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1、LC一025用高效液相色谱法制备箭叶淫羊藿中五种黄酮类化合物王超展耿信笃木(西北大学现代分离科学研究所现代分离科学陕西省重点实验室西安710069)淫羊藿，又名仙灵脾，其有效成分为8位具有异戊烯基(及其衍生基团)的黄酮醇或甙类 化舍物，即淫羊藿甙类。淫羊藿为传统补肾牡阳中药，又能强筋骨，祛风湿 。中国药典1995年版收载了该属淫羊藿、箭叶淫羊藿、柔毛淫羊藿、巫山淫羊藿和朝鲜淫羊藿五种植 物的地上部分。目前，淫羊藿的有效成分多采用多步液一液萃取或液一液萃取和经典柱色谱相结合的方 法进行分离制备”51，这种方法必须经过多步操作，多以手工操作为主，而且分辨率较低， 不能将结构非常相似的几种化合物分开
2、。高效液相色谱(HPLC)具有分离效率高，分离快速及 自动化程度高等特点，所以一直被认为是一种理想的，很有发展前景的分离纯化手段。目前，采用有机溶剂一水溶剂为流动相的，以梯度洗脱方法的反相高效液相色谱(RPHPLC)已广泛用于黄酮类化合物的研究，但其主要应用在定量分析中“。”，利用它来分离制备黄酮类化合 物尚不多见。本文采用反相高效液相色谱法对箭叶淫羊藿中的主要黄酮类化合物进行了分离 制备。采用半制备反相色谱柱，分别以甲醇和乙腈水溶液为流动相，比较其对箭叶淫羊藿提取 液的分离情况，结果表明乙精水溶液对箭叶淫羊藿提取液的分离效果要远远优于甲醇水溶 液，其分离结果如图l所示。因此实验中采用乙腈水溶
3、液作为流动相分离制备箭叶淫羊藿中 的主要黄酮类化合物。图l 27乙腈水溶液为流动相分离箭叶淫羊着提取液的半制各反相色谱圈 色谱条件：ShimpackPREPCs(250X20ramlD，15“m，100A)流速50mLlmin，进样量lmL，270nm紫外检测，室温从图1看出，27乙腈水溶液能使箭叶淫羊藿提取液得到较好的分离，但峰3和峰4之 间还没有达到基线分离。为了增大各物质之问的分离度，实验中采用257-,腈水溶液作为流 动相对箭叶淫羊藿提取液进行了分离，峰3和峰4之间便可达到基线分离。当上样量达到7mL箭叶淫羊藿提取液时，用半制备色谱在257,腈水溶液为流动相分离 时，分离效果会变差，但
4、保留时间会缩短。虽然用237,腈水溶液在进lmL箭叶淫羊藿提取141液时在100分钟内未出峰，但在此条件下进30mL箭叶淫羊藿提取液时在150分钟内5种主 要黄酮类化合物全部被洗脱出来，实验中分别考察了用泵进30 mL、35mL和40mL箭叶淫羊 藿提取液的色谱分离情况，结果表明当上样量达到40 mL时峰3和峰4已基本上完全重叠， 上样量30 mL和35L时的分离情况相差不大，因此确定进样量为35 mL，其色谱分离图如 图2所示。图2上样量为35mL时箭叶淫羊藿提取液的半制备色谱圈 色谱条件：流动相为23乙腈流速50 mLmin，270nm紫外检测，室温在制备色谱中，进样是一项很重要的操作。实
5、验中还对大体积低浓度上样和小体积高 浓度上样两种不同的上样方式(两种进样方式中溶质的绝对量相等)作了比较，结果表明两种上样方式的色谱图基本相同。因此实验中用泵进大体积未浓缩的提取液，使得分离和富集一步完成，简化了操作步骤，提高了工作效率。 在上述所确定的制备条件下，对箭叶淫羊藿提取液中的主要黄酮类化合物进行制各，采用峰中心切割收集峰1、峰2、峰3、峰4和峰5，连续多次制备，合并相同的色谱馏分， 分别记为化合物I、II、和V。采用分析型反相高效液相色谱对所得到的各化合物进 行分析，结果表明化合物I、II、和V的纯度均大于95，而化合物的纯度较低。因此 将化合物再用半制备型高效液相色谱对其进行二次
6、纯化，收集目标物的色谱馏分，反相色 谱分析结果表明经二次纯化后的化合物纯度大于95。对分得的5种化合物分别进行波谱分析，将得到的结果和文献所报道的已知化合物的 波谱数据进行对照，确定了其结构，化合物I、II、III、和V分别为hexandraside F、 朝藿定A、朝藿定B、朝藿定C及淫羊藿甙，其中hexandraside F是首次从淫羊藿属植物中 分离得到的。参考文献 1凌一揆主编中药学。上海：上海科学技术出版社出版，1991，221 23孙朋悦，徐颖，文晔等中国药物化学杂志，1998，6(4)，2813李文魁，肖培根，潘景岐等中国药学杂志，1996，31(6)：，332 4贾宪生，吴家其中国中药杂志，1998，23(12)，737 5阎文枚，符颖中国中药杂志，1998，23(12)，7356YITODetermination of flavonol glycosides in Bpimedii Herba by high performance liquidchromatography，JChromatogr1988，456：，392 7郭宝林，肖培根天然产物研究与开发，1996，8(1)：，74