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1、资料内容仅供您学习参考，如有不当或者侵权，请联系改正或者删除。1、 生物技术 : 又称生物工程。人们以现代生命科学为基础 , 结合其它基础学科的科学原理。采用先进的工程技术手段 , 按照预先设计改造生物体或加工生物原料, 为人类生产出所需产品或打到某种目的。2、 食品生物技术 :经过生物手段 ,用生物程序生产细胞或其代谢物质来制造食品改进传统生产过程 ,提高人类生活质量的科学技术。3、 食品生物技术的应用 :1. 利用基因工程、 细胞工程技术对食品资料改造与改食2. 利用发酵技术 , 酶工程技术将农副产品原料加工成商品。3. 利用生物技术进行产品的二次开发 , 新成新产品。4、 利用酶工艺、
2、发酵技术、 生物反应器等对传统食品加工工艺进行改造降低能耗 , 提高产率 , 改进食品品质。4、基因 :遗传因子 ,携带遗传信息的DNA序列 ,其产物为各种 RNA或蛋白质 ,是控制性状的基本遗传物质。5、 基因工程 :将一种供体生物体的目的基因与事宜的载体在体外进行拼接重组,然后转入另一种受体生物体内 , 使之按照人们意思稳定遗传并表示出新的基因产物或产生新的遗传性状的 DNA体外操作程序。6、 基因工程实施要有四个必要的条件:工具酶、供体基因、载体、 受体细胞7、 限制性核酸内切酶 : 是识别 DNA的特异序列 , 并在识别位点或其周围切割双链 DNA的一类内切酶 。8、DNA聚合酶 :
3、在引物和模板的存在下 , 脱氧核糖核酸连续地加到双链 DNA分子引物链的 3-oh 末端 , 催化核苷酸的聚合作用 , 合成方向对于被合成链而言是 5 到 3, 而且合成产物与模板互补。9、 基因工程载体 :基因中携带外源基因进入受体细胞的运载工具。本质是 DNA资料内容仅供您学习参考，如有不当或者侵权，请联系改正或者删除。必要条件 : 能在宿主细胞内进行独立和稳定自我复制。具有合适限制性核酸内切酶位点。具有合适选择标记基因10、 质粒载体 : 以细菌质粒的各种元件为基础组建而成 , 包括三个共同组成部分 ( 复制必须区、 选择标记基因和限制性核酸内切酶的酶切位点 )11、 质粒生物学特性 :
4、独立于细菌染色体外的双链闭合环状DNA分子 。质粒复制和拷贝数 : 严紧型与松弛型 。 质粒转移性 : 质粒从一个细胞转移到另一个细胞中的特殊性 。质粒的不亲和性 : 两种不同质粒不能再同一宿主细胞中稳定共存。12、 质粒载体的必备条件 :具有较小分子质量和较高拷贝数。具有若干限制性核酸内切酶的单一酶切位点。具有两种以上选择标记基因。具有复制起始点天然质粒 :没有经过以基因克隆为目标的体外修饰改造13、 目的基因的获取方法 :( 对已知序列基因获取 ) 化学合成法、 从基因文库中钓取目的基因、 应用 mRNA 逆转录合成 cDNA、 PCR扩增法等。( 对未知序列基因的分离 ) 染色体步移法、
5、 杂交捕捉和示范法、 限制性标记 cDNA 扫描、 序列分析法14、 基因文库 :又称 DNA文库。指细菌中增值来自某一生物的染色体DNA或 cDNA片段的全部 DNA片段克隆的集合体。15、 基因文库构建的基本步骤:细胞染色体大分子DNA的提取和大片段DNA制备载体 DNA制备载体与外源大片段DNA的连接体外包装及基因组DNA文库扩增重组 DNA筛选和鉴定资料内容仅供您学习参考，如有不当或者侵权，请联系改正或者删除。16、cDNA 文库 :某种生物基因组转录的全部mRNA经反转录产生的各种cDNA片段分别与克隆载体重组 ,贮存在一种受体菌克隆子群体之中。cDNA文库构建的基本步骤 : mRN
6、A的提取和分离。第一链 cDNA合成。第二链 cDNA合成 ( 自身引导法、 引导合成法、 置换合成法 ) 。双链 cDNA 克隆进质粒或噬菌体并导入宿主细胞中繁殖。17、 重组 DNA: 将目的基因用DNA分子连接酶在体外连接到适当载体上,即 DNA分子的体外重组。18、 受体细胞 :能摄取外源 DNA并使其稳定维持的细胞。必备条件 ( 特性 ) : 1、 便于重组 DNA分子的导入和筛选克隆子 2、 重组DNA分子在受体细胞被能稳定维持 3、 适于外源基因高效表示 4、 遗传性稳定 5、易于扩大培养或发酵生长 6、 安全性高19、 目的基因导入受体细胞的方法:转化、 转染、感染20、 土壤
7、根癌农杆菌 :一种革兰氏阴性细菌 ,能侵染大多数双子叶植物和少数单子叶植物。 Ti 质粒 :毒性区、 T-DNA 区、 结合转移区、复制起始区21、 Ti质粒的作用和改造 :优点 :T-DNA能自发整合到植物染色体DNA上 ,诱导植物形成肿瘤 , opine合成酶基因具有一个强启动子 ,能启动外源基因高效表示。缺点 :分子质量过大 ,限制酶位点多 ;含有许多编码基因 ;没有复制起始点和筛选标记基因 ;存在一些对于 T-DNA转移不起任何作用的基因。改造原则 : 保留 T-DNA的转移功能 ; 取消 T-DNA致癌性 ; 经过简并手段可使外源DNA插入 T-DNA, 并随着 T-DNA并随着 T
8、-DNA整合到植物染色体上。当前运用最广、 最有效的植物基因工程载体是 pGV3850资料内容仅供您学习参考，如有不当或者侵权，请联系改正或者删除。22、 DNA重组子的筛选与鉴定 : (看不清。随后补上 )重组子大小的鉴定 ( 质粒 DNA 的快速提取鉴DNA定 )鉴定重组子酶切图谱鉴定 ( 限制性核酸内切酶切片重段大小鉴定 )组DNA 序列分析子直接筛选同源性分析鉴定 ( 原位杂交 )的质粒载体的筛载体噬菌体包装容器的选筛选间接筛选翻译产物转录方法其它方法23、 探针 :带有特殊标记的核酸片段,能够与待测的核酸片段互补结合,可用于检测核酸样品中存在的特定基因。24、 菌落印迹原位杂交的步骤
9、:1. 将被筛选的菌落转移到硝酸纤维素滤膜上 , 同时保藏原来的菌落平板作为参照;2. 菌落的裂解及 DNA结合于硝酸纤维素滤膜3. 膜上的 DNA烤干固定后加入探针 , 同滤膜上的菌落所释放的变性 DNA杂交 ;4. 用放射自显影技术进行检测5. 含有与探针互补序列的菌落 DNA, 就会在 x 光胶片上出现曝光点。25、 Southern印迹杂交的步骤1. 提取重组体总 DNA2. 利用限制性酶切后进行琼脂糖凝胶电泳3. 在碱性溶液中使 DNA变性4. 经毛细管虹吸作用被原位转移到硝酸纤维性膜或尼龙膜上5. 将膜上的 DNA烤干固定后加入杂交液和标记探针进行杂交 , 洗去多余探针6. 在 X
10、 光片上反射自显影资料内容仅供您学习参考，如有不当或者侵权，请联系改正或者删除。Nouthern印迹杂交的步骤1.提取重组体总 RNA或 mRNA2.在强变性剂存在情况下进行琼脂糖凝胶电泳3.将电泳分离的 RNA原位吸印到经化学处理过的纸或硝酸纤维素膜上4.用同位素标记的探针进行杂交5.在 X 光片上放射自显影Western 印迹杂交的步骤1.提取重组体蛋白 ,2.用 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳分离蛋白质,3.将蛋白质从聚丙烯酰胺凝胶上原位转移到硝酸纤维素膜上4.进行抗体与抗原结合反应26、 反义 RNA: 有义 DNA链转录而成 ,与特异的靶 RNA互补结合并能抑制靶RNA表示的一段序列反义
11、基因 :转录产生反义 RNA的基因反义 RNA技术 : 把一段 DNA序列以反义方向插入到合适启动子和终止子之间 , 然后把此基因构建体转化到受体细胞中 , 经过选择培养获得转化生物体的技术。27、 反义基因的表示载体构建方法:1.分离得到 mRNA,并以其为模板合成反义DNA2.以此反义链为模板合成有义DNA链3.以细菌质粒为载体 ,用限制性酶切靠近启动子,产生切口4.将有义 DNA插入表示载体的切口中,若插入的表示载体酶切后以相反方向插入载体 DNA环中 ,即表示载体转录形成反义RNA28、 电泳 :带电的颗粒或生物分子在外加电场作用下,向带相反电荷的电极做定向移动的现象。泳动度 :带电颗
12、粒在单位电场强度下泳的速度资料内容仅供您学习参考，如有不当或者侵权，请联系改正或者删除。29、 聚合酶链式反应技术 : (掌握 ) PCR定义 :又称基因扩增技术。在DNA聚合酶催化下 ,以 DNA为模板 ,特定引物为延伸起点 ,经过变性、退火、延伸等步骤 ,在体外复制 DNA的过程PCR技术原理 :原理类似 DNA天然复制过程。一种在模板 DNA引物和四种脱氧核糖核苷酸存在的条件下利用DNA聚合酶的酶促反应经过三个温度依赖性步骤完成的重复循环反应。PCR步骤 :高温变性、低温退火、适温延伸PCR操作程序 :反应体系、反应参数、起始模板五大要素 :引物、 DNA聚合酶、四种 dNTP、 Mg2
13、+、 模板反应条件 :变性的时间和温度、引物的退火、延伸时间和温度 ,平台效应30、 细胞工程 : 应用生命工程理论 , 借助基因工程的远离与技术 , 有目的的利用或改造生物遗传特性 , 以获得特定细胞、 组织产品或新型物种的一门综合性科学技术细胞全能性 :在适宜条件下 ,细胞具有潜在的发育成完整植株或个体的能力32、 微生物细胞培养方法 : (照片 1229)固体培养、液体培养 (连续培养、中间补料培养、同步培养、混合培养 )按成分不同 :天然培养基 (牛肉膏蛋白胨培养基、麦芽汁培养基 )合成培养基 ( 高氏 I 号培养基、查氏培养基 )资料内容仅供您学习参考，如有不当或者侵权，请联系改正或
14、者删除。按物理状态 :固体、 半固体、液体按用途 :基础培养基、加富培养基、鉴别培养基、选择培养基33、 植物细胞的培养 :34、 植物次生代谢产物 : 植物中一大类并非植物生长发育锁必须的小分子有机化合物 , 其生产和分布一般有种属、 器官组织和生长发育的特异性35、 植物细胞悬浮培养方法 : 分批培养、半连续培养、连续培养36、 成功的悬浮细胞培养体系必须满足的条件 : 悬浮培养物分散性良好、 细胞团较小 ; 大小均一良好 , 细胞形状和细胞团大小大致相同 ; 生长迅速。37、 建立良好的悬浮培养细胞系的关键技术: (注意事项 )1.选择合适的外植体2.诱导疏松易碎的愈伤组织3.选择合适的
15、培养基4.培养液的灭菌5.悬浮培养6.悬浮培养细胞的继代与选择38、 植物细胞固定化培养 : 是指把细胞固定在一种惰性基质上面或里面 , 细胞不能运动而营养液能够在细胞间流动 , 供应其培养的洗白培养技术 ( 包埋式固定化培养系统、 附着式固定化培养系统 )39、 细胞融合 :又称细胞杂交。在外力作用下,使两种或两种以上易源细胞或原生质体相互接触 ,不经过有性过程而发生的膜融合,胞质融合和核融合并形成一个杂核细胞的现象方法 :生物学方法 (以病毒为诱导融合剂 ,如仙台病毒 )化学融合剂法、电融合法( 采用高频电脉冲 )融合方法的选择 :诱导动物细胞融合 :仙台病毒 ;植物细胞融合 : PEG、 电