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1、遗传学实验 吴雪薇 121140059 2013-5-23实验五：果蝇的三点测交吴雪薇 121140059一、 实验目的1、 验证连锁互换定律，掌握并进行连锁分析，学习绘制遗传学图的原理和方法。2、 了解伴性遗传与非伴性遗传的区别，了解伴性基因在正、反交中的差异。二、 实验原理三点测交把三个基因包括在同一次交配中，即用三杂合体abc/+或ab+/+c跟三隐性个体abc/abc测交。进行这种试验，一次就等于三次“两点试验”，而且带有另外两个优点。一次三点测验得到的三个重组值是在同一基因型背景、同一环境条件下得到的，而三次“两点试验”就不一定这样。重组值既受基因型背景的影响，也受各种环境条件的影响
2、，所以，只有从三点试验所得到的三个重组值才是严格地可以互相比较的。通过三点测交试验，可以得到三次两点试验所不能得到的资料，即双交换的资料。果蝇的白眼、小翅、卷刚毛为X-连锁基因，全部隐性于各自的野生型基因（红眼、长翅、直刚毛），把白眼、小翅、卷刚毛雌蝇（wmsn/wmsn）与野生型雄蝇交配（/Y），F1雌蝇全部为野生型，雄蝇则全部表现为三隐性突变型，让F1互交，在F2中，不管雌雄性别，除了出现双亲类型外，还会出现新的表型种类，这是由于F1雌蝇中两个染色体之间发生了互换的结果，根据基因在染色体线性排列的遗传理论，对F2进行分析即可知不同基因间的连锁距离。因为这三个基因位于性染色体上，所以这个试验
3、也可用来作为伴性遗传试验。当基因位于X或Y染色体上时，一般不含相对的等位基因，产生伴性遗传，在正交和反交试验中产生不同的结果。三、 实验材料野生型黑腹果蝇，白眼、小翅、卷刚毛三隐性果蝇。四、 实验仪器解剖镜、毛笔、麻醉瓶、白瓷板、标签、吸水纸、培养瓶 (4瓶/人)、乙醚、75%乙醇五、 实验步骤1、 选三隐性雌性处女蝇（wmsn/wmsn ）和野生型雄蝇（/Y ） 56对置于新鲜培养瓶中作正交，同时选野生型雌性处女蝇（/）和三隐性雄蝇（wmsn/Y）同置于新鲜培养瓶中，作为反交，贴上标签，注明亲本类型，实验日期，组别及姓名。2、 自始自终进行果蝇生活周期的察看。写出观察日记：记录看到的果蝇行为
4、，各发育阶段的主要现象及经历的时间等。3、 一周后，在实验室倒去亲本果蝇，一定要倒干净，一只也不能留。（此时瓶壁上应有黑色蛹)4、 二周后，F1蝇长出，实验室内观察F1雌蝇和F1雄蝇的各个性状，并观察正反交不同组合的结果如何。5、 取5-6对F1果蝇放入新鲜培养瓶中，正交放两瓶，反交一瓶。6、 三周后，倒去F1，必须倒干净，一只也不能留。7、 四周后，F2成蝇长出，统计各类果蝇数，23天后再统计一次（要求统计数量1000只以上），统计过的果蝇处死。应该统计的F2果蝇是正交中F2，但如果其数目不多，可借用反交中F2的雄蝇加以统计。8、 记录实验数据。F2果蝇表型类型（及基因型）数目重组区域w-s
5、nw-mm-sn白小卷（wmsn/wmsn,wmsn/y）164380-红长直（+/wmsn,+/y）216白小直（wm+/wmsn,wm+/y）813+-+红长卷（+sn/wmsn,+msn/y）5白长直（w+/wmsn,w+/y）6395+-红小卷（+msn/wmsn,+msn/y）32白长卷（w+sn/wmsn,w+sn/y）53147-+红小直（+m+/wmsn,+m+/y）94总计635108242160重组值17.01%38.11%25.20%双交换律2.05%六、 实验结果注：（1）F2统计数据由正交的数据与反交的雄蝇统计数据两者相加获得。（2）表中“-”代表没有交换，“+”代表
6、发生了交换。数据分析：1、重组率计算： 108RF(w-sn) = = 17.01% 635 242RF(w-m) = = 38.11% 635 160RF(m-sn) = = 25.20% 6352、由表型的数据比较可看出，白小直与红长卷为双交换表型，因此可以得出三个基因在染色体上的顺序为：控制直刚毛与卷刚毛的sn在中间w sn - m或者m sn w注：以上两种结果在本实验的结果表示中无差别，因此后面就用第一种表示方法表示。 13双交换率 = = 2.05% 6353、表格中w与m间的重组率的计算没有将双交换的值计算在内，实际上它们之间在双交换时发生了两次交换，因此对其重组率的计算校正：R
7、F(w-m) = 38.11% + 2.05% * 2 = 42.21%4、由以上数据绘制染色体图w sn m 17.01 25.20 42.215、计算并发系数与干涉 2.05%并发系数：C = = 0.48 17.01% * 25.20%干涉：I = 1 C = 0.52说明有52%的双交换被干涉掉了，即染色体一个区段的交换抑制了邻近区段的另一次交换。6、（附）遗传图谱分析七、 实验结论果蝇控制眼色（红眼或白眼，w）、翅的形状（长翅或小翅，m）、刚毛的形状（直刚毛或卷刚毛，sn）三对性状的基因位于同一对染色体上，且sn基因在另两个基因的中间，遗传图距w-sn = 17.01CMsn-m =
8、 25.20CMw-m = 42.21CM八、 实验讨论1、实验结果存在偏差的原因可能有：（1）进行试验的环境条件有差异，由于不同环境条件下的重组值是有变化的。（2）数量太少，进行三点测交需要大量的数量，实验数据越多越精确，实验室中果蝇数目有限这就对实验结果影响力加大，也是导致结果与理论值有偏差的原因之一。（3）由于三隐性个体果蝇的生存力很弱，在幼虫密度较高时易在自然选择中被淘汰，在实验中此因素也有可能引起误差。（4）观察果蝇时，有一些观察不到放走的，死掉的或者没有观察清楚的，判断失误的（小翅与长翅很容易判断错误，且判断时主观性较大）等等诸多因素都会影响到实验的结果。2、要保证实验的成功，必须
9、要注意：（1）挑处女蝇时，每次只挑12小时内羽化成虫，超过12小时的成虫已逐渐有交配能力,必须一只不留地倒出处死,才能进行第二次挑选。（2）刚羽化的果蝇色淡白，体软绵，难辨，务必小心区别。（3）每个杂交组合放果蝇68对，用毛笔把果蝇扫进试管，试管要平放，待蝇醒后，方能竖起，避免果蝇粘在培养基上被闷死，杂交组合配好后，放回培养箱。两周后停止对F2代的计数，此时可能已有F3代混入影响结果。（5）尽量避免由于操作不当造成的果蝇的逃逸，这样会对最后的结果产生影响。（6）因为此次实验的连续性很强，所以一定要注意每一步的时间和操作，否则就会产生不可逆的后果，严重的要进行重做。（7）判断F2果蝇性状时，由于
10、数量巨大，应当耐心地观察判断，切忌粗心马虎导致判断出错，影响了最终的结果。九、（附）F1代果蝇眼色性状观察结果正交：野生型雄蝇与三隐性雌蝇为亲本 雌蝇均为红眼，雄蝇均为白眼反交：野生型雌蝇与三隐性雄蝇为亲本 无论雌雄均为红眼以上观察结果验证了果蝇眼色的伴性遗传，控制眼色的基因位于X性染色体上。结合整个实验结果，可得本次实验研究的三对基因均位于X性染色体上。十、（附）果蝇生活周期观察日记（单因子杂交规律实验时所做观察）4月11日F1投放，观察反交管。4月20日气温15，有大量幼虫和蛹，黄色的蛹23个。4月21日气温15，黄色的蛹50个，爬到壁上的幼虫数增加。4月22日气温14，黄色的蛹85个，无成虫。4月23日气温14，无成虫4月24日气温1516，无成虫，只有黄色的蛹。4月25日改为正交管，内有许多黑色的蛹。4月26日气温1617，部分黑色的蛹孵化出成虫。结束观察。 6