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1、.,植物细胞有丝分裂的制片与观察,.,一、实验目的,1.掌握植物根尖细胞有丝分裂制片技术 2.观察植物细胞有丝分裂过程中染色体的形 态特征,.,二、实验原理,1.植物根尖、茎尖等分生区细胞能进行有丝 分裂 2.在有丝分裂过程中，染色体发生规律性动 态变化 3.染色体可被碱性染料着色，便于观察 4.根据显微镜下观察到的染色体特点可识别 有丝分裂不同时期,.,三、实验仪器和药品,1.仪器：显微镜、恒温箱、水浴锅、计时器、 烧杯、载玻片、盖玻片、剪刀、 镊子、滴管、刀片、玻璃皿 2.材料：大蒜 3.药品：诺卡氏固定液 1mol/L的HCl作为解 离液、卡宝品红作为染色液,.,四、实验流程,1. 大蒜
2、根尖培养及固定：,实验前3-4d，将大蒜掰成蒜瓣摆在铺 有四层纱布的托盘里放入温度为25， 一定湿度的培养箱中培养，每天换 水两次待根长到12cm将根剪下用吸 水纸吸干水分,将其放入诺卡氏固定液 （乙醇:冰醋酸=3:1）固定424小时。,固定的作用：杀死细胞，固定细胞形态， 维持染色体的完整性，提 高染色效果,.,四、实验流程,1.大蒜根尖培养及固定,2.装片制作,（1）解离,目 的：,使组织中的细胞分离开,操作：,先用95%的酒精漂洗，在HCL中 60水浴5min左右,（c）解离时，细胞已死亡,（a）解离充分是实验成功的必备条件,注意：,（b）解离过度，细胞结构被破坏,解离液：,1mol/L
3、的HCl,.,四、实验流程,1.大蒜根尖培养及固定,2.装片制作,漂洗液：,清水（先置于清水中浸泡2min左右）,目的：,洗去解离液，便于染色,次数：,2-3次,注意：,若不漂洗,解离过度（HCl作用） 影响染色（HCl与碱性染料反应）,（1）解离,（2）漂洗,备注:将漂洗好的根尖放入盛有清水的培养皿中,.,四、实验流程,1.大蒜根尖培养及固定,2.装片制作,（1）解离,（2）漂洗,（3）取材,部位：,根尖2-3mm,注意：,要去除根尖乳白色根冠,（根尖分生区）,.,成熟区,伸长区,分生区,根冠,根尖的结构,.,.,.,.,.,.,四、实验流程,1.大蒜根尖培养及固定,2.装片制作,（1）解离
4、,（3）取材,（2）漂洗,（4）染色,操作：,用镊子尖把大蒜根尖弄碎（或者将根尖均 匀切成三份）,用卡宝品红染色,68分钟后， 盖上盖玻片,再盖上一个载玻片，用拇指轻 压载玻片,随即用一次性筷子进行敲片。,目的：,使细胞分散开，有利于观察,注意：,染色时敲片的力度要适中,染色剂：,卡宝品红染液,时间：,6-8min,（使染色体（质）着色）,染色时间过长细胞全被染色， 无法观察,染色时间过短染色体颜色过浅， 影响观察,.,.,.,.,四、实验流程,1.大蒜根尖培养及固定,2.装片制作,解离漂洗取材染色,3.观察,（1）低倍镜观察：,找到分生区细胞,特点：,细胞呈矩形，排列紧密，有分裂细胞,（2）
5、高倍镜观察：,在低倍镜的基础上换用高倍镜,（3）仔细观察：,先找中期，再找其余各时期，注意染色体特点,（4）移动观察：,慢慢移动装片，完整观察各个时期,.,四、实验流程,1.大蒜根尖培养及固定,2.装片制作,解离漂洗取材染色,3.观察,低倍镜观察高倍镜观察仔细观察移动观察,注意：,a.观察时应先找到呈矩形的分生区细胞，在 一个视野里观察时，要注意边观察边移动装片，观察有丝分裂各个时期。,b.显微镜下观察到的都是死细胞，不能看到细胞分裂的动态变化。,c.在显微镜下观察到间期细胞的数目最多,.,操作要点,1.解离：培养好的根尖先用95的酒精漂洗再放入1mol /L的HCl中60水浴5min左右 2
6、.漂洗：先在清水中浸置2min,再用清水洗去解离液2-3 次，最后置于盛有清水的培养皿中 3.取材：用刀片切取根尖2-3mm处的分生区，并切去乳白 色的根冠 4.染色：用镊子尖把大蒜根尖弄碎（或者用刀片将根尖 均匀切成三份）,用卡宝品红染色,68min后， 盖上盖玻片,再盖上一个载玻片，用拇指轻压载 玻片随即用一次性筷子进行敲片。 5.观察：首先在低倍镜进行观察,再到高倍镜下观察。,.,五、实验结果对比图,间期,前期,中期,后期,末期,后期与末期 的过渡期,.,六、实验结果展示,前期,中 期,后 期,末 期,.,六、实验结果展示,间期,后期,中期,末期,.,1、盐酸的作用是什么？,盐酸起解离的作用，杀死根尖细胞，溶解细胞间质，破坏胞间连丝，使细胞容易发生分离。,2、清水漂洗的作用目的是什么？,清水漂洗的作用即洗去材料中的解离液, 便于染色。,作用是使细胞中的染色体着色。因为染色体很容易被这样的碱性染料染色。,3、卡宝品红的作用是什么？,4、装片制作完成，轻轻按压的作用是什么？,使细胞相互分离，在载玻片上平铺成一层，便于观察。,思考,.,七、作业,1、实验过程中需要注意哪些事项？ 2、将实验结果以图片的形式呈现在实验报 告中，若实验失败，请分析失败原因。 3、根据实验结果，请总结植物有丝分裂各 个时期的特点。,请将实验报告发至邱添富邮箱（),