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1、 考点考点1 1 微生物的应用微生物的应用1.方法：方法：平板划线法平板划线法和和稀释涂布平板法稀释涂布平板法2.原理：在培养基上将原理：在培养基上将细菌稀释细菌稀释(稀释涂布平板法稀释涂布平板法)或或分散分散(平板划线法平板划线法)成单个成单个 细胞细胞，使其成长成单个菌落，这个菌落就是一个纯化的细菌菌落。，使其成长成单个菌落，这个菌落就是一个纯化的细菌菌落。【稀释涂布平板法中培养皿中菌落的数目就代表稀释相应倍数后的菌稀释涂布平板法中培养皿中菌落的数目就代表稀释相应倍数后的菌 体个体数，所以稀释涂布平板法可以用来计数，但平板划线法不行体个体数，所以稀释涂布平板法可以用来计数，但平板划线法不行
2、】3.注意事项：灼烧接种环后要冷却注意事项：灼烧接种环后要冷却;接着上次划线的末端划线接着上次划线的末端划线;不要将最后一区的划线与第一区相连不要将最后一区的划线与第一区相连;涂布平板时，涂布器应用涂布平板时，涂布器应用70%的酒精消毒。的酒精消毒。4.平板划线法中平板划线法中每次灼烧接种环的目的每次灼烧接种环的目的：第一次灼烧：避免接种环上可能存在的微生物污染培养基第一次灼烧：避免接种环上可能存在的微生物污染培养基每次划线前灼烧：杀死上次划线结束后接种环上残留的菌种，使每次划线的每次划线前灼烧：杀死上次划线结束后接种环上残留的菌种，使每次划线的 菌种均来自菌种均来自上次划线的末端上次划线的末
3、端。划线结束灼烧：划线结束灼烧：杀死接种环上残留的菌种，避免细菌污染环境和感染操作者杀死接种环上残留的菌种，避免细菌污染环境和感染操作者。微生物的分离平板划线操作平板划线操作 【问题1】在作第二次以及其后的划线操作时，为什么总是从上一次划线的末端 开始划线？答：划线后，线条末端细菌的数目比线条起始处要少，每次从上一次划线的末 端开始，能使细菌的数目随着划线次数的增加而逐步减少，最终能得到由 单个细菌繁殖而来的菌落。【问题2】平板冷凝后，为什么要将平板倒置？答：平板冷凝后，皿盖上会凝结水珠，凝固后的培养基表面的湿度也比较高，将平板倒置，既可以使培养基表面的水分更好地挥发，又可以防止皿盖 上的水珠
4、落入培养基，造成污染。1、关于病毒增殖的叙述中，正确的是（）A病毒侵入宿主细胞后，合成一种蛋白质 B病毒的繁殖只在宿主的活细胞中进行C病毒的繁殖以核衣壳为单位 D在普通的培养基上能培养病毒【解析】解答此题需从以下几方面入手分析：首先，病毒是营寄生方式生活，必须生活在活的细胞内，不能独立生活，所以在普通的培养基上不能生活。第二，繁殖时，病毒的核酸进入宿主细胞，利用宿生的成分合成子代个体，除了核衣壳，还应包括该病毒的其他结构。合成的蛋白质不只是一种，应该是多种，包括多种结构蛋白质及物质合成时所需的多种酶。【答案】B培养基的种类培养基的种类2、要从多种细菌中分离某种细菌，培养基要用（）A加入青霉素的
5、培养基 B加入高浓度食盐的培养基 C固体培养基 D液体培养基【解析】微生物的分离需使用固体培养基，由于某种细菌的种类不明，所以难以使用选择培养基，如加入青霉素的培养基可以分离到酵母菌和霉菌，加入高浓度食盐的培养基可以分离到金黄色葡萄球菌。【答案】C 果胶酶在果汁生产中的作用 探讨加酶洗衣粉的洗涤效果 酵母细胞的固定化 一、果胶酶半乳糖醛酸1作用：能够分解果胶成为可溶性的_，使浑浊的果汁变得澄清。2组成果胶果胶分解酶(1)并不特指某一种酶，而是分解_的一类酶总称。(2)包 括 多 聚 半 乳 糖 醛 酸 酶、_ 和 _。果胶酯酶3来源霉菌酵母菌细菌植物、_、_和_均能产生果胶酶。4应用细胞壁胞间
6、层果胶酶能够分解果胶，瓦解植物的_及_，使榨取的果汁变得更容易_ 和_。过滤澄清二、加酶洗衣粉蛋白酶脂肪酶淀粉酶1 常 用 种 类：_、_、_ 和 _，其中应用最广泛、效果最明显的是碱性_蛋白酶脂肪酶和碱性_。2去污机制蛋白质(1)碱性蛋白酶能将血渍、奶渍等含有的大分子_水解成可溶性的_或小分子肽，使污物从衣物上脱落。纤维素酶氨基酸(2)脂肪酶、淀粉酶和纤维素酶也能将大分子_、21_和22_水解为小分子物质。淀粉纤维素3.酶制剂特点：能够耐酸、耐碱、忍受23_和较高24_，并且通过特殊的化学物质将酶层层包裹，与洗衣粉的其他成分隔离。表面活性剂温度脂肪探究果胶酶的用量探究果胶酶的用量1实验原理实
7、验原理果胶在果胶酶的催化下形成果胶在果胶酶的催化下形成半乳糖醛酸半乳糖醛酸。(可用于植物体细可用于植物体细胞杂交，也可使榨取果汁更容易且使果汁澄清胞杂交，也可使榨取果汁更容易且使果汁澄清)(1)准确称取纯果胶酶准确称取纯果胶酶 1mg、2mg、3mg、4mg、5mg、6mg、7mg、8mg、9mg，配制成，配制成相等体积相等体积的酶的水溶液，取等量放入的酶的水溶液，取等量放入 9 支试管中，支试管中，依次编号为依次编号为 19 号号【也可只配制一个浓度的酶液，只是使用体积也可只配制一个浓度的酶液，只是使用体积(量量)不同不同】。制取苹果泥并称。制取苹果泥并称 45g 苹果泥，分装入苹果泥，分装
8、入 9 支试管中，每支支试管中，每支试管中装试管中装 5g，依次编号为，依次编号为 19 号。号。(2)将上述试管放入将上述试管放入 37的恒温水浴中平衡内外温度。的恒温水浴中平衡内外温度。(3)一段时间后将不同浓度的果胶酶分别迅速与各试管的苹果泥混一段时间后将不同浓度的果胶酶分别迅速与各试管的苹果泥混合，然后再放入恒温水浴中，约合，然后再放入恒温水浴中，约 20min。(4)过滤后测量记录果汁体积。过滤后测量记录果汁体积。(5)实验结果分析说明实验结果分析说明实验中所用的果胶酶尽量使用其纯酶制剂或不含抑制物实验中所用的果胶酶尽量使用其纯酶制剂或不含抑制物的粗酶制剂，以免影响对酶用量的估算。的
9、粗酶制剂，以免影响对酶用量的估算。如果随着酶浓度的增加，过滤到的果汁的体积也增加，如果随着酶浓度的增加，过滤到的果汁的体积也增加，说明酶的用量不足；当酶的浓度增加到某个值后，再增加酶的说明酶的用量不足；当酶的浓度增加到某个值后，再增加酶的用量，过滤到的果汁的体积不再改变，说明酶的用量已经足够，用量，过滤到的果汁的体积不再改变，说明酶的用量已经足够，这个值就是酶的最适用量。这个值就是酶的最适用量。【突破题突破题 1】在用果胶酶处理果泥时，为了使果胶酶能够充分地在用果胶酶处理果泥时，为了使果胶酶能够充分地催化反应，应采取的措施是催化反应，应采取的措施是()A加大苹果泥用量加大苹果泥用量B.加大果胶
10、酶用量加大果胶酶用量C进一步提高温度进一步提高温度D用玻璃棒不时地搅拌反应混合物用玻璃棒不时地搅拌反应混合物【解题指导解题指导】搅拌可以使酶与底物充分接触而提高反应效搅拌可以使酶与底物充分接触而提高反应效率，使反应更充分。率，使反应更充分。【答案答案】D酶活力测定及不同加酶洗衣粉洗涤效果的实验酶活力测定及不同加酶洗衣粉洗涤效果的实验1酶的简单制作方法酶的简单制作方法(1)对于细胞内的酶：用捣碎机、研磨器等机械将生物组织对于细胞内的酶：用捣碎机、研磨器等机械将生物组织细胞破碎，使酶从活细胞中释放出来，进入细胞外的溶液中，细胞破碎，使酶从活细胞中释放出来，进入细胞外的溶液中，经过滤、离心制备成粗酶
11、液。经过滤、离心制备成粗酶液。(2)对于分泌到细胞外的酶：直接从分泌物或细胞外的组织对于分泌到细胞外的酶：直接从分泌物或细胞外的组织间隙中提取，提取过程中注意温度、间隙中提取，提取过程中注意温度、pH 等多种环境因素对酶活等多种环境因素对酶活性的影响。性的影响。2酶活力测定的一般原理和方法酶活力测定的一般原理和方法酶的活力通常以单位时间内底物的消耗量或者在单位时间酶的活力通常以单位时间内底物的消耗量或者在单位时间内产物的生成量来表示。例如，通过测定单位时间内麦芽糖的内产物的生成量来表示。例如，通过测定单位时间内麦芽糖的生成量来检测淀粉酶的活力。另外，还可以通过测定单位时间生成量来检测淀粉酶的活
12、力。另外，还可以通过测定单位时间内淀粉的消耗量来检测淀粉酶的活力。内淀粉的消耗量来检测淀粉酶的活力。种类种类洗涤原理洗涤原理洗涤实例洗涤实例蛋白酶蛋白酶可将蛋白质水解为易溶解或分散可将蛋白质水解为易溶解或分散于洗涤液中的小分子肽或氨基酸于洗涤液中的小分子肽或氨基酸血渍、奶渍及各种血渍、奶渍及各种食品类的蛋白质食品类的蛋白质污垢污垢脂肪酶脂肪酶把脂肪水解为较易溶解的甘油和把脂肪水解为较易溶解的甘油和 游离的脂肪酸游离的脂肪酸食品的油渍、人体食品的油渍、人体 皮脂、口红皮脂、口红淀粉酶淀粉酶能使淀粉迅速分解为可溶性的麦能使淀粉迅速分解为可溶性的麦 芽糖、葡萄糖等芽糖、葡萄糖等来自面条、巧克力来自面
13、条、巧克力 等的污垢等的污垢纤维素酶纤维素酶使纤维的结构变得蓬松，从而使使纤维的结构变得蓬松，从而使渗入到纤维深处的尘土和污垢能渗入到纤维深处的尘土和污垢能够与洗衣粉充分接触，达到更好够与洗衣粉充分接触，达到更好 的去污效果的去污效果3常用酶制剂的种类及洗涤原理常用酶制剂的种类及洗涤原理4.探究加酶洗衣粉洗涤效果探究加酶洗衣粉洗涤效果(1)实验原理实验原理加酶洗衣粉中含有酶制剂加酶洗衣粉中含有酶制剂(蛋白酶、脂肪酶、淀粉酶、纤蛋白酶、脂肪酶、淀粉酶、纤维素酶维素酶)。污渍中的蛋白质、脂肪、淀粉、纤维素在酶制剂的分解污渍中的蛋白质、脂肪、淀粉、纤维素在酶制剂的分解下形成小分子物质。下形成小分子物
14、质。温度、温度、pH、表面活性剂会影响酶的活性。、表面活性剂会影响酶的活性。(2)实验变量控制实验变量控制比较普通洗衣粉与加酶洗衣粉的洗涤效果：自变量为洗比较普通洗衣粉与加酶洗衣粉的洗涤效果：自变量为洗衣粉的种类，其余变量为无关变量，应严格控制，以免造成干衣粉的种类，其余变量为无关变量，应严格控制，以免造成干扰。扰。探究加酶洗衣粉的最适温度：水温为自变量，水温梯度探究加酶洗衣粉的最适温度：水温为自变量，水温梯度应较小。应较小。不同种类加酶洗衣粉的洗涤效果：洗衣粉种类为自变量。不同种类加酶洗衣粉的洗涤效果：洗衣粉种类为自变量。【突破题突破题 2】下列验证某种加酶洗衣粉需要的最适温度，实验正下列验
15、证某种加酶洗衣粉需要的最适温度，实验正确的是确的是()A取一系列不同温度，其他条件相同的水，加入相同的污取一系列不同温度，其他条件相同的水，加入相同的污物及等量加酶洗衣粉，看哪一个温度中的效果最好物及等量加酶洗衣粉，看哪一个温度中的效果最好B在不同温度的水中，加入不等量的洗衣粉，看哪种效果在不同温度的水中，加入不等量的洗衣粉，看哪种效果好好C将加酶洗衣粉加入将加酶洗衣粉加入 30水中不如加到水中不如加到 45的水中洗涤的水中洗涤效果好，说明效果好，说明 45为最适温度为最适温度D将加酶洗衣粉与普通洗衣粉分别加入将加酶洗衣粉与普通洗衣粉分别加入 37的水中洗涤同的水中洗涤同样的污物，发现加酶洗衣
16、粉效果好，说明加酶洗衣粉的最适温样的污物，发现加酶洗衣粉效果好，说明加酶洗衣粉的最适温度为度为 37【解题指导】验证某种加酶的洗衣粉的最适温度的实验，变量只能是温度，其余情况应遵循单一变量的原则。【答案】A组成本质作用果胶酶多聚半乳糖醛酸 酶、果胶分解酶、果胶酯酶蛋白质催化水解果胶成为可溶性半乳糖醛酸纤维素酶C1 酶、CX 酶、葡萄糖苷酶蛋白质果胶酶与纤维素酶的比较【演绎题演绎题】关于果胶酶的叙述中错误的是关于果胶酶的叙述中错误的是()A组成植物细胞壁的主要成分是果胶和纤维素，果胶主要组成植物细胞壁的主要成分是果胶和纤维素，果胶主要分布在细胞的初生壁和胞间层分布在细胞的初生壁和胞间层B果胶有多
17、种，果胶酶也有多种，如多聚半乳糖醛酸酶、果胶有多种，果胶酶也有多种，如多聚半乳糖醛酸酶、果胶分解酶等果胶分解酶等C果胶酶在食品工业中有广泛的用途，在其他方面则无用果胶酶在食品工业中有广泛的用途，在其他方面则无用处，体现了酶的专一性处，体现了酶的专一性D果胶酶、纤维素酶配合使用，可分解植物细胞壁中的果果胶酶、纤维素酶配合使用，可分解植物细胞壁中的果胶和纤维素，促使淀粉、脂质、维生素和蛋白质的释放，以提胶和纤维素，促使淀粉、脂质、维生素和蛋白质的释放，以提高饲料的营养价值高饲料的营养价值【解题指导】果胶酶的作用是分解细胞壁中的果胶，有多、果胶分解酶果胶分解酶和果胶酯酶果胶酯酶等；在食品工业如制作果
18、汁、提高葡萄酒质量等方面作用很大，也常与纤维素酶等共同使用，提高饲料营养和降低饲料黏度，促进饲料在动物消化道内的消化等作用。【答案】C1.(2011 届惠州调研)下列关于生物工程中酶的作用叙述不正确的是()A纤维素酶可用于体细胞杂交B胰蛋白酶可用于动物细胞培养C限制性核酸内切酶只用于提取目的基因DDNA 连接酶可用于 DNA 的拼接【答案】C2(2011 届广州调研)关于生物大分子结构或功能的说法，正确的是()ADNA 分子的特异性主要取决于碱基的特定排列顺序B纤维素酶能除去细胞壁，果胶酶可分解细胞膜C一种 tRNA 只能识别一种密码子，但能携带多种氨基酸D肽链的盘曲和折叠被解开，蛋白质的特定
19、功能不会发生改变【答案】A3(2009 年广东文基)嫩肉粉是以蛋白酶为主要成分的食品)添加剂，就酶的作用特点而言，下列使用方法中最佳的是(A炒肉的过程中加入B肉炒熟后起锅前加入C先用沸水溶解后与肉片混匀，炒熟D室温下与肉片混匀，放置一段时间，炒熟【解析解析】本题考查酶的使用方法，酶的活性容易受到温度，本题考查酶的使用方法，酶的活性容易受到温度，酸碱度影响而失活，所以要保持酶的活性，才能使之发挥作用。酸碱度影响而失活，所以要保持酶的活性，才能使之发挥作用。ABC 在反应之前都经高温处理了，所以酶失去活性，只有在反应之前都经高温处理了，所以酶失去活性，只有 D，先，先让酶反应，后炒熟，不影响酶的作
20、用发挥。让酶反应，后炒熟，不影响酶的作用发挥。【答案答案】D类型类型优点优点不足不足直接使用酶催化效率高，低耗能、低污染等。对环境条件非常敏感，容易失活；溶液中的酶很难回收，不能被再次利用，提高了生产成本；反应后酶会混在产物中，可能影响产品质量。固定化酶酶既能与反应物接触，又能与产物分离，同时，固定在载体上的酶还可以被反复利用。一种酶只能催化一种化学反应，而在生产实践中，很多产物的形成都通过一系列的酶促反应才能得到的。固定化细胞成本低，操作更容易。固定后的酶或细胞与反应物不容易接近，可能导致反应效果下降等。1.1.灼烧灭菌：灼烧灭菌：接种用具和接种过程中的试管口或瓶口放在酒精接种用具和接种过程
21、中的试管口或瓶口放在酒精灯火焰的充分燃烧层中进行灼烧灭菌（如教材灯火焰的充分燃烧层中进行灼烧灭菌（如教材1616页图页图2-22-2所所示）。示）。常用的消毒与灭菌的方法常用的消毒与灭菌的方法2.2.干热灭菌：干热灭菌：将玻璃器皿、金属用具等能耐高温并需要保持干燥将玻璃器皿、金属用具等能耐高温并需要保持干燥的物品放到干热灭菌箱内，在的物品放到干热灭菌箱内，在160160170170OC C中加热中加热1 12h2h即可。即可。3.3.高压蒸汽灭菌：高压蒸汽灭菌：将需灭菌的物品放到盛有水的高压灭菌锅内将需灭菌的物品放到盛有水的高压灭菌锅内（见教材（见教材1616页图页图2-42-4）煮沸，待冷空气排尽后，密闭继续加热至）煮沸，待冷空气排尽后，密闭继续加热至锅内压力到锅内压力到100kPa100kPa，温度到，温度到121121OC C后，维持后，维持151530min30min即可。即可。原理：原理：对照原则(1)设立重复组：统计某一稀释度下平板上的菌落数时，要至少涂布3个平板作重复组，增强实验结果的说服力与准确性。