.2,