无蛋白血滤液的制备.docx

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1、 料推荐实验一无蛋白血滤液的制备(无蛋白血滤液制备的基本原理是以蛋白质沉淀剂沉淀蛋白, 用过滤法或离心法除去沉淀的蛋白。 常用的方法有三氯醋酸法、 氢氧化锌法、 黑灯改良法及福林-吴宪法(钨酸法),本实验采用最后一种方法,即钨酸法制备无蛋白滤液。实验原理:钨酸钠与硫酸混合,生成钨酸。血液中的蛋白质在 pH 小于其等电点的溶液中时,可被钨酸沉淀。沉淀液过滤或离心,上清液即为无色、透明、 pH 约为 6 的无蛋白血滤液。可供非蛋白氮、血糖、氨基酸、尿素、尿酸及氯化物等项目测定使用。实验试剂: 10%钨酸钠溶液, 1/3 mol/L 硫酸溶液实验对象:新鲜鸡血操作步骤:1 取 50ml 锥形瓶或大试

2、管1 支,吸取充分混匀的抗凝血1 份( 1ml),擦净管外血液,缓慢放入锥形瓶或试管底部2 准确用 10ml 移液管加入 7ml 蒸馏水,随加随摇,但也不能过于剧烈3 再加入 1ml 硫酸溶液,随加随摇4 放置约 5min 后,若振摇亦不再发生泡沫, 说明蛋白质已完全变性沉淀,用滤纸过滤后即得完全无色的无蛋白血滤液实验过程(附图):1 料推荐1.取样这是未加入蒸馏水的抗凝血,可观察到血色鲜艳明亮,没有凝血块或杂质2.加清水混匀蒸馏水随加随摇于血液中后可以观察到无任何变化,只是血液颜色稍稍变浅,血液粘稠度有所下降2 料推荐3.加入硫酸溶液加入硫酸溶液并混匀后,可以观察到血液颜色变得暗淡,但并没有出现凝聚等反应现象,这一步主要是为钨酸(钠)与血液中的蛋白反应提供酸性环境。3 料推荐4.加入钨酸钠溶液加入钨酸钠溶液并且混匀后, 可观察到血液颜色变为棕褐色, 且变得浑浊有气泡; 容器壁上有痕渍,这是因为血液中的蛋白与钨酸作用而发生沉淀的结果5.过滤收集清液滤过后可看到离心管中的血清液无色澄澈,故实验操作成功4 料推荐附录:以上实验过程(图片)是第二次操作的结果,第一次操作时因为加入试剂时过快,没有做到随加随摇,故有很多气泡,效果不是很理想,遂又操作了一次。现附上第一次操作的图片以作对比。2014.10.17 (兴农楼208)5

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