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1、-范文最新推荐- 黄豆萌发过程中营养物质的动态变化研究 摘要：本文主要对黄豆在萌发过程中可溶性蛋白、可溶性糖、铁、维生素C、总黄酮的含量变化规律进行了研究。结果显示，随着发芽时间的延长，可溶性蛋白、可溶性糖、维生素C、总黄酮4种营养成分含量均有不同程度的改变。在发芽72 h的过程中，可溶性蛋白含量的变化是先降低后升高，可溶性糖和总黄酮含量的变化趋势是降低的，维生素C含量有明显的增加，铁含量基本上无变化。本文确定了发芽黄豆的营养成分变化，这有利于人们认清发芽黄豆的营养价值和特性。关键词：黄豆；萌发；营养物质The Dynamic Nutrient Change of Soybean in the
2、 Germination ProcessAbstract: The purpose of this study was to study the changes of soluble protein, soluble sugar, iron, vitamin C and total flavonoids during the period of soybean germination. The results showed that the contents of soluble protein, soluble sugar, vitamin C and total flavonoids ch
3、anged during the germination. During 72 h of the germination, the soluble protein content first decreased, then increased. However, the soluble sugar and total flavonoids contends decreased. Besides above phenomenon, the vitamin C content increased significantly. The iron content almost unchanged du
4、ring the germination. These findinges were helpful for people to realize the value and features of the germinated soybean.Key words: Soybean; Germination; Nutrient目录摘要1引言21.实验部分21.1 实验所用仪器及试剂21.2 发芽大豆的实验室制备31.3 样品液中可溶性蛋白质含量测定31.4 样品液中可溶性糖含量测定51.5 样品液中铁含量测定61.6 样品液中维生素C含量测定81.7 样品液中总黄酮含量测定9 1.实验部分1.1
5、 实验所用仪器及试剂材料：大豆（巨丰1号）。试剂及药品：氯化汞、氯化钠、牛血清白蛋白、考马斯亮蓝G250、无水乙醇、磷酸、蒽酮、浓硫酸、葡萄糖、碘、碘化钾、抗坏血酸、草酸、邻菲啰啉、柠檬酸三钠、盐酸羟胺、浓盐酸、氨水、醋酸钠、冰醋酸、硫酸亚铁铵、芦丁、亚硝酸钠、硝酸铝、氢氧化钠等均为分析纯。实验仪器：UV-5100型紫外可见分光光度计（上海棱光技术有限公司）；AL204型电子天平（梅特勒-托利多仪器有限公司）；SAB-型循环水式真空泵（郑州欧卡仪器设备有限公司）；HWS24型电热恒温水浴锅（上海-恒科学仪器有限公司）；电热恒温鼓风干燥箱（上海-恒科学仪器有限公司）；双铁皮电炉（上海达富有限公司
6、）；PHS-25型PH计（上海精密科学仪器有限公司）；LRHS-150B恒温恒湿培养箱（常州诺基仪器有限公司）。1.2 发芽大豆的实验室制备大豆处于贮藏期，大豆自身中的酶都处于休眠状态，Kurkdjian和Guern的报道证实，本文来自六维+论文?网， 大豆浸泡处于低氧条件，可以使大豆体内休眠的酶激活3。所以，挑选成熟饱满未有破损的种子用0.1%氯化汞消毒处理3 min，而后用蒸馏水洗4次，用5倍的水浸泡过夜(W / V ) 。浸泡的种子用自来水完全冲洗一遍, 然后铺放在表面含有三层纱布的12个培养皿中，用记号笔标上发芽时间分别为12 h、24 h、36 h、48 h、60 h和72 h做两个
7、平行，每个培养皿中放50粒种子，培养皿中放自来水，使种子底部正好浸湿于水面。种子表面也用纱布盖上以避光，放在恒温28的培养箱中进行培养4。发芽时每12 h浇淋种子一次。将发芽时间到了的种子取出，数一下发芽种子的粒数，将其与种子的总粒数进行比值得出发芽率。然后，用直尺测量发芽种子的芽长，求出其平均值，即为芽长。再将发芽好了的种子称其湿重后，立即放在40 烘箱中烘干10 h后取出称其干重。将种子用粉碎机粉碎过60目筛子。将粉好后的大豆粉样品放入小烧杯中待用。由于维生素C易氧化，要用新鲜研磨的方法进行测定5-7。所以，本实验，另外培养50粒黄豆种子用于维生素C的测定。 考马斯亮蓝染液/mL4.04.
8、04.04.04.04.04.0蛋白质浓度（μg/mL）0102030406080图1 可溶性蛋白质标准曲线1.3.3 样液的测定样品液：取大豆粉1 g，用0.9%NaCl稀释至一定浓度。另取三支干净试管，分别加入样品液1 mL及考马斯亮蓝染液4 mL，混匀，室温静置3 min，于波长595 nm处比色，读取吸光度，由样品液的吸光度查标准曲线求出蛋白含量。注意：样品蛋白质含量应在10100 μg 为宜。1.4 样品液中可溶性糖含量测定实验采用蒽酮比色法，其测定原理：糖在浓硫酸作用下，脱水生成糠醛或羟甲基糠醛，它们可与蒽酮反应生成蓝绿色糠醛衍生物，在620 nm处有最大吸收。在一定范
9、围内，颜色的深浅与糖的含量成正比，可用于糖的定量测定。1.4.1 试剂配制蒽酮试剂：取2 g蒽酮溶于1000 mL 80%(V/V)的硫酸中，当日配制使用。标准葡萄糖溶液( 0.1 mg/mL) ：100 mg葡萄糖溶于蒸馏水并稀释至1000 mL。1.4.2 可溶性糖标准曲线的制备取干净试管6支，按下表进行操作表2 蒽酮比色法定糖-标准曲线的制作012345标准葡萄糖溶液/mL00.10.20.30.40.5蒸馏水/mL1.00.90.80.70.60.5 1.5.2 铁含量标准曲线的绘制量取20 μg/mL的亚铁标准溶液0 mL、2 .5 mL、5 mL、10 mL、20 mL（相当
10、于分别含0、50、100、200、400μg/ Fe2+）分别加入l00 mL烧杯中，用水稀释定容至50 mL，加入150 g/L柠檬酸三钠溶液5 mL，用3 mol/L盐酸或2.5%氨水溶液调节溶液pH为2.42.6，加入50 g/L盐酸羟胺溶液5 mL混匀，加入 1,10-邻菲罗琳溶液5 mL，加入醋酸-醋酸钠缓冲溶液l0 mL，将溶液移入到l00 mL容量瓶中，用水稀释至刻度，混匀放置60 min。用分光光度计在波长506 nm处用l cm比色皿，以水为参比溶液测定该标准系列的吸光度，以Fe2+标准溶液浓度（μg/mL）为横坐标，本文来自六维+论文?网， 以其对应吸光度作纵坐
11、标绘制工作曲线。图3 铁含量的标准曲线1.5.3 样品液中铁含量的测定样品液的制备：称取1 g大豆粉加99mL蒸馏水稀释。吸取1 mL样品液，用水稀释至100 mL，混匀，移取1 mL到100 mL的烧杯中，用水稀释至50 mL，以下操作同工作曲线的绘制，测定其吸光度。不加试样，在同样条件下进行空白实验。总铁含量按下式计算：W(Fe)=(m1-m0) *10-6/m式中：m1为从工作曲线上查得被测试液Fe的质量（μg）；m0为从工作曲线上查得试剂空白溶液中Fe的质量（μg）；m为吸取试样溶液相当于试样的质量（g）。1.6 样品液中维生素C含量测定1.6.1 试剂的配制碘-碘化钾溶液
12、：准确的称取1.269 g碘和4 g碘化钾，用蒸馏水溶解定容至100 mL，滴定的时候再稀释50倍。1.6.2 维生素C标准曲线的制作原理：维生素C的分子式是C6H8O6。维生素C有很强的还原性，可被I2定量氧化，因而可以用I2的标准液进行测定。测定时用淀粉作为指示剂，当维生素C被I2氧化完时，再滴加I2，溶液就会变蓝，此时即为滴定的终点，从而检测出样品液中维生素C的含量。 1.7.1 试剂的配制芦丁标准溶液的配制：准确称取芦丁10 mg（120°C烘至恒重），用60%的乙醇进行溶解后定容至100 mL，得到0.1 mg/mL的标准溶液备用。5% NaNO2溶液：称量12.5 gNaN
13、O2固体，溶解后定容至250 mL备用。10% Al(NO3)3：称取Al(NO3)3固体25 g，溶解后定容至250 mL备用。4% NaOH：称取NaOH固体10 g，溶解后定容至250 mL备用。空白对照组的配制：吸取5 mL 30%的乙醇置于具塞的试管中，加入5% NaNO2溶液0.3 mL，摇匀，放置6 min，再加10% Al(NO3)3溶液0.3 mL，摇匀，放置6 min，加4% NaOH溶液4 mL，用蒸馏水定容到10 mL。1.7.2 标准曲线的绘制精密吸取0.0、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0 mL的芦丁标准液分别置于具塞试管中，分别加入30%乙醇使之5 mL，然
14、后分别加入5% NaNO2溶液0.3 mL，摇匀，放置6 min，再加10% Al(NO3)3溶液0.3 mL，摇匀，放置6 min，加4% NaOH溶液4 mL，用蒸馏水定容至10 mL，放置15-20 min，在510 nm波长处测定吸光度。每个浓度做三个平行实验，取平均值作标准曲线（图5）。以吸光值对浓度进行线性回归分析，求得回归方程：y =13.25x -3.1×10-3R2 = 0.9998。图5 总黄酮的标准曲线1.7.3 样品总黄酮含量的测试方法称取2 g样品，加入60 mL70%乙醇放于100 mL锥形瓶内，置于水浴锅上，70条件下回流提取60 min。过滤、定容于
15、100 mL。取1 mL稀释样品液于具塞试管中，分别加入4 mL 30%乙醇使成5 mL，然后分别加入5% NaNO2溶液0.3 mL，摇匀，放置6 min，再加10% Al(NO3)3溶液0.3 mL，摇匀，放置6 min，加4% NaOH溶液4 mL，用蒸馏水定容至10 mL，放置15-20 min，在510 nm波长处测定吸光度。根据回归方程算出测量液中总黄酮的浓度C（mg/mL），按照以下公式计算提取物黄酮的含量（mg/g）。提取率（mg/g）CVN/W式中：C测量液总黄酮浓度（mg/mL）；V粗提液体积（mL）；N为稀释倍数；W原料干重（g）。 图6 发芽过程中大豆可溶性蛋白质含量的
16、变化2.3 大豆发芽过程中可溶性糖的变化种子萌发是一个复杂的生理生化过程，由于酶活力的提高，一方面，贮藏物质会被降解，另一方面，被降解的成分又会合成新的组分。同时，由于新组织的形成，一些化学成分还会发生转移。在萌发初期，由于种子吸水膨胀后，内源酶被激活，一些结合态的糖类与结合体分离，某些不溶性糖类内部结构发生变化进而转化为可溶性糖。随着萌发时间的延长，大分子物质在酶的作用下降解并为种子萌发提供能量，致使可溶性糖含量下降15。从图7可以看出，大豆发芽过程中可溶性糖含量逐渐降低，发芽12 h时为0.099 mg/g，72 h时降为0.067 mg/g。图7 发芽过程中大豆可溶性糖含量的变化2.4
17、大豆发芽过程中铁含量的变化大豆中铁通常以二价铁和三价铁两种化学价态存在，由图8可看出大豆在发芽过程中铁含量的变化不大，一直在2.39 mg/g左右，分析原因，可能是由于铁只是发生了价态的变化，有资料显示，大豆在发芽过程中铁会转化成人体较易吸收的二价铁存在，而且随着时间的延长，二价铁占总铁的比例呈现明显的增加。此种变化可能是由于维生素C将三价铁还原为了二价铁，发芽过程中，维生素C的含量是明显增加的，与二价铁占总铁比例的增加十分一致16，所以，发芽可能使大豆中三价铁转化成二价铁，有利于进一步提高发芽大豆中铁的生物利用率。图8 发芽过程中大豆铁含量的变化2.5 大豆发芽过程中维生素C含量的变化大豆种
18、子中维生素C的含量很低，但在发芽过程中出现明显增加，表明大豆发芽过程中开始了维生素C的合成代谢，但目前对大豆发芽过程中维生素C的合成积累机制尚不清楚，但有实验结果表明，在未发芽的大豆中未检测出维生素C和GLDH活性，而在发芽的大豆中检测出维生素C和GLDH（半乳糖酸内酯脱氢酶）活性， 随着发芽时间的延长，GLDH活性不断升高，维生素C含量也随之不断增加，表明大豆在发芽过程中开始了维生素C的合成代谢，而且GLDH与发芽大豆中维生素C的合成代谢有关，暗示发芽大豆具有同马铃薯、向日葵等植物类似的维生素C合成途径-大豆中的Vc含量明显增加17，在发芽12 h时为0.0675 mg/g，在72 h时已经上升到0.2132 mg/g，营养价值大大提高， 黄豆萌发过程中营养物质的动态变化研究(7): 15 / 16