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1、丙型肝炎病毒感染人群的戊型肝炎流行特征分析丙型肝炎病毒感染人群的戊型肝炎流行特征分析 本文关键词：肝炎，病毒感染，人群，特征，流行丙型肝炎病毒感染人群的戊型肝炎流行特征分析 本文简介：摘要：目的了解丙型肝炎病毒（HCV）感染人群中的戊型肝炎病毒（HEV）重叠感染流行情况，为更有效地开展丙型肝炎和戊型肝炎防治工作提供科学依据。方法采集年10月年12月孝感地区HCV感染者的血清进行抗-HEVIgG、抗-HEVIgM筛查。对调查发现的抗-HEVIgM阳性样本进行核酸检测丙型肝炎病毒感染人群的戊型肝炎流行特征分析 本文内容：摘要：目的 了解丙型肝炎病毒 （HCV） 感染人群中的戊型肝炎病毒 （HEV）
2、 重叠感染流行情况， 为更有效地开展丙型肝炎和戊型肝炎防治工作提供科学依据。方法 采集年10月年12月孝感地区HCV感染者的血清进行抗-HEV Ig G、抗-HEV IgM筛查。对调查发现的抗-HEV IgM阳性样本进行核酸检测和基因分型。对HCV感染者进行肝功能筛查以及收集其人口学资料进行分析。结果 164例HCV感染者中抗-HEV Ig G阳性率为34.15%, 抗-HEV IgM阳性率为2.44% （4/164） .抗-HEV Ig G阳性率在性别和年龄上差异均无统计学意义 （P0.05） , 4个抗-HEV IgM阳性个体中异常指标2个， 异常个体值分别为ALT 328.05 U/L、
3、AST 259.80 U/L、总胆红素 （TBIL） 107.65mol/L、直接胆红素 （DBIL） 5.32mol/L和ALT 32.01 U/L、AST 40.20 U/L、总胆红素 （TBIL） 10.65mol/L、直接胆红素 （DBIL） 9.32mol/L, 其中1个HEV RNA为阳性， 基因型为d亚型。结论 HCV感染者HEV既往感染和急性感染较高。对有HCV感染史的人群进行HEV筛查很有必要， 同时要采用综合治疗。关键词：戊型肝炎病毒； 丙型肝炎病毒； 血清流行病学； 基因型； 混合感染；戊型病毒性肝炎 （hepatitis E, HE） 是经粪-口途径传播的急性自限性传染
4、病， 主要临床症状为食欲减退、恶心呕吐、乏力、肝大及肝功异常， 小儿发病率低， 孕妇患戊肝病死率高。现已是世界卫生组织公认为发展中国家重要的公共卫生问题之一1.HEV的感染呈全球性分布， 每年预估新发病例200万， 在发展中国家， 戊型肝炎属于介水传染病， 除了诱发肝病外， 还可能导致神经障碍2.HEV感染可能会导致HBV （hepatitis B virus） 、HCV （hepatitis C virus） 、HBV/HCV人群的慢性肝病增强3-6.目前HEV主要分为4种基因型， 其中HEV-型流行最广， 广泛分布在亚洲和非洲；HEV-型分布比较聚集， 主要集中于墨西哥、尼日利亚、纳米比亚
5、和其他几个西非国家；HEV-型在猪群等动物普遍存在， 但临床上感染此型病毒的病例几乎全部来自发达国家；HEV-型在印度、中国和一些欧洲国家均被发现可在动物间传播。目前我国报道的HEV主要有型和型， 其中HEV-型感染率超过HEV-型7.陆一涵等发现我国部分地区猪群中有型和型共存的现象8.我国目前HCV与HEV合并感染的报道较少。综述国外文献后发现， HCV感染人群感染HEV病毒都是HEV-型， 而我国主要流行的是HEV-型和型， 因此有必要加强HCV和HEV混合感染流行特征分析。笔者现对孝感地区HCV感染者进行HEV既往感染、急性期感染、肝功能指标分析和HEV基因型分析， 具体如下。1 资料与
6、方法1.1 研究对象在知情同意情况下， 年10月年12月通过安陆市疾病预防控制中心疾控科收集不同医院上报的HCV感染者信息， 告知研究目的， 在保障个人隐私的情况下， 在个人自愿参加这项调查研究的人员中采集抗-HCV阳性者164人的人口统计学数据和采集其血清样本。样本来源于安陆市疾病预防控制中心、安陆市普爱医院、安陆市中医院、安陆市烟店卫生院。采外周静脉血5 ml, 3 000r/min离心5 min, 吸取上层血清分成两管置-80保存。1.2 方法1.2.1 HEV抗体和转氨酶检测对164例HCV感染者检测抗-HEV Ig M和抗-HEVIg G （试剂由_万泰生物药业有限公司提供） .对1
7、64份样本进行谷丙转氨酶 （ALT） 、谷草转氨酶 （AST） 、直接胆红素 （DBIL） 和总胆红素 （TBIL） 检测 （试剂由武汉生之源生物科技有限公司提供） .ALT、AST、DBIL和TBIL采用IFCC速率法， ALT/AST40 U/L、DBIL6.8mol/L、TBIL18mol/L或2mol/L判为异常。具体操作严格按试剂说明书进行， 整个过程严格进行质量控制。1.2.2 部分HEV ORF2区域序列分离对抗-HEV Ig M阳性样本用QIAamp Viral RNA Mini kit提取HEV RNA （QIAGEN） , 取备用血清样品140l按试剂说明书的步骤进行提取，
8、 最后获得30l的RNA提取液。Primer Script 1st strand c DNA synthesis kit （TAKARA） , 取5l RNA按照试剂说明书的步骤进行反转录。用巢氏RT-PCR反转录产物进行HEV ORF2区域部分序列扩增， PCR引物和程序设置按照参考文献提供的方法操作9-10.整个实验重复两次， 阳性结果， 割胶纯化后进行克隆测序 （上海生物工程有限公司） .1.2.3 序列分析参照序列为HEV型代表序列：L08816 （a） 、AY230202 （b） 、AY204877 （c） ;型代表序列：M74506;型代表序列：AF060668 （a） 、AB18
9、9073 （b） 、AB073912 （c） ;IV型代表序列：ABl97674 （a） 、AF103940 （b） 、AB161719 （c） 、AB161717 （c） 、AJ272108 （d） 、FJ461765 （d） 、AY723745 （e） 、AB0825558 （f） 、AB220974 （f） 、AB108537 （g） 、GU188851 （h） 、KU974934 （h） 、KU974936 （h） 、JQ993308 （i） 、DQ450072 （i） .1.3 统计学处理采用Excel 进行数据录入， 使用SPSS 17.0软件的率的检验对结果进行统计分析。使用Me
10、ga 5.0软件对不同HEV ORF2部分序列进行比对， 分析核苷酸序列的同源性， 并选择合适模型法构建系统进化树。2 结果2.1 一般情况164例HCV者平均年龄 （53.0312.25） 岁， 其中抗-HEV Ig G阳性率为34.15% （56/164） , 抗-HEV Ig M阳性率为2.44% （4/164） .男性抗-HEV Ig G阳性率为32.0% （24/75） , 女性抗-HEV Ig G阳性率为35.96% （32/89） , 差异无统计学意义 （=0.283, P=0.595） .2.2 抗HEV-Ig G在HCV感染者中的年龄分布HCV感染者抗-HEV Ig G阳性率
11、在年龄上分布差异无统计学意义 （=0.927, P=0.921） （见表1） .2.3 ORF2核苷酸部分序列同源性分析和构建基因进化树采取巢式RT-PCR检测4份抗HEV-Ig M阳性血清标本， HEV RNA总检出率为25.00% （1/4） .将分离的HEV病毒株ORF2 304 bp核苷酸序列与参考病毒株序列进行比对并绘制系统进化树， 分析显示， HEV病毒株基因型属于d亚型， 与年湖北省人源HEVd （FJ461765） 序列同源性为97.37%.系统进化树见图1.2.4 抗-HEV Ig M阳性个体肝功能指标4个抗-HEV Ig M阳性个体肝功能指标2个正常， 2个异常， 分别是A
12、LT 328.05 U/L （正常参考值040 U/L） 、AST 259.80 U/L （正常参考值040 U/L） 、TBIL107.65mol/L （正常参考值3.4220.5mol/L） 、DBIL 5.32mol/L （正常参考值06.8mol/L） 和ALT 32.01 U/L （正常参考值040 U/L） 、AST 40.20U/L （正常参考值040 U/L） 、TBIL 10.65 U/L （正常参考值3.4220.5mol/L） 、DBIL 9.32 U/L （正常参考值06.8mol/L） .3 讨论本调查研究首次开展HCV感染者的HEV流行调查， 其HEV既往感染和急性
13、感染较高， 因此要开展HCV感染者的HEV筛查。本次HCV感染者没有进行慢性HEV感染调查， 先前国外有关报道HCV和HBV混合感染会导致肝炎病情加重3-6, 因此应该增加样本量对HCV感染者抗-HEV Ig M病人进行追踪调查， 以进一步研究我国HCV与HEV混合感染的慢性转化情况。本次调查性别之间HEV既往感染差异无统计学意义。不同年龄组之间既往感染差异也无统计学意义， 跟以往独自HEV既往感染随年龄增长不一致11-12, 可能是由于样本量不够多， 后续需增加样本量验证。本研究仅仅成功分离出1条304 bp HEV ORF2序列， 经同源性比较和系统进化树分析， 分离出的1条序列属于d亚型
14、。与年湖北省人源HEVd （FJ461765） 序列同源性为97.37%.d亚型是否在此区域流行和导致混合感染后慢性转化还要增加HEV RNA阳性样本量予以验证。与先前山东省公开的猪源HEVd （基因编号：KF176370） 的同源性为97.04%, 暗示可能存在猪源HEV传给人类， 且年对孝感地区商品猪的HEV急性感染调查结果显示普遍存在HEV急性感染13.中国主要存在HEV和型。1986年我国暴发流行了HEV型导致119 280人发病， 707人死亡14.近年来中国HEV感染超过HEV， 目前中国流行主要是HEV15.因此， 要加强对HEV在国内流行趋势和特征监测。4个抗-HEV Ig M
15、阳性个体肝功能指标2个正常， 2个异常， 表明存在亚临床症状， 但有临床症状的比率较高， 可能跟采集抗-HEV Ig M阳性样本量较少有关， 后期需增加此类样本量加以验证。混合感染是否会导致临床症状加重需要进行后期追踪研究。戊肝是一种人兽共患病， 张守德等报道安陆市是湖北省生猪养殖比较集中的地区， 对周边地区输出量较大， 而且血清学调查发现猪HEV阳性率显着高于普通人群16-17.因此， 安陆市HCV感染者应进一步避免接触生猪这一传染源。我国已经生产和批准了全球第一个预防戊肝的疫苗， 对易感和重点人群接种疫苗是预防戊肝的重要措施；同时采取切断传播途径为主的综合性预防措施来控制戊肝的流行。有关报
16、道HEV的不同基因型热耐受性不一致18.因此， 加强HEV分型后， 应根据不同基因型热耐受性不同有针对地开展HEV消杀工作。参考文献1AGGARWAL R, NAIK S.Epidemiology of hepatitis E:current statusJ.J Gastroenterol Hepatol, , 24 （9） :1484-1493.2BLASCO-PERRIN H, ABRAVANEL F, BLASCO-BAQUE V, et al.Hepatitis E, the neglected oneJ.Liver Int, , 36 （S1） :130-134.3CHENG SH,
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