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1、名校名 推荐5.3 血红蛋白的提取和分离达标测试人教版选修一一、选择题1电泳是指带电粒子在电场的作用下向着与其所带电荷_方向的电极移动()A 相同B 相反C相对D相向2在血红蛋白分离过程中，使用缓冲液的作用是()A 维持溶液浓度不变B维持溶液酸碱度不变C催化蛋白质分离过程顺利完成D无实际意义3下列有关提取和分离血红蛋白的叙述，错误的是()A 样品的处理就是通过一系列操作收集到血红蛋白溶液B通过透析可以去除样品中分子质量较大的杂质，此为样品的粗提取C可通过凝胶色谱法将相对分子质量大的杂质蛋白除去，即样品的纯化D可通过SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳鉴定血红蛋白的纯度4凝胶色谱分离法分离蛋白质时，凝胶的
2、种类较多，但其作用的共同点是()A 改变蛋白质分子通过凝胶时的路径B吸附一部分蛋白质，从而影响蛋白质分子的移动速度C将酶或细胞固定在凝胶中D与蛋白质分子进行化学反应，从而影响其移动速度5下列各项中，除哪项外均为电泳使样品中各分子分离的原因()A 分子带电性质的差异B 分子的大小C分子的形状D分子的变性温度6下列关于样品的加入和洗脱的叙述，正确的是()A 先加入1 mL 透析后的样品B加样前要使缓冲液缓慢下降全部流出- 1 -名校名 推荐C如果红色区带均匀一致地移动，说明色谱柱制作成功D洗脱时可以用缓冲液也可以用清水7凝胶柱制作的顺序一般是()橡皮打孔挖凹穴装玻璃管盖尼龙网盖尼龙纱将橡皮塞插入玻
3、璃管接尼龙管、装螺旋夹柱顶插入安装玻璃管的橡皮塞A BCD8凝胶色谱柱制作成功的标志是()A 凝胶装填紧密、均匀B凝胶色谱柱中有气泡C洗脱中，红色区带均匀一致移动D洗脱中，红色区带偏向左边移动二、简答题9凝胶色谱技术是六十年代初发展起来的一种快速而又简单的分离技术，由于设备简单、操作方便，不需要有机溶剂，对高分子物质有很高的分离效果，目前已经被生物化学、分子生物学、生物工程学、分子免疫学以及医学等有关领域广泛应用，不但应用于科学实验研究，而且已经大规模地用于工业生产。据图回答问题：(1)a 、 b均 为 蛋 白 质 分 子 ， 其 中 先 从 层 析 柱 中 洗 脱 出 来 的 是 _ ， 原
4、 因 是_- 2 -名校名 推荐_ 。(2) 自 己 制 作 凝 胶 色 谱 柱 时 ， 在 色 谱 柱 底 部 d 位 置 相 当 于 多 孔 板 的 结 构 可 由_ 替代。(3)装填凝胶色谱柱时，色谱柱内不能有气泡存在，原因是_ 。(4)若选用 Sephadex G 100，则 “ G”示表 _ ，100 表示 _ 。10红细胞含有大量血红蛋白，红细胞的机能主要是由血红蛋白完成，血红蛋白的主要功能是携带O2 或 CO2，我们可以选用猪、牛、羊或其他脊椎动物的血液进行实验，来提取和分离血红蛋白，请回答下列有关问题：(1)血红蛋白提取和分离的过程可分为四步：_、_、_和_。(2)实验前取新鲜
5、的血液，要切记在采血容器中预先加入柠檬酸钠，取血回来，马上进行离心，收集血红蛋白溶液。加入柠檬酸钠的目的是_ 。 以 上 所 述 的 过 程 即 是 样 品 处 理 ， 它 包 括 _ 、_、收集血红蛋白溶液。(3)洗涤红细胞的目的是_ 。(4)你如何知道红细胞已洗涤干净？_ 。(5)分离红细胞时的离心速度及离心时间分别是_ 。(6)若离心速度过高和时间过长结果会怎样？_ 。(7)将收集的血红蛋白溶液放在透析袋中进行透析，即样品的粗分离。- 3 -名校名 推荐透析的目的是_ ；透析的原理是_ 。(8)然后通过凝胶色谱法将样品进一步纯化，最后经SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳进行纯度鉴定。样品纯化的目的
6、是_ 。达标测试1B在一定 pH 作用下， 生物大分子中有某些可解离的基团，这些基团会带上正电荷或负电荷，在电场作用下，这些带电分子会向着与其所带电荷相反的电极移动。2 B分离蛋白质时加入缓冲液，其原因是缓冲液在一定范围内能抵制外界酸和碱对反应溶液 pH 的影响，保持pH 基本不变。3 B血红蛋白的提取和分离一般分为四步：样品处理、粗分离、纯化和纯度鉴定。其中样品处理又包括红细胞的洗涤、血红蛋白释放、分离血红蛋白溶液等步骤，其目的是获得血红蛋白溶液；粗分离即透析，其目的是除去样品中相对分子质量较小的杂质，故B 项描述错误。4 A凝胶的种类较多，但每种凝胶内部都有孔隙。相对分子质量不同的蛋白质通
7、过凝胶时，相对分子质量较小的蛋白质分子可以进入凝胶内部，通过的路程较长，洗脱时从凝胶柱中出来的较晚，相反相对分子质量较大的蛋白质分子则可以较早的洗脱出来，从而达到分离蛋白质的目的。5 D电泳是指带电粒子在电场作用下发生迁移的过程，样品分子的带电性质不同、分子的大小和形状不同都会影响带电粒子在电场中的迁移速度，与分子的变性温度无关，故选 D项。6 C加样前，打开色谱柱下端的流出口，使柱内凝胶面上的缓冲液缓慢下降到与凝胶- 4 -名校名 推荐面齐平，关闭出口之后，用吸管小心地将1 mL 透析后的样品加到色谱柱的顶端。7B凝胶柱制作的一般流程是：选择玻璃管选择合适的橡皮塞打孔 挖凹穴 盖尼龙网 盖尼
8、龙纱 将橡皮塞插到玻璃管接尼龙管 装螺旋夹 柱顶插入安装玻璃管的橡皮塞。8C洗脱过程中，如果红色区带均匀一致地移动，说明色谱柱制作成功。9(1)aa 相对分子质量大，无法进入凝胶内部的通道，只能在凝胶外部移动，路程较短，移动速度较快(2)尼龙网和尼龙纱(3) 气泡会搅乱洗脱液中蛋白质的洗脱次序，降低分离效果(4)凝胶的交联程度，膨胀程度及分离范围凝胶得水值解析用凝胶色谱法分离各种大分子物质时，大分子物质先洗脱出来，然后是小分子物质。大分子物质由于直径较大，不易进入凝胶颗粒的微孔，而只能分布于颗粒之间，所以向下移动的速度较快。小分子物质除了可在凝胶颗粒间隙中扩散外，还可以进入凝胶颗粒的微孔中，在
9、向下移动的过程中，从一个凝胶内扩散到颗粒间隙后再进入另一凝胶颗粒，如此不断地进入和扩散，小分子物质的下移速度落后于大分子物质，从而落后于大分子物质洗脱出来。在色谱柱中填凝胶的时候要尽量紧密，以降低凝胶颗粒之间的空隙。一是在装填凝胶柱时，不得有气泡存在，因为气泡会搅乱洗脱液中蛋白质的洗脱次序，降低分离效果。二是凝胶色谱操作过程中，不能发生洗脱液流干，露出凝胶颗粒的现象。一旦发生上述两种情况，凝胶色谱柱需要重新装填。10 (1)样品处理粗分离纯化纯度鉴定(2) 防止血液凝固红细胞的洗涤血红蛋白的释放(3)去除血浆蛋白(4)离心后的上清液没有黄色(5) 低速500 r/min ；短时间如2min(6) 离心速度过高和时间过长会使白细胞等一同沉淀，得不到纯净的红细胞，影响后续血红蛋白的提取纯度(7) 去除分子量较小的杂质透析袋能使小分子自由进出，而大分子则保留在袋内(8)通过凝胶色谱法将相对分子质量大的杂质蛋白除去- 5 -