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1、 槐米中芦丁的提取、提纯和鉴定一、实验目的1掌握芦丁提取和提纯的基本原理和方法。2掌握重结晶及过滤等基本操作。3学习芦丁及槲（h）皮素的鉴定方法。 二、实验原理芦丁（Rutin）亦称芸香苷，广泛存在于植物组织中，其中以槐花米和荞麦叶含量较高，槐米中含量高达1216，是提取芦丁的最佳原料。芦丁有减少毛细血管通透性的作用，临床上用作毛细血管止血药和高血压病的辅助治疗药物。近年来，芦丁及槲皮素作为抗癌药物的研究，取得了大量成果。芦丁属黄酮苷，其结构如下： 芦丁为淡黄色针状结晶，含有三分子结晶水（C27H36O16 3 H2O）， 熔点为177178 ，无水物熔点为190192 ，难溶于冷水，微溶于冷
2、乙醇，可溶于热水和热乙醇中。此外，还难溶于乙酸乙酯、丙酮，不溶于苯、氯仿、乙醚及石油醚等溶剂。易溶于碱性溶液中呈黄色，酸化后又析出。本实验利用芦丁在冷热水和冷热乙醇中溶解度的差异进行提取与精制。芦丁在不同溶剂中的溶液度：水CH3OHCH3CH2OH吡啶冷0.0013l.00.368.5热0.5511.23.5易溶芦丁的紫外吸收波长（CH3OH溶液）：max = 259mm，266nm sh，299nm sh，359nm。槲皮素（Quercetin）是芦丁水解得到的黄酮苷元，是芦丁药用功能的主要部分，大多数黄酮类物质都具有较高的药用价值。槲皮素为黄色结晶，含两分子结晶水（C15H10O72 H2
3、O），熔点313314 ，无水物熔点为316 。可溶于甲醇、乙酸、吡啶、丙酮、乙酸乙酯等溶剂，不溶于水、乙醚、苯、氯仿、石油醚。在沸腾的无水乙醇中溶解度为4.4 ，在室温下乙醇中的溶解度为0.35 。可利用槲皮素在冷热乙醇中的溶解度差进行提纯。槲皮素的结构式如下：槲皮素的紫外吸收波长（CH3OH溶液）：max = 259nm，266nm，299nm ，359nm。三、实验步骤 （一）芦丁的提取 取15 g槐米研成粉状，置烧杯中，加水300 mL，煮沸30分钟（注意适量加水，补充蒸发损失），趁热过滤，滤渣再提取两次（每次用水250 mL，煮沸15分钟），过滤，合并滤液，放置24小时，使沉淀完全析
4、出。过滤，粗产物用少量水洗涤，得芦丁粗品，烘干，称重，计算提取率。 （二）芦丁的精制 将芦丁粗品研细，倒入圆底烧瓶中，加入100 mL 95 乙醇，加热回流至芦丁完全溶解，再加少量活性炭回流10分钟，然后趁热过滤于另一圆底烧瓶中，得黄色澄清溶液。蒸馏滤液并回收乙醇，待溶液剩1015 mL时停止加热，将浓缩液倒入小烧杯中，用少量乙醇洗涤烧瓶，将洗涤液合并于小烧杯中，放置使结晶完全析出。过滤（滤液回收），得芦丁精品，烘干，称重，计算产率，测其熔点。（三）芦丁水解制取槲皮素取芦丁精品1.0 g 于烧杯中，研细，加30乙醇水溶液150 mL，再加浓盐酸4 mL，加热煮沸30分钟（注意观察）。放置冷却，
5、过滤，水洗至滤液呈中性，烘干，称重，计算产率。测其熔点（如质量不合格，可用75乙醇重结晶），计算产率。（四）性质试验 取芦丁及槲皮素精品少许，用95乙醇溶解，作为样品溶液，进行下列试验，并比较两者试验结果的差异。1Molish反应取两试样各l mL，各加入10萘酚溶液10滴，充分摇匀，将试管倾斜，沿管壁慢慢加入1 mL浓硫酸，勿摇，观察溶液界面的颜色变化。 2盐酸锌粉（镁粉）反应 取两试样各10滴，分别加锌粉少许，滴加浓盐酸，观察颜色变化（在白瓷板上进行）。3FeCl3反应取两试样各10滴，分别加入1FeCl3 溶液12滴，观察颜色变化（在白瓷板上）。4A1C13反应取两试样各10滴，分别加入
6、1AlCl3 乙醇溶液12滴，观察颜色变化并检查荧光反应（在白瓷板上）。 （五）芦丁及槲皮素的紫外光谱测定取精制样品10 mg，溶于10 mL光谱纯甲醇中，进行紫外光谱分析，扫描波长为200400 nm，将扫描所得谱图及最大吸收峰数据与标准数据对照。（六）芦丁及槲皮素的红外光谱测定取精制样品约l mg，用KBr压片法进行红外光谱分析，将所得谱图与标准谱图对照，并解释光谱图中的主要特征峰。（七）芦丁及槲皮素的液相色谱测定HPLC法测定芦丁的含量时，常用的流动相系统为甲醇冰醋酸溶液，比例一般为： 美国WATERS 600E 系统；流动相为甲醇水冰乙酸（40：57.5：2.5）；色谱柱为Bondapak C18柱（10m ，3.90mm300mm）；柱温为室温；检测波长为254nm。Waters高效液相色谱；流动相为甲醇水冰乙酸（45：53：2）；色谱柱为luna 5 C18柱；检测波长为355nm；柱温为30。五、思考题1重结晶的主要步骤是什么？每步的目的是什么？操作中应注意哪些问题？2如何确定重结晶溶剂的用量？3写出实验（一）、（二）、（三）中所需仪器的名称和规格。4本实验中，重结晶所用仪器是否需要干燥？为什么？5如何选择产品和仪器的干燥方法？6芦丁水解时，盐酸的作用是什么？乙醇的作用是什么？ 7为什么芦丁提取时用水作溶剂，而重结晶时用乙醇作溶剂？ 8述固液萃取的影响因素。