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1、生化分析相关概念,准确度为一次测量结果与被测量的真值之间的一致程度。 准确度是一个定性的概念，用于定性描述，如谈准确度高、低，是否合格。,测量误差:是测量结果减真值之差。,误差和准确度属于不同概念，两者之间不能划等号。,不准确度的数字表达是不确定度 (标准差和置信区间的半宽度表示)。,可以理解为测量结果与约定真值之差的范围。,生化分析相关概念,正确度 大量测量的均值与真值的接近程度。用偏倚表示不正确度 。 偏倚值(Bias=Xi-x),生化分析相关概念,精密度：表示测量结果中的随机误差大小的程度，即指在一定条件下进行多次测定时，所得结果之间的符合程度。 常用标准差或变异系数表示。,生化分析相关
2、概念,实验方法分类 决定性方法（definitive method）,参考方法（reference method）,常规方法（routine method）,决定性方法（definitive method）是指准确度最高，系统误差最小，经过详细的研究，没有发现产生误差的原因或在某些方面不够明确的方法，测定结果为“确定值”，与“真值”最接近。由于技术要求太高，费用昂贵， 用途：一级标准品定值；参考方法评价 ( 一般不用于常规工作 ),参考方法（reference method）是指准确度与精密度已经充分证实的分析方法，干扰因素少，系统误差很小，与重复测定的随机误差相比可以忽略不计，有适当的灵敏度
3、、特异性、直线性及较宽的分析范围。此类方法在条件优越的实验室中应经常使用。但它主要应用于鉴定常规方法，评价其误差大小，干扰因素，并决定其是否可以被接受。 用途：它也用于二级标准品定值，也可用于评价商品试剂盒等。 ( 有条件实验室可用于常规工作 ),常规方法（routine method）有足够的精密度、准确性、特异性和适当分析范围。 用途：经方法评估和学术组织认可后推荐为常规方法。 例如： TG 定量 决定性方法同位素稀释/质谱（ID/GC/MS） 参考方法酶法 常规方法酶法,实验方法选择原则 实用性：速度快、标本用量少、操作简便、安全可行。 可信性：精密度、准确度、敏感性、特异性均达到要求。
4、,血清三酰甘油测定,实验四,实验目的:,1.掌握酶法测定血清中三酰甘油的原理和意义 2.了解三酰甘油的正常值范围.,一 ， 血清甘油三酯/三酰甘油（TG），是一项重要的临床血脂常规测定指标，特别是随着对其致动脉粥样硬化（AS）作用研究的深入，TG作为冠心病的一项独立的危险因素日益受到重视 。,TG的生物化学,TG的生物化学,二 TG又称中性脂肪，由3分子脂肪酸和1分子甘油酯化而成，是体内能量的主要来源。TG处于脂蛋白的核心，在血中以脂蛋白形式运输。,除TG外，外周血中还存在甘油二酯、甘油一酯（两者总和不足TG的3%）和游离甘油（FG）。各种脂蛋白中，乳糜微粒（CM）、极低密度脂蛋白（VLDL）
5、及其残粒中，TG含量高，被统称为富含TG脂蛋白（TRL），也称残粒样脂蛋白（RLP）,TG的代谢,外源性途径 内源性途径,外源性途径：,指食物中的TG在小肠内水解成脂肪酸和甘油一酯、二酯后由肠粘膜吸收入细胞，再合成TG并与其他脂质形成CM，通过淋巴系统入血。CM中的TG在脂蛋白脂肪酶（LPL）作用下水解为甘油和游离脂肪酸（FFA），被细胞利用或贮存。,内源性途径：,CM水解产物CM残粒以受体介导的形式被肝脏吸收，其衍生物和一些新组分合成VLDL。,TG测定的方法学,化学法 色谱法 酶法,化学法,化学法用有机溶剂氯仿抽提标本中的TG，去除抽提液中磷脂等干扰物后，用碱水解（皂化）TG，以过碘酸氧化
6、甘油生成甲醛，然后用显色反应测甲醛。但因操作步骤繁多、技术要求高、不能自动化，而不适于常规工作应用。,化学法,1.Van Handel-Caslson法（二氯甲烷-硅酸-变色酸法） 比较准确 2.分溶抽提-乙酰丙酮显色法 比较简便， 条件温和，但灵敏度低 基本步骤：抽提、皂化、氧化、显色,色谱法,核素稀释/气相色谱/质谱技术（ID/GC/MS）主要用作参考系统中决定性方法的建立及参考物质的制备与定值，此法费用昂贵，样品处理复杂，难以推广应用。,酶法,1.磷酸甘油氧化酶法 最为普遍使用 酶试剂稳定，灵敏度高，线性范围宽 2.乳酸脱氢酶法 结果准确，但灵敏度低， 试剂不太稳定 3.甘油氧化酶法,磷
7、酸甘油氧化酶法实验原理:,TG + H2O,甘油+FFA,甘油-3-磷酸+ADP,甘油+ATP,甘油-3-磷酸+O2,磷酸二羟丙酮+H2O2,H2O2+4-AAP+DHBS,醌亚胺+ H2O,实验操作(手工分析）:,加入物 空白管 标准管 样本管 蒸馏水（ul） 20 标准液 （ul） 20 样本 （ul） 20 酶工作液（ml) 1.5 1.5 1.5 混匀，37孵育15min，以空白管调零，520nm波长处测定各管吸光度值(A)。,酶工作液,试剂1（稀释液） 过氧化物酶 EDTA 4-氨基安替比林 缓冲剂 试剂2（酶试剂） 脂蛋白脂酶 ATP EDTA 甘油激酶 甘油磷酸氧化酶 3，5-二
8、氯-2-羟基苯 磺酸盐 Mg2+,计算TG的含量 甘油三酯浓度（mmol/L)=A样/A标标准液浓度 (2.26mmol/L) 单位换算： 甘油三酯mmol/L88.5=甘油三酯mg/dL,实验操作(自动分析）,空白管 校准管 质控管 样本管 试剂1 （ul） 240 240 240 240 蒸馏水（ul） 3 标准液 （ul） 3 质控液 （ul） 3 样本（ul） 3 混匀，37孵育5min 试剂2（ul） 60 60 60 60 混匀，37孵育5min，以空白管调零，520nm波长处测定各管吸光度值(A)。,注意要点：,1酶试剂发红时，不可再用。 2加入显色剂要准确，加入后立即混匀。 3. 线性范围上限为11.4 mmol/L ，若超过用生理盐水稀释。,血清TG参考范围：,成人 0.451.69mmol/L(40150mg/dL),临床意义,TG一般随年龄增加而升高，体重超过标准者往往偏高。 原发性高TG血症多有遗传因素，包括家族性高TG血症与家族性高脂（蛋白）血症等。 继发性高TG血症见于糖尿病、糖原累积病、甲状腺机能减退、肾病综合症、妊娠、口服避孕药、酗酒等。,临床意义,富含TG的脂蛋白是CHD的独立危险因子，TG增加表明患者存在代谢综合症，需进行治疗。 TG降低比较少见，甲状腺功能亢进、肾上腺皮质功能减退和肝功能严重损伤时可见。,