菊花的组织培养.pdf

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1、菊花的组织培养 目标导航1.了解植物组织培养技术在生产中的应用和MS固体培养基的 配方。2.熟悉植物组织培养的基本过程和影响植物组织培养的因素。3. 理解细胞分化的概念及离体植物细胞的脱分化和再分化。 一、基础知识 1植物组织培养的基本过程 (1)细胞全能性的表达：_的植物组织或细胞，在一定的 _、_和_的作用下，发育成完整植 株的过程。 (2)细胞分化：在植物的_过程中，细胞在_、_和 _上都会出现_的差异，形成这些差异的过程叫做细 胞分化。 (3)植物组织培养的基本过程 离体的植物器官、组织或细胞(又叫_)愈伤组织胚状体、丛芽等 新个体 愈伤组织的特点：细胞_，是一群_ 的呈_的薄壁细胞。

2、 脱分化(去分化)：由_的植物组织或细胞产生 _的过程。 再分化：由_重新分化成根或芽等器官的过 程。 (4)条件：_的植物组织或细胞，在一定的_、_和 其他外界条件的作用下就可能表现出全能性，发育成完整植株。离体的 植物组织或细胞叫做_。 2影响植物组织培养的因素 (1)培养材料的影响：不同的植物组织，培养的难易程度_。 对于同一种植物材料，材料的_、_等也会影响 实验结果。因此菊花的组织培养，一般选择_的茎 _部_的侧枝。 (2)营养物质的影响：常用的_培养基，主要成分包括 _、_、_以及蔗糖等。其中 _和_提供植物细胞所必需的无机盐；_ 提供碳源，维持细胞渗透压。 (3)植物激素的影响：

3、MS培养基常需添加植物激素。其中_和 _是启动细胞分裂、脱分化和再分化的关键性激素，这两种 激素的_、_以及_等，都会影响实 验结果。 下表是关于两种植物激素在组织培养过程中的作用。 使用顺序或用量比实验结果 先使用生长素，后使用细胞 分裂素 有利于_，但细胞 _ 先使用细胞分裂素，后使用 生长素 细胞_ 同时使用分化频率_ 生长素用量/细胞分裂素用 量，比值高 有利于_的分化、抑制_的 形成 生长素用量/细胞分裂素用 量，比值低 有利于_的分化、抑制_的 形成 生长素用量/细胞分裂素用 量，比值适中 促进_的形成 (4)环境因素的影响：_、_、_等条件也能影响植 物组织培养。 二、植物组织培

4、养的操作流程 1制备MS固体培养基：将各种营养成分按比例配制成 _。利用母液配制菊花组织培养所需要的培养基，菊花 的组织培养比较容易，因此可以不加激素，而如果是其他植物的组织培 养，则要配制成三种培养基，即_、_和 _。配制菊花的组织培养的培养基时先将称好的琼脂加 入800 mL 蒸馏水中，加热使_熔化；然后加入 _30 g，加入一定量的_，充分混匀后加蒸馏水定 容至1 000 mL，调节_；最后分装到锥形瓶中，每瓶分装50 mL 或100 mL。用包在纱布中的棉塞封严瓶口，外面包一层牛皮纸。将配制 好的培养基放入_锅，在121下灭菌15 min。 2外植物体消毒：选取生长旺盛的菊花的嫩枝，先

5、用清水洗净，再用 体积分数为_浸泡67 s后，立即取出并用无菌水清 洗，取出后吸干水分再放入质量分数为_中浸泡 12 min。取出后，在无菌水中至少清洗3次，漂净消毒液。 3接种：在超净工作台上铺上无菌滤纸，将已消毒的菊花茎段切成小 段(长0.51.0 cm)，迅速接种到培养基上。插入时应注意方向，使嫩茎 的形态学下端接触培养基，不要_。每瓶接种68块嫩茎。接种 后，将锥形瓶的瓶口在酒精灯火焰上转动灼烧一遍，将封口膜重新扎 好，贴上标签，做好记录。 4培养：接种后的锥形瓶放在_中培养。培养温度应控制在 1822，并且每日用日光灯光照12 h，并定期进行_，保持适 宜的_和_。 5移栽：当小苗长

6、到56 cm，基部形成根原基的时候，即可进行移 栽。试管苗是在无菌、充分营养供给、适宜的光照和温度以及100%相 对湿度环境中生长的。刚出瓶的试管苗对外界环境不太适应。将试管苗 培养瓶的瓶口敞开一半，放置在2025的遮阴环境中，适应714 d。若试管苗不萎蔫、有新生长的趋势，便可将试管苗取出，小心洗净 粘在根上的培养基，植入盛有_等材料的花盆 中，浇足水分，罩上带孔的塑料薄膜，将花盆放置在2025的阴凉处 35 d。待幼苗长出新叶时，揭去塑料薄膜，再过710 d，幼苗即可移 栽到土壤里。 6栽培：将幼苗移载后，每天观察并记录幼菌生长情况，适时浇水、 施肥，直至开花。 提醒(1)植物组织培养一定

7、要采用无菌技术。 (2)实验选材是实验成功的关键。 知识点一植物组织培养的基本过程及影响因素 1请回答下列有关植物组织培养的几个问题。 (1)离体植物组织和细胞培养常用的一种培养基是_，其主要 成分中的大量元素有_，培养基中常用的两种植物激素是 _和_，两者使用时的_、_、 _等，都会影响实验的结果。 (2)下图表示植物组织培养的部分过程： 过程是_，过程是_，A是_。 (3)组织培养过程中还需要维持一定的外界条件，一是要有适宜的 _，二是_。 2下列关于影响植物组织培养因素的说法，正确的是() A不同植物组织培养的难易程度不同，同一种植物材料培养的难易程 度相同 B在植物组织培养中，培养基中

8、必须添加植物激素 C植物激素中，生长素和细胞分裂素的作用是相互独立的 DpH、温度、光照条件等对植物组织培养也特别重要 知识点二植物组织培养操作过程 3下列哪组符合菊花组织培养的基本步骤() A制备MS培养基外植体消毒接种培养移栽栽培 B制备MS培养基外植体消毒接种培养栽培移栽 C制备MS培养基外植体消毒接种栽培培养移栽 D制备MS培养基外植体消毒接种移栽培养栽培 4关于植物组织培养的内容，以下说法错误的是() A一般来说容易进行无性繁殖的植物，也容易进行组织培养 B对菊花茎段进行组织培养，不加植物激素也能成功 C接种后的锥形瓶放入无菌箱中，给予适宜的温度和光照即可 D移栽生根的试管苗之前，先

9、打开瓶口，让试管苗在培养间生长几日 参考答案 一、1.(1)离体营养物质激素其他外界条件(2)个体发育形态 结构生理功能稳定性(3)外植体脱分化再分化排列疏松而 无规则高度液泡化无定形状态高度分化愈伤组织脱分化 产生的愈伤组织(4)离体营养物质激素外植体 2(1)差别很大年龄保存时间的长短未开花植株上新萌生 (2)MS大量元素微量元素有机物大量元素微量元素蔗糖 (3)生长素细胞分裂素浓度使用的先后顺序用量的比例细胞分 裂不分化既分裂又分化提高根芽芽根愈伤组织 (4)pH温度光照 二、1.MS培养基母液脱分化培养基生芽培养基生根培养基琼 脂蔗糖各种母液pH高压蒸汽灭菌 270%的酒精0.1%的氯

10、化汞溶液3.倒插4.无菌锅消毒温度 光照5.消过毒的蛭石或珍珠岩 对点训练 1(1)MS培养基N、P、K、Ca、Mg、S生长素(类)细胞分裂素 (类)浓度使用的先后顺序用量的比例(2)脱分化再分化愈伤 组织(3)温度无菌(环境) 规律链接 (1)愈伤组织与根尖分生区组织的比较 组织 类型 细胞来源 细胞形 态 细胞结 构 细胞排 列 细胞 去向 根尖分生 组织 受精卵正方形 无液泡紧密 分化成多种 细胞组织 愈伤高度分化 无定形 高度液 疏松 再分化成新 组织细胞泡化个体 相同点都通过有丝分裂进行细胞增殖 (2)MS培养基是植物组织培养必需的物质基础，其中相关激素(细胞分裂 素和生长素)的浓度

11、及使用的先后顺序和用量的比例是调节分化的关 键。在植物组织培养中，应把握好生长素和细胞分裂素的浓度、用量比 例及使用顺序。 2D不同植物组织培养的难易程度不同，同一种植物材料的不同器 官或不同生长期细胞培养的难易程度也不同，故A错误；在植物组织培 养中，一般培养基中要加入植物激素，像菊花茎段的培养比较容易，就 不必添加植物激素了，故B错误；生长素与细胞分裂素共同起作用，促 使愈伤组织、根、芽的形成，只是用量比值不同，作用效果不同而已， 故C错误；在培养过程中，需要适宜的pH、温度、光照(脱分化不需要) 等适宜条件，即D正确。 3A移栽是指将培养基上培养的幼苗长壮后移栽到土壤中，栽培是 对移栽后

12、的幼苗进行精细管理培养的过程，应先移栽后栽培。 规律链接试管苗培养过程中应注意的问题： (1)培养一株完整的试管苗，必须先进行生芽培养，然后进行生根培养， 如果顺序颠倒，先诱导生根，就不好诱导生芽了。 (2)试管苗应该进行见光培养。 (3)试管苗一般在高湿、弱光、恒温下异养生长，出瓶后一定要保温、保 湿。 (4)试管苗光合作用能力低，在移栽前给予较强光照闭瓶炼苗，以促进小 苗向自养转化。 (5)无菌技术是植物组织培养成功的关键。植物组织培养不同于扦插、压 条等常规的无性繁殖。由于植物组织培养所利用的植物材料体积小、抗 性差，所以对培养条件的要求较高，对无菌操作的要求非常严格。若不 小心引起污染，将可能造成培养工作前功尽弃，因此实验过程始终贯穿 着灭菌消毒。对培养材料进行表面灭菌时，一方面要考虑药剂的消毒效 果；另一方面还要考虑植物材料的耐受能力。不同药剂、不同植物材 料，甚至不同器官都要区别对待。 4C在植物组织培养过程中，分化程度越低的材料，越容易脱分化 形成愈伤组织，接种后的锥形瓶放入无菌箱中，给予适宜的温度和光照 进行培养，培养期间应定期消毒，防止细菌等微生物污染。