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1、讨论2：如何证明他们是遗传物质？,讨论3：怎样才能将细胞内的这些物质分离出来？,讨论1：构成生物体的遗传物质是什么？,5.1 DNA的粗提取与鉴定,一、基础知识,（一）提取DNA的方法,1.提取生物大分子的基本思路,选用一定的物理或化学方法，分离具有不同物理或化学性质的生物大分子,2.提取DNA的基本思路,提取DNA，去除其他成分 利用DNA与RNA、蛋白质和脂质等 在物理和化学性质方面的差异, DNA的溶解性,DNA和蛋白质等成分 在不同浓度的NaCl溶液中溶解度不同,利用这一特点， 选择适当的盐浓度 就能使DNA充分溶解， 而使杂质沉淀；,或者让其他成分溶解， DNA析出,3.DNA等大分
2、子的理化性质,DNA不溶于酒精溶液， 但细胞中某些蛋白质则溶于酒精。 将DNA与蛋白质进一步分离。, DNA不溶于酒精溶液, DNA对酶、高温和洗涤剂的耐受性, 蛋白酶水解蛋白质， 对DNA没有影响, 高 温大多数蛋白质不能忍受6080 而DNA在80以上才会变性, 洗涤剂溶解细胞膜，去除脂质和蛋白质 但对DNA没有影响,试剂：,（二）DNA的鉴定,条件：,二苯胺,沸水浴条件下，DNA遇二苯胺被染成蓝色,沸水浴,现象：,二、实验设计,（一）实验材料的选取,从下列材料中选取23种,原则：,菜花、香蕉、猕猴桃、洋葱、豌豆、菠菜； 鱼卵、猪肝、鸡血、哺乳动物的红细胞； 在液体培养基中培养的大肠杆菌,
3、凡是含有DNA的生物材料都可以考虑 选用DNA含量相对较高的组织,（二）破碎细胞，获取含DNA的滤液,1、动物细胞,2、植物细胞,容易破碎,需要溶解细胞膜,鸡血细胞溶液： 加入一定量的蒸馏水，同时用玻璃棒搅拌，过滤后收集滤液,想一想：为什么加入蒸馏水能使鸡血细胞破裂？,蒸馏水对于鸡血细胞来说是一种低渗液体， 水分大量进入血细胞，使血细胞胀裂； 加上搅拌作用，加速鸡血细胞细胞膜、核膜破裂，从而释放出DNA, 加入一定的洗涤剂和食盐, 充分的搅拌和研磨，过滤后收集研磨液,想一想：洗涤剂和食盐的作用分别是什么？,洗涤剂离子去污剂，能溶解细胞膜，利于DNA释放 食 盐NaCl，利于DNA的溶解于研磨液
4、中,使细胞核内的DNA释放不完全，提取的DNA量变少，导致看不到丝状沉淀物、用二苯胺鉴定不显示蓝色等,为了纯化提取的DNA需要将滤液作进一步处理,讨论：滤液/研磨液中可能含有哪些成分？,答：可能含有核蛋白、多糖和RNA等杂质,想一想：如果研磨不充分，会对实验结果产生 怎样的影响？,1. DNA的溶解性,2. DNA对酶、高温和洗涤剂的耐受性,（三）除去滤液中的杂质,讨论：方案二与方案三的原理有什么不同？,方案二：利用蛋白酶分解杂质蛋白，使提取的DNA 与蛋白质分开； 方案三：利用DNA和蛋白质对高温耐受性的不同， 使蛋白质变性，与DNA分离,（四） DNA的析出与鉴定,与滤液体积相等的冷却的酒
5、精溶液(体积分数95)， 静置23min，溶液中会出现白色丝状物 粗提取DNA 用玻璃棒沿一个方向搅拌， 卷起丝状物，并用滤纸吸取上面的水,1、DNA的析出,2. DNA的鉴定, 向两支试管中分别加入 2mol/L NaCl 溶液5ml 其中一支试管中加入DNA丝状物 各加入二苯胺试剂4ml 混匀后，置于沸水浴中加热5min 待冷却后，比较两只试管中溶液的颜色变化 观察现象：,溶解丝状物的溶液变为蓝色,观察你提取的DNA颜色， 如果不是白色丝状物， 说明DNA中的杂质较多； 二苯胺鉴定出现蓝色 说明实验基本成功， 如果不呈现蓝色， 可能所提取的DNA含量低， 或是实验操作中出现错误， 需要重新
6、制备,四、课题成果评价：,是否提取出了DNA,课题延伸,本课题使用的洗涤剂是多组分的混合物，在严格的科学实验中很少使用。实验室提取高纯度的DNA时，通常使用十六烷基三甲基溴化铵（CTAB）、十二烷基硫酸钠（SDS）或吐温等化学试剂。,提取DNA的第一步是材料的选取，其目的是一定要选取DNA含量较高的生物材料，否则会由于实验过程中或多或少的损失而造成检测的困难；第二步是DNA的释放和溶解，这一步是实验成功与否的关键，要尽可能使细胞内的DNA全部溶解；第三步是DNA的纯化，即根据DNA的溶解特性、对酶及高温的耐受性的不同等特性，最大限度地将DNA与杂质分开；最后一步是对DNA进行鉴定，这是对整个实
7、验的结果的检测。,1、请解释提取DNA的实验操作主要步骤的目的,练习,2、你认为从细胞中提取某种特定的蛋白质与提取DNA一样容易吗？,答：提取蛋白质比提取DNA的难度大。这是因为，与DNA相比，蛋白质对温度、盐浓度、pH等条件要敏感得多，很容易失活；并且蛋白质的空间结构多种多样，理化性质各不相同，使得蛋白质的提取没有一种统一的方法，只能根据特定蛋白质的特性摸索提取的条件，设计特定的方法。,2.实验中NaCl的物质的量浓度为2 molL和0.14 molL对DNA有何影响?,1.在DNA的粗提取实验过程中，两次向烧杯中加入蒸馏水的作用是( )。 A.稀释血液、冲洗样品 B.使血细胞破裂、降低Na
8、Cl浓度使DNA析出 C.使血细胞破裂、增大DNA溶解量 D.使血细胞破裂、提取含杂质较少的DNA,答：B,答：前者是溶解DNA，后者是使DNA析出,3.DNA遇二苯胺(沸水浴)会染成( ) A.砖红色 B.橘黄色 C.紫色 D.蓝色,4.提取鸡血中的DNA时，为什么要除去血液 中的上清液?,答：DNA的提取，关键是对杂质的去除，由于上清液是血液中的血浆部分，不含DNA，所以要除去上清液(含有蛋白质)。,答：D,为什么反复地溶解与析出DNA，能够去除杂质？,1、用高盐浓度的溶液溶解DNA，能除去在高盐中不能溶解的杂质； 2、用低盐浓度使DNA析出，能除去溶解在低盐溶液中的杂质。 因此，通过反复
9、溶解与析出DNA，就能够除去与DNA溶解度不同的多种杂质。,过滤用蒸馏水稀释过的鸡血细胞液 目的:获得含核物质的滤液 过滤含粘稠物的0.14mol/LNaCl溶液 目的:获取纱布上的粘稠物 过滤溶解有DNA的2mol/LNaCl溶液 目的:得到含DNA的滤液,本实验中有三次过滤 ,分别有什么作用?,第一次搅拌加蒸馏水的鸡血细胞液 加速细胞的破裂 第二次搅拌加2mol/LNaCl溶液的滤液 使DNA与溶液混合均匀 第三次搅拌加蒸馏水至0.14mol/LNaCl溶液 稀释NaCl溶液,析出DNA 第四次搅拌放入2mol/LNaCl溶液中纱布上的粘稠物 使DNA尽可能多的溶于溶液中 第五次搅拌体积分数为95%的酒精 提取含杂质较少的DNA,实验中有五次用玻璃棒搅拌?分别有什么作用?,加入柠檬酸钠溶液的目的是防止血凝固,加速血细胞破裂,溶解DNA,使2mol/L的NaCl溶液稀释至0.14mol/L使得DNA最大限度地释出,使含DNA的黏稠物被留在纱布上,使含DNA的黏稠物尽可能多的溶解于溶液中,除去含DNA的滤液中的杂质,提取DNA, A出现蓝色 B无变化,