《选修一+42血红蛋白的提取和分离练习.pdf》由会员分享，可在线阅读，更多相关《选修一+42血红蛋白的提取和分离练习.pdf（7页珍藏版）》请在三一文库上搜索。
1、42血红蛋白的提取和分离练习 命题人 赵雨润 审核人 赵雨润 1 选择题 1凝胶色谱法分离蛋白质的原理依据是（ ） A根据蛋白质分子的大小 B根据蛋白质分子质量 的大小 C根据蛋白质所带电荷的多少 D根据蛋白质溶解度的大 小 2使用十二烷基硫酸钠一聚丙烯酰胺电泳过程中，不同蛋白质的电泳 迁移率完全取决于 A电荷的多少 B分子的大小 C肽链的多少 D分子形状的差异 3SDS一聚丙烯酰胺凝胶电泳法中加入SDS的作用是（ ） A增大蛋白质的相对分子质量 B改变蛋白质的形状 C排盖不同种蛋白质间的电荷差别 D减少蛋白质的相对分 子质量 4下列说法错误的是（ ） A在一定范围内，缓冲溶液能够抑制外界的酸
2、和碱对溶液pH的影 响，维持pH不变 B缓冲溶液通常由于12种缓冲剂溶解于水中配制而成 C电泳是指带粒子在电场的作用下发生迁移的过程 D透析袋能使大分子自由进出，而将小分子保留在袋内 5电泳过程中，什么样的分子迁移速度最快（ ） A纤维状、大分子 B纤维状、小分子 C球状、大分子 D球状、小分子 6下列关于电泳的说法中，不正确的是（ ） A电泳是指带电粒子在电场的作用下发生迁移的过程 B带电分子会向着与其所带电荷相反的电极移动 C蛋白质在SDS一聚丙烯酰胺凝胶中的迁移率完全取决于它所带净 电荷的多少 D蛋白质在SDS一聚丙烯酰胺凝胶电泳中的迁移率完全取决于分子 的大小 7凝胶色谱法洗脱时加入磷
3、酸缓冲液，下列说法不正确的是（ ） A在一定范围内，能对抗外来大量强酸、强碱对pH的影响，维持 pH基本不变 B选用磷酸缓冲液（ PH7.0）可用Na2HPO4和NaH2PO4按相应配 比配制 C缓冲溶液通常是由一种或两种化合物（缓冲剂）溶解于水中制得， 调节缓冲剂的配比就可制得不同pH 范围的缓冲液 D缓冲溶液广泛应用于生化实验、微生物培养、组织切片和细菌 的染色等研究 8下列关于凝胶色谱法的原理及操作，不正确的是（ ） A是利用凝胶把分子大小不同的物质分离开的一种方法 B在洗脱过程中，大分子不能进入凝胶内部而最先流出，小分子则可 以进入凝胶内部而流速缓慢，以致于最后流出 C凝胶内部有很微细
4、的多孔网状结构，其孔隙大小与被分离的物质分 子的大小无相应关系 D一般情况下，凝胶对要分离的物质没有吸附作用，因此所有要分 离的物质都应该被洗脱出来 9凝胶色谱法分离蛋白质时，凝胶的种类较多，但其共同的作用是（ ） A改变蛋白质分子通过凝胶时的路径 B吸附一部分蛋白质，从而影响蛋白质分子的移动速度 C将酶或细胞固定在凝胶中 D与蛋白质分子进行化学反应，从而影响其移动速度 10为了提取血红蛋白，从学校附近的屠宰场索取新鲜的猪血，对猪血 处理的正确操作是（ ） A要在采血容器中预先加入抗凝血剂柠檬酸钠 B取血回来后，马上进行高速长时间离心 C将离心后的血细胞加入清水缓慢搅拌 D重复洗涤直到上清液呈
5、红色为止 11分离血蛋白溶液时，将搅拌好的混合液转移到离心管中，离心后， 可以明显看到试管中的溶液分为四层。从上往下数，其中第二层是 （ ） A无色透明的甲苯层 B脂溶性物质的沉淀层 C血红蛋白的水溶液 D其它杂质的暗红色沉淀物 12蛋白质提取和分离分为哪几部（ ） A样品处理、凝胶色谱操作、SDS一聚丙烯酰胺凝胶电泳 B样品处理、凝胶色谱操作、纯化 C样品处理、粗分离、纯化、纯度鉴定 D样品处理、纯化、粗分离、纯度鉴定 13下列有关凝胶色谱的操作，错误的是（ ） A封堵玻璃管口的橡皮塞中间打孔，孔径的大小要能够插入 0.5mL的移液管 B插入橡皮塞内的玻璃管的上部要超出橡皮塞的凹穴底面 C凝
6、胶色谱柱装填前要将色谱柱垂直固定在支架上 D装柱前需要根据色谱柱的内体积计算所要的凝胶量 14凝胶色谱法分离蛋白质使用的凝胶是交联葡聚糖凝胶（SephadexG 75）。 其中“G”和“75”的含义分别是（ ） A“G”表示凝胶的使用量，“75”表示加75g的水 B“G”表示凝胶的交联程度，“75”表示需要加热到位75 C“G”表示凝胶的交联程度、膨胀程度及分离范围，“75”表示每克凝胶 膨胀时吸水7.5 g D“G”表示凝胶的膨胀体积，“75”表示每克凝胶膨胀后体积可到 75 cm3 15下列有关透析的叙述中，错误的是（ ） A用于透析的薄膜要具有选择透过性 B透析膜一般是用硝酸纤维素制成的
7、 C透析能使小分子自由进出，而将大分子保留在袋内 D透析可用于更换样品的缓冲液 16将经处理破裂后的红细胞混合液以2000r/min的速度离心10 min后， 离心管中的溶液分为四层，从上到下的顺序依次是（ ） A血红蛋白、甲苯层、脂质物质层、沉淀层 B甲苯层、沉淀层、血红蛋白、脂质物质层 C脂质物质层、血红蛋白、甲苯层、沉淀层 D甲苯层、脂质物质层、血红蛋白、沉淀层 17若以鸡蛋蛋白液为材料进行蛋白质鉴定实验，发现蛋白液与双缩脲 试剂发生反应后会粘固在试管壁上。下列关于这一现象形成原因的 描述正确的是（ ） A鸡蛋蛋白液稀释不够，搅拌不匀 B只添加了双缩脲试剂A，未添加双缩试剂B C鸡蛋蛋白
8、液不是合适的实验材料 D蛋白液与双缩脲试剂的反应时间不够长 18制作凝胶色谱柱时，橡皮塞顶部凹穴内插入的移液管的部位及长度 是（） A移液管头部5 cmB移液管尾部 5 cm C移液管头部 3 cmD移液管尾部 3 cm 二非选择题 19对血红蛋白的研究结果表明，血红蛋白实际上是由珠蛋白、原卟啉 和二价铁离子（Fe2+）所组成的结合蛋白质。有4条肽链各结合一个 辅基即血红素，O2结合于Fe2+上，血红蛋白与氧疏松结合形成氧合血 红蛋白（HbO2），这种氧合作用于氧分压高时容易进行，于氧分压低 时易于解离。红细胞结合和携带O2的过程并不影响二价铁离子，也就 是说不使之氧化为三价铁离子（Fe3+无
9、携带O2的能力）。CO与Hb的亲 和力大于O2，结合成HbCO后不能重新分离，致使Hb丧失运输O2和CO2的 机能，此称一氧化碳中毒即煤气中毒。 （1）用凝胶色谱法分离出血红蛋白时，待 接近色谱柱底端时， 才用试管收集。血红蛋白因含 而呈现红色。 （2）要使血红蛋白从红细胞中释放出来，可选用 的方法。 （3）红细胞具有运输氧的功能，是因为具有 的特性。 （4）亚硝酸盐为强氧化剂，进入人体后，可使血红蛋白失去运输氧的功 能，导致组织缺氧，其可能的原因是 。 20凝胶色谱技术是20世纪60年代初发展起来的一种快速而又简单的分 离技术，由于设备简单、操作方便、不需要有机溶剂、对高分子物 质有很高的分
10、离效果，目前已经被生物化学、分子生物学、生物工 程学、分子免疫学以及医学等有关领域广泛采用，不但应用于科学 实验研究，而且已经大规模地用于工业生产。参照右上图，完成问 题： （1）a、b均为蛋白质分子，其中先从层析柱中洗脱出来的是 ， 原因是 。 （2）自己制作凝胶色谱柱时，在色谱柱底部d位置相当于多孔板的结构 可由 替代。 （3）装填凝胶色谱柱时，色谱柱内不能有气泡存在，原因是 。 （4）若选用SephadexG100，则“G”表示 ，100表示 。 （5）洗脱用的液体应尽量与浸泡凝胶所用的液体 （相同/不 同），洗脱时，对洗脱液的流速要求是 。 21红细胞含有大量血红蛋白，红细胞的机能主要
11、是由血红蛋白完成 的，血红蛋白的主要功能是携带O2或CO2，我们可以选用猪、牛、羊 或其他脊椎动物的血液进行实验，来提取和分离血红蛋白，请完成 下列有关问题： （1）血红蛋白提取和分离的程序可分为四步： 、 、 和 。 （2）实验前取新鲜的血液，要切记在采血容器中预先加入柠檬酸钠，取 血回来，马上进行离心，收集血红蛋白溶液。 加入柠檬酸钠的目的是 。 以上所述的过程即是样品处理，它包括 、 、 收集血红蛋白溶液。 （3）收集的血红蛋白溶液在透析袋中可以经过透析，这就是样品的粗 分离。 透析的目的是 。 透析的原理是 。 （4）然后通过凝胶色谱法将样品进一步纯化，最后经SDS聚丙烯酰胺 凝胶电泳
12、进行纯度鉴定。 样品纯化的目的是 。 血红蛋白有什么特点？。这一特点对 进行蛋白质的分离有什么意义？。 练习42答案 1-5BBCDD 6-10CACA 11-15BCBCA 16-18DAA 19（1）红色区带血红素（2）将红细胞置于蒸馏水中，加体积分数 为40%的甲苯，并搅拌使之破裂（3）红细胞中的血红蛋白与氧在氧 分压高时容易结合，在氧分压低时又容易分离（4）亚硝酸盐可使血 中低铁血红蛋白氧化成高铁血红蛋白 20（1）aa相对分子质量大，无法进入凝胶内部的通道，只能在凝胶 外部移动，路程较短，移动速度较快（2）尼龙网和尼龙纱（3） 气泡会搅乱洗脱液中蛋白质的洗脱次序，降低分离效果（4）凝
13、胶的 交联程度、膨胀程度及分离范围凝胶得水值，即每克凝胶膨胀时吸水 10 g（5）相同保持稳定 21（1）样品处理粗分离纯化纯度鉴定（2）防止血液凝固 红细胞的洗涤血红蛋白的释放（3）去除相对分子质量较小的 杂质透析袋能使小分子自由进出，而大分子则保留在袋内（4） 通过凝胶色谱法将相对分子质量大的杂质蛋白除去血红蛋白呈现 红色，在凝胶色谱分离时可以通过观察颜色来判断什么时候应该收集洗 脱液这使血红蛋白的分离过程非常直观，大大简化了实验操作 练习42答案 1-5BBCDD 6-10CACA 11-15BCBCA 16-18DAA 19（1）红色区带血红素（2）将红细胞置于蒸馏水中，加体积分数 为
14、40%的甲苯，并搅拌使之破裂（3）红细胞中的血红蛋白与氧在氧 分压高时容易结合，在氧分压低时又容易分离（4）亚硝酸盐可使血 中低铁血红蛋白氧化成高铁血红蛋白 20（1）aa相对分子质量大，无法进入凝胶内部的通道，只能在凝胶 外部移动，路程较短，移动速度较快（2）尼龙网和尼龙纱（3） 气泡会搅乱洗脱液中蛋白质的洗脱次序，降低分离效果（4）凝胶的 交联程度、膨胀程度及分离范围凝胶得水值，即每克凝胶膨胀时吸水 10 g（5）相同保持稳定 21（1）样品处理粗分离纯化纯度鉴定（2）防止血液凝固 红细胞的洗涤血红蛋白的释放（3）去除相对分子质量较小的 杂质透析袋能使小分子自由进出，而大分子则保留在袋内（4） 通过凝胶色谱法将相对分子质量大的杂质蛋白除去血红蛋白呈现 红色，在凝胶色谱分离时可以通过观察颜色来判断什么时候应该收集洗 脱液这使血红蛋白的分离过程非常直观，大大简化了实验操作