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克氏双糖铁琼脂(KIA) 的原理和使用方法一KIA常用于观察微生物发酵葡萄糖和乳糖的能力，只用KIA一种就可以把肠杆菌科细菌和其他科细菌区别出来。KIA成分中含有葡萄糖和乳糖，二者比例为 1：10， 指示剂为酚红，其在PH6.8时变为黄色，而KIA的PH为7.4，产少量的酸就可导致颜色变化。二生化原理：斜面部分暴露于空气中，为有氧环境。而下部与空气隔绝是相对厌氧的环境。因此配KIA时，最重要的是斜面部分和管下部琼脂的长度，两者均为3cm ，以保证两部分相对应的有氧或厌氧环境。用针穿刺时，取单个菌落，穿刺至底部3-5mm处，然后在斜面上往复划线。放35度培养18-24小时。三观察结果：有三种类型A.非发酵型：无碳氢化合物发酵，所以无酸产生，斜面上琼脂的肽降解产物是碱性物质导致斜面变红。这种类型的细菌称为非发酵型。B.非乳糖发酵型: 如果接种的是发酵葡萄糖不发酵乳糖的细菌，培养基内仅有0.1%葡萄糖可以产酸。开始阶段，培养8-12h时，产生的酸足以引起斜面和底部颜色变成黄色。在接下来的时间里，葡萄糖被完全消耗，斜面部分的细菌在有氧条件下开始氧化降解氨基酸，产生的胺类很快就中和斜面上存在的酸；到18-24h，整个斜面又转换成碱性PH，颜色有变成红色。深部（厌氧区域），氨基酸降解不足以中和形成的酸，培养基仍为黄色。 C. 乳糖发酵型