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1、cobas 8000-c 702 工作原理, DEC, 2014,1.光学检测原理 2. ISE检测原理,光路图,光学原理,当光通过溶液时，溶液中不同物质会吸收不同波长的光，吸收的越多，透过的越少。溶液中物质的浓度与吸收光的强弱（吸光度）呈一定的数学关系。,朗勃-比尔定律(Lambert- Beers Law),The Lambert-Beer law 就是溶液中物质的浓度与吸光度呈线性关系,A = * c * l c:溶液中测量物质的浓度 :摩尔吸光系数 l: 光径 由于 and l 都是常量，所以能够得到 Abs conc,Lambert- Beers Law（朗勃-比尔定律） 如果不知道
2、，就需要计算测量物质的定标曲线。然后跟据未知浓度的物质的测量吸光度值，结合定标曲线计算该物质的浓度，如下图。,Cobas c 702 定标概念,Lot calibrationReagent lot specificCalibration of a cassette, which is 24 h on board. Newest calibration Calibration to be transferred Calibration (newest、 Lot. Calibration) is transferred to cassette, which does not have any ca
3、libration data.,Cobas c 702 定标类型,定标品S1小数点位数与计算K值得关系,如果修改了定标品1的小数点位数，该注意什么？,Cell Blank Measurements1.Stored Cell Blank ：周保养杯空白数据，做为比色杯本底保存在系统内，每执行一次Cell Blank measurement ,杯空白数据自动更新。2.Passing Cell Blank ：每个比色杯用于分析测量之前进行的杯空白测量，该杯空白数据与Stored Cell Blank 比较不超过0.1ABS 为合格。1）某个比色杯连续两次Passing Cell Blank 与Sto
4、red Cell Blank 超过0.1ABS，仪器报“Abnormal cell blank (twice) ”,仪器自动启用该比色杯。2）连续10个比色杯连续两次Passing Cell Blank 与Stored Cell Blank 超过0.1ABS，仪器报“Abnormal cell blank (ten times) ”,仪器自动停下来，不能进行样本检测。 （ 哪些情况会报10X？）,光度计检查（Photometer Check）：包含在日保养维护组合里，是指第一个比色杯在12个波长的空白吸光度值。（解读）,C 702 反应顺序,Cobas c 702 10分钟反应时间共测38个点
5、， 测光间隔为16.2秒。,两点终点法,R3,一点终点法,两点速率法,速率A法,1.光学检测原理 2. ISE检测原理,Modular ISE 检测所需要的电极,1、ISE电极Ref电极 内部充满 KCL凝胶，外部的 KCL参比液流经电极内部，管路有微孔与凝胶相通，然后与样本流混合，提供稳定的参比信号 Ref电极在机稳定性：至少6个月 2、ISE电极 Na电极 玻璃膜电极 3、ISE电极 K电极 PVC膜电极 4、ISE电极 Cl电极 PVC膜电极 K、Na、Cl在机稳定性：3个月或9000个测试,Ref. 参比电极,- 每个电极所测得的信号都是相对于参比电极而言的 - 每个离子电极都与参比电
6、极形成回路 - 电动势 (EMF): 是指参比电极和离子电极之间的电压,- 参比电极提供一个稳定的测定信号 - 参比电极液使用的是1mol 的KCl 溶液,1. 分注550l 的内标液 (IS) 进行冲洗 2. 冲洗完后，真空吸干内标液 3. 注射器抽取 65l KCl参比电极液通过参比电极形成盐桥 4. 分注500l 的 IS 进入TOWER用于1点定标 5. 其中300l 的IS被吸取通过电极进行1点定标 6. 真空吸干内标液TOWER 内剩余的内标液 7. 15l 的标本被吸入TOWER内 8. 450l 的稀释液被吸入对标本进行稀释及混匀 9. 注射器再抽取 65l KCl参比电极液通
7、过参比电极形成盐桥盐 10. 350l 被稀释好的样本被吸收通过电极进行检测 11. 真空吸走剩余的样本到废液系统,PreparationInternal StandardSample,ISE检测过程,由此可知，每个标本消耗样15ul 、DIL 450ul、REF130UL、IS 550ul（连续测量）/1100L（单次测量）,ISE 定标,在rack reception模式每10分钟执行一次or 检测标本时。,每24h执行一次,一点定标,全点定标,补偿内部系统的变化 Fullpoint calibration: - 电极老化(slop) - 当前系统条件或试剂的偏差(offset) - 系统
8、污染导致的电极响应速率和携带污染 1point calibration: - 在样本测量之间的IS测量 考虑基于系统的漂移(如: 温度变化，电极膜的改变),ISE Standard 1 (Low)aqueous ISE Standard 2 (High) aqueous ISE Standard 3 (Compensator)protein based ISE Standard 3 (High),Calibrators,S1-Low and S2-High are measured for Na, K and Cl,2 point calibration,Internal standard s
9、olution 每次检测之前 补偿电极相应的偏移和改变,ISE 的电动势测量,S1、S2、S3分别测量三次，每次测量取5个点的电动势，在这5个点的值中 会去掉一个最高和一个最低值，取剩下的三个点的平均值作为结果。 如果在这三个值中最大偏差超过以下范围： Na 0,7 mV K 1,0 mV CI 0,8 mV 仪器将产生一个 NOISE的报警。,3 7,80 - 120,120 - 160,Log Transformation ,Signal to concentration relationship,Log of concentration,ISE 定标 定标基本信息,ISE 定标 斜率计算
10、,由以上公式可知，在ISE硬件无故障的情况下，斜率是由S1和S2定标品EMF和浓度决定。,内标的计算,1点定标 内部定标在每次定标和做每个标本前进行 . 飘移得到纠正- 电导线的连接电势变化、 膜、试剂，系统温度,Example Na,IS EMF = -33.6 mV Reading from the curve gives a Internal Std concentration of 141,Internal Standard,ISE Calibration curve,ISE 3. Internal standard calculation,内标液浓度由斜率决定 IS的EMFs 必须在
11、S1和 S2的EMF均值附近 由于IS浓度须用于每次病人结果计算， 所以更换内标液后应该重新定标,补偿值的计算,现有补偿液用完后，将使用S2替代作为S3。 补偿值（C. value）在每次结果计算时自动对结果进行纠正,S1 K+ : -45.4,S2 K+ : -26.1,S3的浓度是由斜率（Slope）t S3 的EMF IS的浓度及电动势 所共同决定的.,ISE 定标补偿值的计算,ISE 3. Compensation Value Calculation,TEST IS.EMF S1 EMF S2 EMF S3 EMF SLOPE IS.CONC. S3 CONC. C.VALUE Na
12、-33.6 -37.3 -30.6 -34.1 53.6 141 138 -2 K -33.3 -45.4 -26.1 -36.8 52.4 5.1 4.37 -0.12 Cl 131.8 134.4 127.1 131.4 -41.5 92 94 7,ISE 3. Compensation Value Calculation,定标监测报告中的补偿值是给定的靶值减去测定的浓度值所得 每一个标本检测的结果都将加上相应的补偿值，得到最后的标本结果,CIS : 内标液浓度 EMFSampl 样本中特定离子的电压差 EMFIS 内标液中特定离子的电压差,ISE check,ISE CHECK 是只检测
13、IS液流经ISE检测单元时，各电极的电动，势，不用DIL，如右图。 执行ISE Check 了解ISE的管路状况,总结,Thank you for your attention,Roche Diagnostics (Shanghai) Limited Shanghai 200031 China,This presentation is our intellectual property. Without our written consent, it shall neither be copied in any manner, nor used for manufacturing, nor communicated to third parties.,COBAS and LIFE NEEDS ANSWERS are trademarks of Roche,