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1、SysmexCA-1500血液凝固仪评价作者：coolautumn熊立凡胡翊群王学锋胡晓波王鸿利日本Sysmex公司CA-1500血液凝固仪，融传统的血液凝固分析法和现代的发色底物法及免疫比浊法检测原理于一体，操作简易而功能多样，适应现代临床医学的发展需要。CA-1500的设计目标是：(1)综合应用光学和电学检测原理，随机组合检测血液凝固指标；(2)体现高性能、高精度的自动分析水平；(3)提供简便的输入和输出程序；(4)达到高效的检测速度。本研究着重对CA-1500仪器的检测重复性、稳定性、线性、抗生物干扰物质功能进行观察和评价，并与库尔特（Coulter）公司的血液凝固仪ACL-3000pu
2、ls血凝指标的检测结果进行相关性分析。现报道如下。材料和方法一、材料1.仪器：日本SysmexCA-1500血液凝固仪和美国Coulter公司ACL-3000puls血液凝固仪。2.试剂：评估CA-1500的血液凝固指标所用的试剂分别源自Dade公司和InstrumentationLaboratory（IL）公司（表1）。表1主要试剂一览表检测指标Dade试剂IL试剂凝血酶原时间（PT）C-pulsThrombaplastinPT-FibrinogenHS活化部分凝血酶原时间ActinLyophilizedSilica（APTT）纤维蛋白原（Fbg）定量ThrombinFibrinogen-C
3、抗凝血酶（AT）ThrombinThrombin活性测定发色底物发色底物2抗纤溶酶（APL）PlasminPlasmin活性测定发色底物发色底物纤溶酶原（PLG）StreptokinaseStreptokinase活性测定发色底物发色底物蛋白C（PC）活性测定发色底物D-聚体（DD）定量IATRON（日本三菱化学株式会社）因子V（FV）活性测定免疫吸附乏因子V人血浆3.标本：除正常混合血浆和质控血浆由Dade公司和IL公司提供之外，作CA-1500与ACL-3000plus相关性分析用的患者（40例，均为有中度和高度促凝、抗凝、纤溶、抗纤溶异常者）血浆来自瑞金医院。二、方法（一）仪器校正和建立
4、标准曲线：CA-1500和ACL-3000puls分别用各自的正常血浆（Dade公司的CoagCal-N和IL公司的ILTestTMCalibrationPlasma）和试剂作凝血各项目的测定，并以仪器自动对倍稀释血浆（36种稀释液）的方法分别建立各测定项目的标准曲线，绘制和建立线性回归方程。（二）各项指标测定结果表达：各项指标的测定结果表达如下：(1)PT：凝固时间（s）和活动度（%）；(2)APTT：凝固时间（s）；(3)Fbg：凝固时间（s）和血浆浓度（g/L）；(4)AT：活性（%）；(5)APL：活性（%）；(6)PLG：活性（%）；(7)PC：活性（%）；(8)DD：血浆浓度（mg
5、/L）；(9)FV：凝固时间（秒）和活性（%）。(三)评估方法：1.重复性试验：分别以Dade公司正常血浆标本CoagCal-N和异常血浆标本DadetrotP作PT、APTT、Fbg、ATIII、PLG、APL、PC、DD和FVIII测定，每项指标在同日内连续测定10次。2.稳定性试验：分别以CoagCal-N和DadetrotP血浆作PT、APTT、Fbg、AT和FV测定，每项指标每日测定3次，连续5日。3.线性试验：分别选择PT、DD活性或浓度不同的两组血浆，各作100%、80%、60%、40%、20%和10%6个点的稀释，然后测定并计算斜率（b）、截距（a）和直线相关（r）。4.生物性
6、干扰物对仪器检测功能的影响：分别在CoagCal-N血浆标本中加入一定量的游离胆红素、结合胆红素、血红蛋白和乳糜物质，按各相应干扰物原倍量的100%、80%、60%、40%、20%和0%6种浓度血浆，观察生物性干扰物对CA-1500检测PT、APTT、Fbg、AT、APL、PLG、PC、DD的影响程度。5.CA-1500和ACL-3000相关性试验：观察两种仪器同时检测20例正常标本和30例异常标本PT、APTT、Fbg、AT、APL和PLG6项指标的相关性。6.统计学方法：各项指标的检测结果均作算术平均值（mean）、标准差（s）、变异系数（CV）的计算并记录测定的最大值（max）和最小值（
7、min）；相关性研究则计算相关系数（r）和线性回归方程。直线A为第一组血浆，直线方程Y=0.819X+1.435直线B为第二组血浆，直线方程Y=0.838X+1.077图1CA-1500检测DD的线性图2CA-1500和ACL-3000Plus测定PT、Fbg、APL和PLG的相关性结果一、重复性CA-1500检测各凝血指标的重复性见表2。对正常血浆而言，PT的每次测定值均完全一致，故CV值为0%；PC测定CV的值最高，但也只有2.7%；对异常血浆来说，各项指标测定的CV值多数高于对正常血浆的测定，其中Fbg定量的重复性CV达7.8%，但仍具有很高的精密度。表2CA-1500检测正常血浆和异常
8、血浆重复性比较项目PT(s)PT(%)APTT(s)Fbg(s)Fbg(g/L)FV(s)FV(%)AT(%)PLG(%)APL(%)PC(%)DD(mg/L)平均值()11.399.426.27.62.8149.1101.892.3113.0108.097.58.9(14.9)(40.1)(63.5)(16.6)(1.18)(63.0)(24.8)(27.2)(33.8)(48.8)(29.8)(1.7)标准差(s)0.00.00.30.10.040.44.11.72.01.72.60.2(0.1)(0.4)(0.4)(1.2)(0.09)(0.4)(0.8)(1.3)(0.8)(1.3)(
9、1.4)(0.2)最大值11.399.426.57.72.9149.6108.294.5115.2110.9110.29.1(14.9)(41.1)(64.0)(18.5)(1.33)(63.7)(25.5)(29.7)(35.2)(50.7)(32.7)(1.9)最小值11.399.425.57.32.7448.596.290.0109.8105.391.18.5(14.7)(39.9)(22.9)(14.8)(1.04)(62.6)(23.3)(25.3)(32.3)(47.2)(28.1)(1.4)CV(%)0.00.01.11.41.60.84.01.81.81.62.72.0(0.5
10、)(1.0)(0.6)(7.0)(7.8)(0.6)(3.1)(4.7)(2.3)(2.7)(4.7)(2.0)注：无括号为正常血浆测定值，括号内为异常血浆测定值二、稳定性CA-1500检测CoagcalN血浆和DadetrolP血浆各项指标的稳定性分别如下：PT凝固时间测定的CV值为0.7%和0.6%，其活性测定的CV值为2.2%和1.5%；APTT测定的CV值为1.6%和1.9%；Fbg含量测定的CV值为1.6%和2.2%；FV活性测定的CV值为3.4%和3.5%；AT活性测定的CV值为5.2%和8.5%。其中，稳定性测定的变异系数最低的是PT测定，最高的是AT活性测定。三、线性CA-15
11、00检测两组血浆各6种稀释度（依次为100%、80%、60%、40%、20%和10%）的PT活性值分别为：166.3%和217.9%、146.5%和203.2%、122.2%和177.5%、87.6%和133.6%、38.5%和59.0%、12.7%和17.7%；两组血浆的PT测定直线相关系数分别为0.988和0.969。CA-1500直接测定血浆（100%稀释度）DD（设定含量为32.8mg/L）时，仪器未能给出测定值，当血浆稀释度依次为80%、60%、40%、20%和10%时，DD重复测定的浓度（mg/L）值分别为：21.1和21.2、19.2和19.3、13.8和13.5、6.3和6.4
12、、3.2和2.7；DD两次测定的直线相关系数为分别为0.980和0.981。PT和DD测定的线性见图1，2。四、生物性干扰的影响1.胆红素：(1)游离胆红素：不同浓度游离胆红素对各指标的测定影响程度均较小（CV4.8%），但DD检测时，CV显著增大（59.6%），见表3。(2)结合胆红素：除DD检测时，CV明显增大（64.5%）外，其余各项检测均不受结合胆红素的干扰（CV3.3%）。表3生物性干扰对CA-1500检测的影响项目PT(s)PT(%)APTT(s)Fbg(s)Fbg(g/L)AT(%)APL(%)PLG(%)PC(%)DD(mg/L)游离胆红素平均值12.279.127.58.62
13、2.279.6106.691.982.20.3S0.23.80.20.10.021.51.41.31.50.2CV(%)1.64.80.60.60.81.91.31.41.859.6结合胆红素平均值12.279.429.38.42.2678.9121.895.481.90.2S0.12.60.10.10.031.61.71.71.80.2CV(%)1.13.30.51.01.22.01.41.82.164.5血红蛋白平均值12.181.028.68.62.1479.0133.791.079.00.3S0.00.00.30.10.041.71.72.21.40.0CV(%)0.00.01.11.
14、41.72.21.32.41.749.0脂肪物质平均值12.182.128.98.52.2379.789.6128.180.90.3S0.23.20.30.10.051.11.72.31.60.1CV(%)1.33.81.01.62.11.41.91.81.94.52.血红蛋白：血浆存在不同浓度的血红蛋白（溶血）时，除明显干扰DD测定外（CV=49%），均很少干扰CA-1500对其他各项检测（CV值最大为2.4%）。3.乳糜微粒（脂肪物质）：不同浓度的脂肪物质对CA-1500检测各项指标的干扰程度大多较小（CV4%），但DD测定的CV值增高（45.5%）（表3）。五、CA-1500和ACL-3
15、000plus相关性两种血液凝固分析仪对同一标本各项指标的检测结果见表4；图2例举PT、Fbg、APL、PLG测定的相关性。表4CA-1500和ACL-3000plus对50份血浆标本凝血指标检测的相关性项目PT(s)PT(%)APTT(s)Fg(g/L)AT(%)APL(%)PLG(%)平均值A13.4/42.4129.0/67.07.5/108.02.80/6.76125.0/54.0120.0/93.0130.0/95.0B12.0/28.611.3/50.537.7/154.02.62/7.28144.7/66.1154.3/120.9162.8/101.0平均值A11.9/16.08
16、7.0/16.032.2/42.71.10/3.7043.0/11.080.0/24.089.0/26.0B10.8/14.183.1/7.526.3/610.74/0.4378.9/27.0123.8/52.4101.4/27.4平均值A12.6/26.4107.6/32.338.6/70.82.13/5.3077.8/37.1103.0/47.11.24/59.6B11.3/18.5101.1/28.632.3/93.71.94/6.38102.7/50.2140.2/76.3115.7/67.8SA0.5/6.212.4/10.64.6/17.90.49/1.0424.2/4.59.9/
17、20.411.5/22.5B0.3/3.78.9/12.23.5/25.80.60/0.7719.2/8.19.2/20.014.4/25.4CV(%)A3.8/23.511.5/32.812.0/25.322.8/19.631.3/88.4936/43.311.3/37.7B2.9/20.28.8/42.610.7/27.531.0/12.018.7/16.06.5/26.212.4/37.5回归分析斜率(b)0.5290.9461.4682111.0451.0841.110截距(a)4.529-1.548-17.151-22.39210.35126.4021.858线性(r)0.9640.
18、9800.9420.9570.9640.9900.981A：ACL-3000plus；B：CA-1500；/：斜线前后数值分别为正常血浆和异常血浆各指标测定结果讨论近年来，随着现代医学对止血与血栓形成机制认识的不断深入，临床实验室开展止血和血栓有关指标的检测项目逐步增多。当代最先进的血液凝固分析仪，能同时应用不同的实验原理对大量的标本进行多项指标的检测；与此同时，仪器对标本和试剂的需求量比手工方法几乎可减少一半，极大地降低了检测的成本。Sysmex公司新近开发的CA-1500血液凝固分析仪不但保持了已应用于临床检测的CA-6000血液凝固仪全自动、高效能的特点，而且具有体积小、使用更灵活的长处
19、。从本实验对CA-1500检测各项指标的结果可以看出，该仪器有以下6方面的特点：1.简便的标准曲线制备方法：可将一系列预定的稀释度输入（既可事先设定，也可随时设定），仪器可自动计算出设定的各检测指标相应的浓度或活性百分率，列表并绘制标准曲线，使用时非常方便。2.优良的重复性（精密度）：无论检测正常或异常的血浆标本，CA-1500均能获得极高的检测精密度，绝大多数指标的检测结果CV值在5%以下，Fbg测定的CV值也只有8%。本实验与IzumiT1研究的同型号CA-1500仪器的重复性试验平均值相比，结果相似：即精密度高，CV值小（表5）。本研究CA-1500测定的各项指标CV值与Mario等2评
20、估的CA-6000检测的同种指标的CV值相比较，则分别为：PT（%）0%对0.07%，APTT（s）1.1%对0.95%，Fbg（g/L）1.6%对3.15%，AT（%）1.8%对3.24%，FV（%）0.8%对1.77%，表明CA-1500检测的重复性在理想的范围内。表5CA-1500重复性试验的CV值比较(%)项目PTAPTTFbgFVATPLGAPLPC本研究CV值01.11.40.81.81.81.62.7TakayoshiCV值*0.520.571.730.492.051.831.591.00*为3台CA-1500测定的CV平均值3.优良的稳定性：从CA-1500对批间标本的测定精密
21、度看出，最好的是PT检测（CV0.6%），变异较大的是AT检测（CV8.5%）；若CA-1500与Mario等2评估的CA-6000稳定性相比较，则CV值分别为，PT（%）2.2%对3.01%，APTT（s）1.6%对2.52%，Fbg（g/L）为1.6%对7.36%，AT%）5.2%对3.03%，显示CA-1500的检测稳定性更佳。4.良好的线性：CA-1500对PT和DD检测线性均良好，PT的r=0.988，DD的r=0.981。但从图2也可看出，当PT的活动度大于150%以上，DD的浓度在18mg/L以上时，测定的线性较差（测定值远离回归线）。5.良好的抗生物性干扰物质的功能：在血浆有高
22、浓度的游离或结合胆红素、溶血（高浓度的游离血红蛋白）及乳糜物质存在时，CA-1500仍保持良好的检测敏感性。除对DD的浓度测定受到生物性干扰物质严重影响之外（CV值超过40%以上），其余指标的检测结果显示波动性很小（CV均小于5%）。溶血对PT测定的干扰作用最小，CV值0%，而游离胆红素在高浓度时，可使PT活性增强。由于DD标本取自正常人，其浓度极低（微克水平），故可能易受高浓度干扰物质（毫克水平）的影响，值得引起注意。推测在实际检测含高浓度DD的异常血浆标本时，应不存在这种情况。6.良好的仪器检测之间的相关性：作为当前先进的血液凝固仪，CA-1500和较常用的血液凝固仪ACL-3000plu
23、s，在各自使用配套的试剂和相应的测定方法条件下，对同一被检标本的检测，能获得良好的相关性（相关系数r均大于0.900）。其中，对PT（s）、APL（%）、PLG（%）的r值分别达到0.980、0.990和0.981。在APTT、Fbg和AT的r值虽较低，但也分别达到0.942、0.957和0.964。本研究对CA-1500血液凝固仪检测功能的评估结果显示，在应用Dade公司试剂系统的条件下，CA-1500有很高的批内和批间检测的重复性，良好的测定线性和较强的抗生物干扰能力以及与ACL-3000plus血液凝固仪的良好相关性。CA-1500凝固仪体积较小（比较CA-6000而言），不但能满足目前临床常规血液凝固指标检测的需要，而且对设定新的止血和血栓检测指标也具有较大的潜能。作者单位：200025上海第二医科大学瑞金医院参考文献1IzumiT.OverviewoftheSyemexCA-1500TMautomatedcoagulationanalyger.SysmexJInt，1998,8:23-26.2GojunM,CoenD,DragunZ,etal.EvaluationofSysmexCA-6000TMDadereagentsystemSysmex.JInt，1998,8:9-14.