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1、实 验 6,细菌培养法,一、目的要求,1、掌握细菌的一般培养法； 2、掌握细菌培养的接种方法，进一步熟悉无菌操作技术。,二、实验材料,菌种：葡萄球菌培养物、大肠杆菌培养物、枯草杆菌培养物、变形杆菌培养物； 实验器材：接种环、接种针、酒精灯； 培养基：普通琼脂平板、试管斜面、液体培养基、半固体培养基；,细菌接种的要求,无菌操作 细菌检验的操作需在无菌室或超净工作台内进行。 无菌室、超净工作台使用前后需进行消毒。 细菌检验使用的物品使用前后需严格灭菌 标本的采集 无菌试管、烧瓶的使用,常用的有接种针、接种环、接种钩、接种圈、接种铲或接种锄、玻璃涂棒等。,图6,接种工具,细菌接种的基本程序,灭菌接种
2、环,沾取标本,接种,灭菌接种环,杀灭接种环沾染的细菌，以免污染标本,杀灭接种环沾染的细菌，以免污染环境,三、细菌的接种法,（二）细菌的琼脂平板分离划线接种法,菌种：葡萄球菌、大肠埃希菌等普通琼脂培养物； 培养基：固体平板培养基； 用途 ：该法主要是借助划线而将混杂的细菌在琼脂表面分散开，使单个细菌能固定在某一点，生长繁殖后形成单个菌落，以达到分离纯种的目的。,细菌的分离平板划线法,1.分区划线法： 2.连续划线法：,1.分区划线法,第一区划线,灭菌接种环,第二区划线,灭菌接种环,第三区划线,灭菌接种环,2.连续划线法,（三）细菌的纯种接种法,当细菌分离成纯种后，常需要接种到相关的培养基中，以测
3、试其各种生物学性状。一般可用斜面、半固体、液体培养基来检验细菌的培养特性，相应培养基的接种方法有三种。 琼脂斜面接种法 液体接种法 半固体接种法,1、琼脂斜面接种法,菌种：葡萄球菌、大肠埃希菌等普通琼脂培养物； 培养基：斜面固体培养基； 用途：扩增细菌、保存菌种；或用于观察其某些生化特性。,琼脂斜面培养基接种法,2、液体接种法,菌种：葡萄球菌或大肠埃希菌、枯草杆菌等普通琼脂培养物； 培养基：液体培养基； 接种方法：液体接种法。 从斜面菌种接入液体培养液；从液体培养液接入液体培养液； 用途：扩增细菌，用于观察细菌的生长特性或测定其生化特性。,3、半固体穿种接种法,菌种：葡萄球菌、大肠埃希菌等普通
4、琼脂培养物； 培养基：半固体培养基 接种方法：穿刺接种法。用接种针垂直地穿入培养基中心至底部；然后沿着原接种线将针拔出。 用途：检验细菌的运动性或观察细菌的生化反应。,四、细菌培养法,一般培养（需氧培养）： 培养温度：35（采用恒温培养箱） 培养时间：1824h 二氧化碳培养法：烛缸法、二氧化碳培养箱 厌氧培养法：厌氧培养箱、厌氧袋、厌氧罐、疱肉培养法、硫乙醇酸盐法等,细菌在固体培养基中的生长现象,菌落： 定义：指单个细菌在平板培养基上3718-24h的生长繁殖，形成单一的肉眼可见的细菌集团。 菌落特征：大小、形状、边缘、颜色、表面、透明度、湿润度、黏度、溶血性 菌落类型：光滑型（S）、粗糙型（R）、黏液型（M） 菌苔：指多个菌落融合在一起形成的细菌堆积物。,菌落与菌苔,菌落（S型）,菌苔,菌落（R型）,菌落的形态特征有助于细菌的鉴别,细菌在液体培养基中的生长现象,混浊：大多数细菌 沉淀：多见于链状排列的细菌 菌膜：多见于需氧菌,细菌在半固体培养基中的生长现象,有鞭毛细菌：在培养基中沿穿刺线并向外扩散生长，穿刺线边缘模糊。 无鞭毛细菌：只沿穿刺线生长，穿刺线边缘清晰。,