牛肉膏蛋白胨培养基配方.doc

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1、.牛肉膏蛋白胨培养基配方:牛肉膏蛋白胨培养基是一种应用最广泛和最普通的细菌基础培养基,有时又称为普通培养基。它含有牛肉膏、蛋白胨和NaCl。其中牛肉膏为微生物提供碳源和能源,磷酸盐、蛋白胨主要提供氮源,而NaCl提供无机盐。在配制固体培养基时还要加入一定量琼脂作凝固剂。琼脂在常用浓度下96时溶化,一般实际应用时在沸水浴中或下面垫以石棉网煮沸溶化,以免琼脂烧焦。琼脂在40时凝固,通常不被微生物分解利用。固体培养基中琼脂的含量根据琼脂的质量和气温的不同而有所不同。 由于这种培养基多用于培养细菌(荤食),因此,要用稀酸或稀碱将其pH调至中性或微碱性,以利于细菌的生长繁殖。 牛肉膏蛋白胨培养基的配方如

2、下: 牛肉膏 3g、蛋白胨 10g、NaCl 5g、琼脂 1520g、水 1000ml、pH 7476(7.08.0)三、器材牛肉膏,蛋白胨, NaCl,琼脂;1mol/L NaOH, 1mol/L HCl;试管,三角烧瓶,烧杯,量筒,玻棒,培养基分装器,扭力天平,牛角匙,高压蒸汽灭菌锅,pH试纸( pH 5590),棉花,牛皮纸,记号笔,麻绳,纱布等。四、操作步骤 1称量按培养基配方比例依次准确地称取牛肉膏、蛋白胨、NaCl放入烧杯中。牛肉膏常用玻棒挑取,放在小烧杯或表面皿中称量,用热水溶化后倒入烧杯。也可放在称量纸上,称量后直接放入水中,这时如稍微加热,牛肉膏便会与称量纸分离,然后立即取出

3、纸片。蛋白胨很易吸潮,在称取时动作要迅速。另外,称药品时严防药品混杂,一把牛角匙用于一种药品,或称取一种药品后,洗净、擦干,再称取另一药品,瓶盖也不要盖错。2溶化在上述烧杯中可先加入少于所需要的水量,用玻棒搅匀,然后,在石棉网上加热使其溶解。待药品完全溶解后,补充水分到所需的总体积。如果配制固体培养基,将称好的琼脂放入已溶化的药品中,再加热溶化,在琼脂溶化的过程中,需不断搅拌,以防琼脂糊底使烧杯破裂。最后补足所失的水分。 3调pH在未调pH前,先用精密pH试纸测量培养基的原始pH值,如果pH偏酸,用滴管向培养基中逐滴加入1mol/L NaOH,边加边搅拌,并随时用pH试纸测其pH值,直至pH达

4、76。反之,则用1mol/L HCl进行调节。注意pH值不要调过头,以避免回调,否则,将会影响培养基内各离子的浓度。对于有些要求pH值较精确的微生物,其pH的调节可用酸度计进行(使用方法,可参考有关说明书)。4过滤趁热用滤纸或多层纱布过滤,以利结果的观察。一般无特殊要求的情况下,这一步可以省去(本实验无需过滤)。5分装按实验要求,可将配制的培养基分装入试管内或三角烧瓶内。分装装置见图-1。分装过程中注意不要使培养基沾在管口或瓶口上,以免沾污棉塞而引起污染。(1)液体分装分装高度以试管高度的1/4左右为宜。精品.(2)固体分装分装试管,其装量不超过管高的1/5,灭菌后制成斜面,如图-2。分装三角

5、烧瓶的量以不超过三角烧瓶容积的一半为宜。(3)半固体分装试管一般以试管高度的1/3为宜,灭菌后垂直待凝。6加塞培养基分装完毕后,在试管口或三角烧瓶口上塞上棉塞,以阻止外界微生物进入培养基内而造成污染,并保证有良好的通气性能(棉塞制作方法附本实验后面)。7包扎加塞后,将全部试管用麻绳捆扎好,再在棉塞外包一层牛皮纸,以防止灭菌时冷凝水润湿棉塞,其外再用一道麻绳扎好。用记号笔注明培养基名称、组别、日期。三角烧瓶加塞后,外包牛皮纸,用麻绳以活结形式扎好,使用时容易解开,同样用记号笔注明培养基名称、组别、日期。8灭菌将上述培养基以105kg/cm2(15磅/英寸2),1213, 20分钟高压蒸汽灭菌。如

6、因特殊情况不能及时灭菌,则应放入冰箱内暂存。9搁置斜面将灭菌的试管培养基冷至50左右,将试管棉塞端搁在玻棒上,搁置的斜面长度以不超过试管总长的一半为宜。10无菌检查将灭菌的培养基放入37的温室中培养2448小时,以检查灭菌是否彻底。PDA培养基配方:特点及用途PDA培养基是人们对马铃薯葡萄糖琼脂培养基的简称,即Potato Dextrose Agar (Medium),依次对应马铃薯、葡萄糖、琼脂的英文。 一种常用的培养基,宜培养酵母菌、霉菌、蘑菇等真菌(素食)。酵母菌PH(3.86.0),霉菌(4.05.8)等。 按物理性状划分:固体培养基 ,按培养基成分划分:半合成培养基配方马铃薯 200

7、克 葡萄糖 20克 琼脂 1520克 自来水 1000毫升 自然PH配制步骤其做法是称取200g马铃薯,洗净去皮切成小块,加水煮烂(煮沸2030分钟,能被玻璃棒戳破即 可),用四层纱布过滤,再据实际实验需要加葡萄糖和琼脂,继续加热搅拌混匀,稍冷却后再补足水分至1000毫升,分装试管,加塞、包扎,(121)灭菌20分钟左右后取出试管摆斜面,冷却后贮存备用。 其他事项1.培养基经灭菌后,必须放在37C温箱培养24h,无菌生长者方可使用。 2.PDA培养基一般不需要调pH。对于要调节pH的培养基,一般用pH试纸测定其pH。如果培养基偏酸或偏碱时,可用lmolLNaOH或lmolLHCL溶液进行调节。

8、调节时应逐滴加入NaOH或HCl溶液,防止局部过酸或过碱破坏培养基成分。 精品.3.培养基在使用时也可以做成不含琼脂的液体培养基,用于菌类的震荡培养。 4.培养基也可以加入氯霉素或土霉素,加入量为0.1g/L培养基,主要是为了抑制细菌的生长,减少干扰性高氏1号培养及配方:培养放线菌用 ,改良的高氏 可溶性淀粉 2g ,KNO3 0.1g ,K2HPO4 0.05g ,MgSO4 7H2O 0.05g ,NaCl 0.05g ,FeSO4 7H2O 0.001g (母液),琼脂 2g ,自来水 100mL ,pH 7.27.4 ,灭菌 1.05kg/cm2,20min 配制时,先用少量冷水,将淀

9、粉调成糊状,倒入少于所需水量的沸水中,在火上加热,边搅拌边依次逐一溶化其他成分,溶化后,补足水分到100ml,调pH,121灭菌20min。 高温灭菌后,倒平皿前加入10%酚2滴至100ml培养基中混匀,将培养基倒入平皿内约15ml/皿。 高氏1号: 可溶性淀粉(20g),KNO3(1g),K2HPO4(0.5g),MgSO4 7H2O(0.5g),NaCl(0.05g),FeSO4 7H2O(0.01g),琼脂 20g,pH=7.4-7.6 和改良的差别就在于有没有FeSO4 7H2O 高氏常常配完后变成褐色也是由于Fe2+氧化为Fe3+的关系,所以常常有人用螯合的FeSO4,防止氧化。 如有侵权请联系告知删除,感谢你们的配合!精品

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