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1、二苯胺试剂:鉴定DNA。 二苯胺试剂的配制 A液:1.5 g二苯胺溶于100 mL 冰醋酸中,再加15 mL浓硫酸,用棕色瓶保存。如冰醋酸呈结晶状态,则需加温后待其熔化,再使用。 B液:乙醛的体积分数为0.2%的溶液。 配制:将0.1 mL B液加入到10 mL A液中,现配现用。 DNA的粗提取与鉴定 实验原理 1. DNA在NaCl溶液中的溶解度，是随着NaCl的浓度的变化而改变的。 当NaCl的物质的量浓度为0.14 molL时,DNA的溶解度最低。利用这一原理，可以使溶解在NaCl溶液中的DNA析出。 2.DNA不溶于酒精溶液，但是细胞中的某些物质则可以溶于酒精溶液。利用这一原理，可以
2、进一步提取出含杂质较少的DNA。 3.DNA遇二苯胺（沸水浴）会染成蓝色，因此，二苯胺可以作为鉴定DNA的试剂。 注意事项 1.步骤3析出含DNA的黏稠物中，蒸馏水要沿烧杯内壁缓缓加入，不能一次快速倒入。 2.实验中有多个步骤都要用玻璃棒进行搅拌，但是在不同的步骤中玻璃棒的用法不同。 实验用具 鸡血细胞液（510 mL）；体积分数为95的冷酒精，蒸馏水，质量浓度为0.1 gmL的柠檬酸钠溶液，物质的量浓度分别为2 molL和0015 molL的NaCl溶液，二苯胺试剂；烧杯（100 mL，1个， 50 mL， 500 mL，各2个），漏斗，试管（20 mL，2个），玻璃棒，滴管，量筒（100
3、mL，1个），纱布，镊子，滤纸，铁架台，铁环，三角架，酒精灯，石棉网，载玻片，试管夹。 实验原理： 1.析出溶解在NaC1溶液中的DNA。 2.用冷酒精提取出含杂质较少的DNA。 3.DNA在沸水浴时被二苯胺染成蓝色。 方法步骤： 1提取细胞核物质：顺时针方向搅拌，稍快，稍重。 5 min 2溶解DNA： 3析出含DNA的黏稠物：蒸馏水300mL，逆时针方向搅拌，缓慢 4过滤：取黏稠物 5再溶解：顺时针方向搅拌，较慢。3 min 6过滤：取滤液。 7提取出含杂质较少的DNA，逆时针方向搅拌，稍慢。5 min 8DNA的鉴定：沸水浴5min 【实验十二】DNA的粗提取与鉴定 实验原理 DNA在氯
4、化钠溶液中的溶解度，是随着氧化钠的浓度的变化而改变的。当氯化钠的物质的量浓度为 2 molL时，DNA的溶解度最大，浓度为 014 molL时，DNA的溶解度最低。利用这一原理，可以使溶解在氯化钠溶液中的DNA析出。 DNA不溶于95%的酒精溶液，但是细胞中的某些物质则可以溶于酒精溶液。利用这一原理，可以进一步提取出含杂质较少的DNA。 DNA中含有脱氧核糖，能与二苯胺（沸水浴）反应生成蓝色物质，因此，二苯胺可以作为鉴定DNA的试剂。 目的要求1. 学会DNA的粗提取和鉴定的方法。2. 观察提取出来的DNA物质的颜色和形状。 材料用具 材料：活鸡或鲜血鸡血。 仪器：离心机、恒温水裕锅、载玻片，
5、玻璃棒，滤纸，滴管，量简（100 mL，l个），烧杯（100 mL，l个，50 mL、500 mL各 2个），试管（20 mL，2个），漏斗，试管夹，纱布。 试剂：酒精的体积分数为95的溶液（实验前置于冰箱内冷却24 h），蒸馏水，柠檬酸钠的质量浓度为 01gmL的溶液，氯化钠的物质的量浓度分别为 2 molL和0015 mol/L的溶液，二苯胺试剂。 方法步骤 实验前需要制备鸡血细胞液（由教师完成），制备的方法是：取柠檬酸钠的质量浓度为 01 gmL的溶液（抗凝剂）100 mL，置于500 mL烧杯中。将宰杀活鸡流出的鸡血（约180 mL）注入烧杯中，同时用玻璃棒搅拌，使血液与柠檬酸钠溶液充
6、分混合，以免凝血。然后，将血液倒入离心管内，用 1000 rmin的离心机离。2min，此时血细胞沉淀于离心管底部。实验时，用吸管除去离。心管上部的澄清液，就可以得到鸡血细胞液。 1提取鸡血细胞的细胞核物质 将制备好的鸡血细胞液5 mL10mL，注入到50 mL烧杯中。向烧杯中加入蒸馏水20 mL，同时用玻璃棒充分搅拌5 min，使血细胞加速破裂。然后，用放有纱布的漏斗将血细胞液过滤至500mL。取其滤液。 2溶解细胞核内的DNA 将氯化钠的物质的量浓度为 2 mol的溶液40mL加入到滤液中，并摇动烧杯，使其混合均匀，这时DNA在溶液中呈溶解状态。 3析出含DNA的粘稠物 沿烧杯内壁缓缓加入
7、蒸馏水，同时用玻璃棒不停地轻轻搅拌，这时烧杯中有丝状物出现，注意观察丝状物呈什么颜色。继续加入蒸馏水，溶液中出现的粘稠物会越来越多。当粘稠物不再增加时停止加入蒸馏水（这时溶液中氯化钠的物质的量浓度相当于0.14 molL）。 4滤取含DNA的粘稠物 用放有多层纱布的漏斗，过滤步骤3中的溶液至 500mL的烧杯中，含 DNA的粘稠物被留在纱布上。 5将DNA的粘稠物再溶解 取 1个 50 mL烧杯，向烧杯内注入氯化钠的物质的量浓度为 2 molL的溶液 20mL。用钝头镊子将纱布上的粘稠物夹至氯化钠溶液中，用玻璃择不停地搅拌，使粘稠物尽可能多地溶解于溶液中。 6过滤含有DNA的氯化钠溶液 取1个
8、100 mL烧杯，用放有两层纱布的漏斗过滤步骤5中的溶液。取其滤液，DNA溶于滤液中。 7提取含杂质较少的DNA 在上述滤过的溶液中，加入冷却的、酒精的体积分数为 95的溶液 50mL（使用冷却的酒精，对DNA的凝集效果较佳），并用玻璃棒搅拌，溶液中会出现含杂质较少的丝状物。用玻璃棒将丝状物卷起，并用滤纸吸取上面的水分。这种丝状物的主要成分就是DNA 。注意观察丝状物是什么颜色的。 8DNA的鉴定 取两支20 mL的试管，各加入氯化钠的物质的量浓度为0015 molL的溶液5 mL，将丝状物放入其中一支试管中，用玻璃棒搅拌，使丝状物溶解。然后，向两支试管中各加入4mlL的二苯胺试剂。混合均匀后，将试管置于沸水中加热 5 min，待试管冷却后，观察并且比较两支试管中溶液颜色的变化。将观察的结果填写在实验报告册上。 结论 步骤8的2支试管中溶液颜色的变化说明了什么？将得出的结论填写在实验报告册上。 讨论 1提取鸡血中的DNA时，为什么要除去血液中的上清液？ 2步骤回和步骤3中都需要加入蒸馏水，两次加入的作用相同吗？为什么？3DNA的直径约为2010-10 m，实验中出现的丝状物的粗细是否表示1个DNA分子直径的大小？