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1、无菌和无菌操作技术,无菌：没有活的微生物存在的状态。 无菌操作技术：用于防止微生物进入无菌范围造成污染的操作技术。,一、无菌的环境 二、无菌的器具、培养基 三、无菌操作技术 四、基本规则,一、无菌的环境,1、无菌室 2、超净工作台 3、生物安全柜 4、火焰周围,1、无菌室,标准无菌室的要求： 房间设置（外面有缓冲室）、空气过滤、墙面、墙角、微生物操作相关设备、紫外灯等。,无菌室布局,如条件有限，可在微生物实验室内专辟一个小房间作为无菌室。可以用板材和玻璃建造，面积4-5 平方米即可。,板材和玻璃隔出的无菌室,2、超净工作台,超净工作台是一种提供局部无尘无菌工作环境的垂直单向流型空气净化设备。,
2、超净工作台,3、生物安全柜,生物安全柜外形与超净台类似，也提供局部无尘无菌工作环境。但它设置了风槽，气流不会吹向使用者，可以有效保护使用者。,生物安全柜,4、火焰周围,通常使用酒精灯、煤气灯，其火焰周围是无菌区域（直径10cm左右）。 这并不是利用高温杀死细菌，而是利用向上的单向气流形成一个无菌区域。,火焰周围是无菌区域,二、无菌的器具、培养基,1、玻璃、金属等器具 干热灭菌法 2、玻璃、金属、含水物品 高压蒸汽灭菌法 3、金属、玻璃器具 火焰灭菌法 4、液体或水溶性物质 过滤除菌法,1、玻璃、金属等器具-干热灭菌法,设备：电烘箱 用途：用于玻璃器皿、金属器具等耐热物品的烤干和灭菌。 条件：1
3、60-165，灭菌 1-2小时。,2、玻璃、金属、含水物品等-高压蒸汽灭菌法,设备：高压蒸汽灭菌锅 用途：培养基、生理盐水、废弃物、采样器、纱布、衣物的灭菌。 条件：121 水蒸气 15分钟,培养基一般使用高压蒸汽灭菌法,3、一些金属、玻璃器具-火焰灭菌法,即在火焰外焰上灼烧进行灭菌。 用途：接种环、接种针；涂布器；试管管口、锥形瓶瓶口等的灭菌。,4、液体或水溶性物质-过滤除菌法,器具：细菌过滤器 用途：不耐高温的液体、水溶性物质的除菌。,细菌过滤器,三、无菌操作技术,我们通过一定的技术来保证目的微生物、培养基不被环境微生物污染，这些技术就是无菌操作技术。 包括手部清洁消毒，用接种针、接种环、
4、吸量管、涂布棒等工具进行各种操作等等。,1、手部清洁消毒,洗手：手部有可见灰尘时、饭前、便后，用水和肥皂洗手； Handrub（揉手）：手部较清洁时，75%乙醇或者醇基消毒剂揉手。,动作：手掌-手背-指缝-手指-拇指-指尖-手腕,2、培养皿操作,培养皿开合：单手打开和盖上皿盖， 包括持皿法和皿加法两种。 此操作用于制作培养基平板、接种等。,持皿法,皿加法,3、接种环操作,包括灼烧接种环、接种、划线等。,灼烧接种环 先斜放外焰灼烧接种环，然后垂直放置后继续灼烧，再斜烧金属杆。 现在红外接种环灭菌器使用也比较广泛。,红外接种环灭菌器,用接种环进行接种,用接种环进行划线,4、涂布棒操作,灼烧灭菌： 可以沾酒精然后灼烧，灼烧范围要包括其杆部。,涂布： 将菌液滴在培养基表面中央。右手拿涂布棒将菌液沿一条直线来回推动，然后沿一垂直线来回推动，平板边缘处可改变方向再涂几次。,涂布,5、试管操作,单试管操作 （注意左右手的使用）,双试管操作,四、基本规则,不得留长指甲，头发需扎好； 无菌操作中不要大声笑、说话、打喷嚏、打闹。,手不要在无菌物上方越过； 要了解拿无菌物的位置，不触碰其之外的位置； 不要将无菌物移出无菌范围。,