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1、自身免疫抗体检测及临床意义,电力医院：马林,抗核抗体（ANA） 检测与临床应用,ANA的靶抗原分布：,细胞核,整个细胞，包括细胞核、细胞浆、细胞骨架、细胞分裂周期蛋白等。 ENA：抗可提取核抗原，包括RNP/Sm, Sm, SS-A, SS-B, Scl-70和Jo-1等 六种靶抗原,抗核抗体的定义 传统定义：针对细胞核成分的自身抗体的总称。 广义定义：针对细胞内所有抗原成分的自身抗体的总称。对ANA的理 解不再局限于核成分，而是指核酸和核蛋白抗体的总称, ANA可见于多种疾病，特别是结缔组织疾病，常作为结缔组织病的诊断、,病情判断和疗效观察的指标, 高滴度ANA则高度提示自身免疫性疾病, 在
2、非结缔组织病中也可出现阳性；正常人中（特别是老年人）也可出现阳,性，但滴度低,目前，ANA检测已成为临床上的一个极重要的自身免疫病的筛查实验。,ANA检测的临床意义,ANA检测的临床意义 系统性红斑狼疮,活动期 非活动期 药物诱导的红斑狼疮 混合性结缔组织病（MCTD、Sharp综合征） 类风湿性关节炎 进行性系统性硬化症 多发性肌炎及皮肌炎 干燥综合征 慢性活动性肝炎 溃疡性结肠炎 其它风湿病 正常人,95100 80100 100 100 2040 2050 8595 3050 7080 3040 26 5-10,美国风湿学会(ACR)立场声明, HEp-2 细胞包含大约100 至150
3、种自身抗原 其它初筛方法仅具有少量自身抗原,大约 35% SLE患者和IFT-ANA阳性患 者在其它初筛实验中为阴性结果,建议：, IIFT-ANA仍然为ANA检测的金标准, 医院或商业诊断所应用其它ANA检测方法时，必须要求为临床大夫提供足够 的数据证明其它ANA检测方法与IFT比较具有同样或更高的敏感度和特异性 实验室在ANA报告当中必须注明ANA检测方法,EUROIMMUN,ANA筛查:,间接免疫荧光法(IFT), 抗原谱完整 (细胞核、细胞浆), 检测ANA的金标准，具有很高的敏感性和特异性 基质组合: HEp-2细胞+灵长类肝,HEp-2细胞: 筛查不同的自身抗体,均质型 核膜型,核
4、点型 核糖体P蛋白,着丝点型 AMA,核仁型 高尔基体,Scl-70 溶酶体,Sm/RNP 肌动蛋白,SS-A/SS-B 波形蛋白,系统性红斑狼疮 (SLE),ANCA 相关性血管炎,慢性炎症性结缔组织病 (CICTD) 干燥综合征 (SS),Systemischer Lupus Erythematodes (SLE) dsDNA 系统性硬化症 (SSc) Scl -70 and CenpB,SS-A and SS-B 慢性炎症性结缔组织病 (CICTD) 多肌炎/皮肌炎 (PM/DM) Myositis Profile,夏普综合征 (MCTD) RNP Rheumatoide Arthrit
5、is (RA) EUROIMMUN,系统性红斑狼疮 (SLE), 红斑狼疮的特点,临床医生: 容易误诊的一类致死性疾病,免疫学家: 所有免疫系统的要件均参与致病机理产生过程, 临床发病特点,发病率: 40/100,000(北欧);200/100,000(黑人);250,000 (美国),患者寿命:4年/50%(1950); 15/80%(当前); 20岁诊断/35岁死亡几率1:6,以上受累;96%),EUROIMMUN,SLE 各器官的表现,关节炎 (至少2个关节,血液系统受累 (贫血等; 60%),狼疮肾炎 (51%),浆膜炎 (胸膜炎, 心包炎; 77%),神经系统受累 (30%) 皮肤
6、(蝴蝶状皮疹, 盘状狼疮; 74%),系统性红斑狼疮(SLE) 代表性的抗体,抗 dsDNA 抗体 抗核小体抗体 抗 Sm 抗体 抗核糖体 P 蛋白抗体,30-90% 50-95% 5-10% 5-15% EUROIMMUN,EUROIMMUN,核均质型 HEp-2细胞/猴肝,HEp-2细胞,猴肝,抗dsDNA 抗体 - 检测方法: IIFT, Farr-法 (RIA), ELISA or Blot IIFT dsDNA,HEp-2细胞,绿蝇短膜虫, 高度特异性抗体;, 70%患者阳性，0.5%正常人或RA患者阳性, 滴度与疾病活动性相关，但不适用于所有患者, 抗体滴度上升但临床症状不明显的患
7、者，抗体检测后5年内,80%患者进入活动期,抗dsDNA抗体与SLE,最新版“Autoantibodies” 描述,不同实验方法的结果并无可比性：,1、抗原来源不同；,2、抗原展现形式不同；,3、实验体系反应条件不同。,核均质:,抗核小体抗体(ANuA),靶抗原:,dsDNA-组蛋白-复合物的构象决定簇,方法:,IIFA,ELISA, Blot,临床意义:,SLE, 阳性率 50-95% (特异性100%),EUROIMMUN,抗核小体 ELISA: 敏感性、特异性、疾病活动度, ANuA 与疾病的活动性相关性强 (SLE DAI score),分组 SLE 干燥综合症 皮肌炎/多肌炎 系统性
8、硬化症 类风湿/骨关节炎 强直性脊柱炎 健康对照组 特异性,n 233 41 40 33 60 20 31 225,抗核小体阳性 144 (61.8%) 1 (2.4%) 1 (2.5%) 1 (3.0%) 1 (1.7%) 0 0 98.2%,Su et al., Clin Immunol 122: 115-120, 2007,LNTP (%),LN (%),CON (%),ANuA Anti-dsDNA,79 43,18 41,9 33,LNTP = lupus nephritis requiring renal transplantation（狼疮肾炎需要 肾移植） LN = biops
9、y proven lupus nephritis（肾活检确诊为狼疮肾炎） CON = SLE patients without nephritis（无肾炎SLE患者）,伴有狼疮肾炎的严重SLE的生物标记物,ANuA 与狼疮性肾炎 Stinton et al., Lupus 15: 394-400, 2007 狼疮肾炎是SLE的一种潜在的严重并发症 (高达 50%) 1.2% 需要进行肾移植的患者有狼疮肾炎,EUROIMMUN,抗U1-nRNP与Sm抗体,HEp-2细胞,猴肝,HEp-2细胞,抗U1-nRNP与Sm抗体 抗U1-nRNP/Sm抗体 抗Sm抗体 SLE 抗U1-nRNP抗体 SLE
10、 Sharp综合征,(MCTD) EUROIMMUN,抗U1-nRNP与Sm抗体,SLE: 15-40% MCTD: 95-100% SLE: 5-30% EUROIMMUN,抗U1-RNP抗体 抗Sm抗体 Function: Pre-mRNA splicing,EUROLINE,ANA 谱, 最多18种抗原， 增加了RNP亚单位, 自动化 操作, 全自动化 结果判读,EUROIMMUN,实验结果的解释（ANA谱）： 抗U1-nRNP/Sm和Sm抗体,抗 nRNP/Sm 抗体,抗 Sm 抗体,结果,解释,- ? +,- + + -,- + - +,U1-nRNP: Sm: - U1-nRNP:
11、 Sm: + U1-nRNP: Sm: - 结果不可靠,阴性 SLE SLE 或 MCTD 无,EUROIMMUN,抗核糖体P蛋白抗体,HEp-2细胞,猴肝,40 S 亚单位,60 S 亚单位,P0,P2 P2,according to: Mahler et al., J Mol Med, 2003,抗原:,核糖体60S亚单位的3个蛋白：P0, P1, P2. 在羧基末端有相同的免疫反应表位。 核糖体P抗原的五聚体复合物。 P1 P1,核糖体 P蛋白,核糖体 P 蛋白 ELISA: 敏感性和特异性 (1),群组 SLE 其他结缔组织病* 健康献血员,n 360 79 206,抗核糖体 P 蛋白
12、阳性数 34 (9.4%) 0% 0%,*系统性硬化症, 干燥综合症, 皮肌炎/多肌炎 对 SLE 100% 特异 EUROIMMUN,核糖体 P 蛋白 ELISA: 敏感性和特异性(2),群组 SLE MCTD SS SSc RA HD 特异性,n 185 21 55 66 89 100 310,抗核糖体P蛋白阳性数 10 (5.4%) 0 0 0 0 0 100% EUROIMMUN,EUROIMMUN,HEp-2细胞,增殖型细胞核抗原 (PCNA) Hep-2细胞,猴肝,增殖型细胞核抗原 (PCNA),靶抗原:,表达为细胞周期依赖性(S-期),三聚体 (36 kDa)，是 DNA 多聚酶
13、的辅因子并参与 DNA 修复调控,检测:,IIFT, Blot,临床意义:,SLE高特异性 (阳性率 3-7%), 与肾脏和CNS及血小板减少相关,系统性红斑狼疮 (SLE),ANCA 相关性血管炎,慢性炎症性结缔组织病 (CICTD) 干燥综合症 (SS),Systemischer Lupus Erythematodes (SLE) dsDNA 系统性硬化症 (SSc) Scl -70 and CenpB,SS-A and SS-B 慢性炎症性结缔组织病 (CICTD) 多肌炎/皮肌炎 (PM/DM) Myositis Profile,夏普综合症 (MCTD) RNP Rheumatoide
14、 Arthritis (RA) EUROIMMUN,干燥综合征（Sjgrens Syndrome） 外分泌腺受累的自身免疫疾病 症状: - 口腔干燥 - 唾液及眼泪减少,- 腮腺肿胀,口腔干燥,- 胰腺外分泌腺分泌不足 腮腺肿胀 EUROIMMUN,干燥综合征,SS-A (60 kDa) SS-B (47 kDa),40-95% 40-95%,代表性抗体,EUROIMMUN,抗SS-A/SS-B抗体,HEp-2细胞,猴肝,SS-A 抗原,Boire et al., 1995: - Ro-52抗体不与SS-A 抗原结合,- 纯化的 SS-A 抗原不包含 Ro-52,RNA + SS-A (60
15、kDa) + Ro-52 hY-RNA,RNA + SS-A (60 kDa) hY-RNA,SS-A (Ro-60), Ro-52 and SS-B,干燥综合症:,40-95%,SLE:,20-60%,新生儿狼疮:,抗SS-B抗体,干燥综合症: SLE: 新生儿狼疮:,40-95% 10-20% 78%,抗Ro-52 (52 kDa)抗体 非特异 EUROIMMUN,功能: 调控RNA翻译 抗SS-A (60 kDa)抗体,功能:RNA聚合酶III辅助蛋白,96% X,EUROIMMUN,抗Ro-52抗体:,不同组别中均可出现,抗Ro-52抗体: 风湿性疾病中的阳性率,疾病 干燥综合症 系统
16、性硬化症 肌炎 SLE MCTD RA,n 88 81 26 210 21 165,抗Ro-52抗体阳性 81 % 28 % 31 % 38 % 19 % 5%, 抗Ro-52抗体 在干燥综合症中阳性率较高，但没有疾病特异性 Meyer, Schlumberger et al., 4th Asian Congress on Autoimmunity, Singapore, Sept. 2009 EUROIMMUN,Anti-Ro52: 肝脏疾病中的阳性率,疾病 PBC AIH HBV HCV 献血员,n 100 60 50 50 50,抗Ro-52抗体 阳性 27 % 35 % 10 % 22
17、 % 0, 抗Ro-52抗体没有疾病特异性 Meyer, Schlumberger et al., 4th Asian Congress on Autoimmunity, Singapore, Sept. 2009,系统性红斑狼疮 (SLE),ANCA 相关性血管炎,慢性炎症性结缔组织病 (CICTD) 干燥综合症 (SS),Systemischer Lupus Erythematodes (SLE) dsDNA 系统性硬化症 (SSc) Scl -70 and CenpB,SS-A and SS-B 慢性炎症性结缔组织病 (CICTD) 多肌炎/皮肌炎 (PM/DM) Myositis Pr
18、ofile,夏普综合症 (MCTD) RNP Rheumatoide Arthritis (RA) EUROIMMUN,系统性硬化症 (SSc) 血管与结缔组织受累的自身免疫疾病 症状: - 指端硬化 (thin, sclerotic fingers) - 爪型手 - 面具脸 (嘴周边出现皱纹, 嘴唇变薄) - 毛细血管扩张 (表面血管永久性扩张) - 表皮钙质沉着 (血管壁与皮肤钙化),指端硬化，爪型手,毛细血管扩张,面具脸,EUROIMMUN 质沉着,皮肤钙,EUROIMMUN,系统性硬化症,实验室结果和临床数据的联合分析，有助于降低疾病诊断的模糊性， 同时为未来研究硬化症提供基础。,系统
19、性硬化症 (SSc) 代表性抗体,抗着丝点抗体 抗Scl-70抗体 抗原纤维蛋白抗体 抗RNA多聚酶抗体 抗PM-Scl抗体,12-43% 18-30% 6-8% 2-23% 1-16% EUROIMMUN,EUROIMMUN,抗着丝点抗体 HEp-2细胞/猴肝,HEp-2细胞,猴肝,EUROIMMUN,抗着丝点抗体,靶抗原:,着丝点-DNA 联合蛋白: 着丝点蛋白 (A, B, C, D),检测方法:,IIFT, ELISA, Blot,临床意义:,局限性 硬皮病 (CREST综合症):,经常出现在: 硬皮病-PBC-重叠综合症,EUROIMMUN,抗Scl-70抗体 HEp-2细胞/猴肝,
20、HEp-2细胞,猴肝,细胞核仁:,抗Scl-70抗体,靶抗原:,DNA-拓扑异构酶 I (100 kDa) DNA 双螺旋复制和转录,检测方法:,IIFA, ELISA, Blot,临床意义:,弥散性硬皮病的诊断标志 (50-75%).,预后: 较着丝点阳性的患者病情更严重。,抗着丝点B蛋白抗体与 抗Scl-70抗体,系统性硬化症 n = 295,抗 Scl-70 抗体 阳性 阴性,抗着丝点 B 蛋白抗体,阳性 阴性,1 66,106 122, 59% 系统性硬化症患者分别出现抗着丝点抗体或抗Scl-70抗体阳性 EUROIMMUN,EUROIMMUN,抗RNA聚合酶I抗体 HEp-2细胞/猴
21、肝,HEp-2细胞,猴肝,抗原纤维蛋白抗体 HEp-2细胞/猴肝,HEp-2细胞,猴肝 EUROIMMUN,EUROIMMUN,抗PM-Scl抗体 HEp-2细胞/猴肝,HEp-2细胞,猴肝,抗PM-Scl抗体,靶抗原:,PM-Scl: 11 到 16 个多肽复合物,在rRNA 和一些 U-snRNAs剪接中起作用,(PM-Scl-100, PM-Scl-75),检测方法:,IIFT, ELISA, Blot,临床意义:,重叠综合症的诊断标志，表现为肌炎和硬皮病症状 (阳性率 50-70%).,EUROLINE,系统性硬化症谱, 一个实验膜条包括13 种高特异性纯化抗原, 系统性硬化症(SSc
22、)血清学诊断, EUROBlotMaster自动化操作, EUROLineScan软件全自动结果判读,患者血清: 129 份SSc血清和202 份对照血清 50 PM/DM, 50 SLE, 42 RA, 60,HD ,所有抗原的血清命中率为: 85.3%.,系统性硬化症相关抗体,Meyer et al., 7th Congress on Autoimmunity in Ljubljana, May 2010,Arthritis Research ,与组蛋白乙酰基转移酶和核小体重塑活性有关的主要抗原 (218kDa),临床意义:,肌炎 5-15% (主要是皮肌炎),EUROIMMUN,抗Ku抗
23、体 HEp-2细胞/猴肝,HEp-2细胞,猴肝,细胞核颗粒:,抗Ku抗体 (p70/p80),靶抗原:,DNA结合的非组蛋白和DNA依赖的蛋白酶异源二聚体,分析方法:,IIFA, Blot,临床意义:,PM/Scl-重叠综合症 30-55%,SLE 5-10%,EUROIMMUN,其他与肌炎相关的抗体,Anti-SRP,Anti-PL-12,HEp-2细胞,HEp-2细胞,EUROLINE 肌炎相关抗原, 一个膜条上包括7 或 11 种高度纯化抗原(新: PM-,Scl, SRP, EJ, OJ), DM 和 PM及原发性肌炎的血清学诊断, EUROBlotMaster 自动化操作, EURO
24、LineScan全自动化判读结果,153 份肌炎患者血清 50 DM, 89 PM, 4 juvenile DM, 10 IBM 77 份对照血清 26 SjS, 26 SLE, 25 SSc ,Anti- Mi-2 Ku PM-Scl100 Jo-1 PL-7 PL-12 SRP,Prevalence 3% 3% 7% 12 % 2% 0% 5%,Specificity 100 % 97 % 100 % 99 % 100 % 100 % 97 %,EUROLINE 肌炎相关抗原 患者血清:,所有抗原的血清学命中率: 26%. Rnnelid et al., Autoimmun Rev, 20
25、09 EUROIMMUN,患者血清: 208 份肌炎患者血清,214 份对照血清 50 HD, 65 SLE, 34 SSc, 21 SjS, 13 非自身免疫性肌病, 23 CTD-相关性肌炎, 8 关节病,Anti-,Prevalence Specificity,Mi-2 Ku PM-Scl100 Jo-1 PL-7 or PL-12,4% 5% 4% 21 % 4%,98 % 95 % 100 % 100 % 100 %,EUROLINE肌炎相关抗原,所有抗原的血清学命中率: 37%. Ghirardello et al., Autoimmun Rev, 2009 EUROIMMUN,U
26、se of a commercial line blot assay as a screening test for autoantibodies in inflammatory myopathies,J. Rnnelid, S. Barbasso Helmers, H. Storfors, K. Grip, L. Rnnblom, K. Franck-Larsson, G. Nordmark, I.E. Lundberg,Autoimmunity Reviews 2009 Mar 11,相关参考资料,其他疾病中的抗核抗体,EUROIMMUN,抗线粒体抗体 (AMA) HEp-2细胞/猴肝,H
27、Ep-2细胞,猴肝,胞浆粗颗粒: 抗线粒体抗体 (AMA),靶抗原:,M1 M9: M2 (丙酮酸脱氢酶), M4 (亚硫酸氧化酶), M9 (糖原磷酸化酶 a).,分析方法:,IIFA, ELISA, Blot,临床意义:,PBC 患者出现抗体 M2, M4, M9 M2: PBC标志性抗体 (阳性率 95%) M4 : 阳性率较低或总伴有M2阳性 M9: PBC早期出现 (82%),核颗粒型,胞浆纤维型：波形蛋白、原肌球蛋白和肌动蛋白等,分裂期细胞阳性：纺垂体、中间体、中心粒等,细胞核,细胞浆,核糖核蛋白：Sm、nRNP、SS-A、SS-B Ku,细胞周期蛋白：I型（PCNA）和II型 ANA 核仁型：Scl-70、RNA多聚酶、PM-Scl和原纤维蛋白等 核浆点型：着丝点、核点等 胞浆颗粒型：线粒体、Jo-1、核糖体等,抗核抗体谱的分类 根据产生的荧光模型、靶抗原的分布部位分类如下： 核均质型：DNA、组蛋白和核小体等 核膜型：板层素、gp210等,谢谢,电力医院马林,