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1、支原体PCR检测实验报告1.0 物品、试剂： 10ul及200ul Tip头、0.2ml PCR薄壁管、管架、手套； DEPC处理水、Ex-Taq试剂盒（包括PCR Buffer、MgCl2、Taq酶）、DNA Marker均另购， 引物/dNTP混合物(Primer/Nucleotide Mix)、阳性对照DNA (Positive Control DNA)、内标DNA (Internal Control DNA) 为普飞生物提供的VenorGem试用装中所含。 2.0实验方法： 2.1样品的准备： 样品：细胞的新鲜培养物上清，小牛血清。 分别取两种样品各100ul至灭菌1.5ml离心管中，
2、将管盖盖紧。置95保温5分钟，短暂离心（5 sec）。 2.2 试剂的溶解配制： 将装有以下试剂干粉的离心管离心，向管中加入DEPC处理水，充分摇匀溶解后再短暂离心。以下为各组分的加水量： 引物/dNTP混合物 (Primer/Nucleotide Mix) 55ul 阳性对照DNA (Positive Control DNA) 50ul 内对照DNA (Internal Control DNA) 50ul 2.3 PCR混合物： 向0.2ml PCR薄壁管中依次加入以下组分， PCR组分（单位：ul）负对照管内对照管阳性对照管牛血清检测管发酵液检测管水28.826.824.824.824.8
3、10PCR Buffer55555MgCl2（25mM）66666引物/dNTP混合物1010101010内对照DNA2222阳性对照DNA2处理后样品22Taq酶（5U/ul）0.20.20.20.20.2总体积5050505050盖紧管盖，轻弹管壁混匀，稍加离心。2.4热循环程序：将准备好的PCR管放入PCR仪，运行如下程序94 2min1个循环94 30sec35个循环55 30sec72 30sec降温至482.5凝胶电泳：1.2琼脂糖凝胶电泳，TBE缓冲液，PCR产物及Marker均点样5ul，于50V下电泳1hr，EB染色15min，紫外灯下观察。3.0结果分析：电泳结果见图。图中泳道M为DNA Marker，1为负对照管PCR产物，2为内对照管PCR产物，3为阳性对照管PCR产物，4为牛血清检测管PCR产物，5为发酵液检测管PCR产物。 负对照管PCR产物无带，内对照管在191 bp处有一条带，阳性对照管在278 bp处有一条带，证明本次实验准确可靠。两样品检测管均只有一条与内对照管相同位置的条带，说明样品检测管PCR反应并未受到抑制，且不含支原体。