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1、 黄酮含量的测定1.提取（以麦苗粉为例）根据仿生学原理，人体胃、小肠、大肠的体液酸度最佳pH分别为2.0,7.5,8.3。称取1g麦苗粉末，选用乙醇-水作为浸取剂，模拟胃肠道的pH，分别调pH值2.0,7.5,8.3,在60下超声50min，合并3次提取剂，定容。工艺流程：1g麦苗粉末一次提取（加入10ml70的乙醇，乙醇pH2.0）抽滤留渣继续二次提取，滤液保存二次提取（加10ml70的乙醇，提取剂pH7.5）抽滤留渣继续三次提取，滤液保存三次提取（加入10ml70的乙醇，乙醇pH8.3）合并三次滤液定容至30mL黄酮类化合物含量的测定分光光度法测吸光值。麦苗汁的提取直接从榨汁后定容至100
2、ml的麦苗汁中取36.5ml，加入85.2ml无水乙醇，60超声提取150min。2.试剂配置 芦丁标准液：准确称取芦丁标准品7.5mg，用50%乙醇溶解并定容至25mL，得到浓度为300mg/mL的芦丁标准溶液。10% Al(NO3)3 溶液：称取5g Al(NO3)3，用蒸馏水溶解并定容至50mL。5% NaOH 溶液：称取2.5g NaOH，用蒸馏水溶解并定容至50mL。5% NaNO2 溶液：称取2.5g NaNO2，用蒸馏水溶解并定容至50mL。0.05mol/L Tris-HCl缓冲液(pH=8.2)：0.1mol/L Tris 50mL，加入0.1mol/L HCl 22.9mL
3、，混匀，稀释定容至100mL。3 mmol/L 邻苯三酚-HCl溶液：准确称取0.0189g邻苯三酚，用10 mmol/L HCl溶解并定容至100mL。9mmol/L水杨酸-乙醇：准确称取1.2430g水杨酸，用95%乙醇溶解并定容到1000mL容量瓶中。9mmol/L FeSO4：准确称取1.3680g FeSO4，定容到1000mL容量瓶中。10mmol/L HCl：准确量取83.3mL分析纯HCl，定容到100mL容量瓶中。8.8 mmol/L H2O2 溶液：吸取0.109mL 30% H2O2，用蒸馏水溶解并定容至500mL。3.标准曲线的绘制准确称取芦丁标准品15mg，用50%乙
4、醇溶解并定容至50mL，得到浓度为0.3mg/mL的芦丁标准溶液。取7支试管编号，分别按表1中所给的量加入各种试剂，并测定其吸光值。表6 芦丁标准曲线的绘制试剂0(mL)1(mL)2(mL)3(mL)4(mL)5(mL)6(mL)芦丁标准溶液00.51.01.52.02.53.050%乙醇 3.02.52.01.51.00.505% NaNO2 溶液 0.40.40.40.40.40.40.410% Al(NO3)3 溶液 0.40.40.40.40.40.40.45% NaOH 溶液 4.04.04.04.04.04.04.0蒸馏水 2.22.22.22.22.22.22.2加入5% NaN
5、O2 溶液0.4 mL后，摇匀，放置6min ；加入 10% Al(NO3)3 溶液0.4 mL后，摇匀，放置6min ；加入5% NaOH 溶液4 mL，再加入2.2 mL蒸馏水，摇匀，放置15min。以0号试管为空白，于510nm 处测吸光值。以芦丁的含量(mg/mL)为横坐标，OD值为纵坐标绘制标准曲线。 芦丁标准曲线的绘制,以不同溶液中芦丁质量分数（mg/mL）为横坐标，吸光度值为纵坐标,建立线性关系。 123456芦丁溶液浓度（mg/mL）0.0150.0300.0450.0600.0750.090OD值0.1820.3690.5610.7570.9361.086 图1 芦丁标准曲线 4.提取液中黄酮类化合物的测定将按前述工艺流程得到的精确定容到30mL的提取液吸取3mL，按上表6号试管所示加入5% NaNO2 溶液0.4 mL后，摇匀，放置6min ；加入 10% Al(NO3)3 溶液0.4 mL后，摇匀，放置6min ；加入5% NaOH 溶液4 mL，再加入2.2 mL蒸馏水，摇匀，放置15min。以0号试管为空白，于510nm 处测吸光值，根据回归曲线计算出麦苗粉中黄酮类化合物的含量。