胃癌HER2检测亚太工作组建议.pptx

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1、,胃癌HER2检测 亚太工作组建议,目的,了解制订亚太胃癌HER2检测建议的必要性 了解HER2亚太工作组建议以及这些建议与国际指南的不同 了解亚太建议对多学科诊断及治疗亚太胃癌患者的意义,HER2，人表皮生长因子受体2.,制订适用于亚太地区的指南的必要性,关于胃癌HER2检测的现有指南主要依据欧洲的检测经验1 很多APAC国家的当地检测环境不同于欧洲、澳大利亚和美国 APAC建议必须考虑到该区域实验室日常工作中所面临的挑战,1Ruschoff, et al.Mod Pathol 2012;25:63750.,HER2，人表皮生长因子受体2.,制订适用于亚太地区的指南的必要性,修订或扩充了国际

2、指南以体现APAC实验室的特有经验1 强调本地检测环境 提高区域适用性,1Kim, et al.Asia Pac J Clin Oncol 2014.,亚太指南：概述,Kim, et al.Asia Pac J Clin Oncol 2014.,HER2，人表皮生长因子受体2；IHC，免疫组织化学,HER2多学科检测团队的原则,实验室操作建议,适当的标本类型,胃癌的独有特征,HER2基因扩增评估,IHC HER2染色评估,HER2检测解读和评分,质量控制,处理和固定,抗原修复,染色,对照,HER2多学科检测团队的原则,HER2检测需要多学科协同,准确及时地诊断患者的HER2状态需要肿瘤外科、肿

3、瘤内科和病理团队关键成员之间的协作 多学科团队应共同推动数个关键原则以保证检测质量,Kim, et al.Asia Pac J Clin Oncol 2014.,HER2，人表皮生长因子受体2.,胃癌检测的关键原则,应在诊断时常规检查不可手术、局限性晚期、复发性和转移性胃癌和胃食管结合部（GEJ）癌患者的HER2过表达情况1 HER2状态对于胃和GEJ癌同时具有预后和预测价值25 能否获取HER2靶向治疗不应影响受试患者的决策 确定HER2状态胃癌组织学诊断的时间应尽可能短1 胃和GEJ癌病情进展迅速、复发率高 必须借助对患者HER2状态的全面了解制定治疗计划1 HER2报告应提供确定性诊断

4、不应提交或接受不确定的结果 HER2检测应尽可能自动化以提供更精确和可靠的结果1,1Kim, et al.Asia Pac J Clin Oncol 2014; 2.Bang, et al.Lancet 2010;28:68797; 3.Ruschoff, et al.Mod Pathol 2012;25:63750; 4.Kim, et al.Ann Surg Oncol 2011;18:283340; 5.Gomez-Martin, et al.Clin Transl Oncol 2011;13:63651.,GEJ，胃食管结合部；HER2，人表皮生长因子受体2.,实验室建议影响检测结果的

5、重要参数,合格的标本,手术切除和活检标本均可接受1 更常使用活检标本，因为很多晚期/转移性胃癌常不可手术 4-6处新鲜肿瘤组织的活检标本可以接受1 肿瘤组织数量不足不能解释异质性，并会提高假阴性结果的风险2,3 受测活检组织数量不同可能是亚太地区HER2阳性率不同的原因 4-6处活检标本较国际指南中的6-8处活检标本更有可操作性4 不建议使用组织微阵列进行常规标本评估1 不能完全代表异质性,1Kim, et al.Asia Pac J Clin Oncol 2014; 2.Warneke, et al.Ann Oncol 2013;24:72533; 3.Lee, et al.Eur J Ca

6、ncer 2013;49:144857; 4.Ruschoff, et al.Mod Pathol 2012;25:63750.,HER2，人表皮生长因子受体2.,处理和固定,应在切除20分钟内将活检标本置于 10% NBF内1,应在切除后1小时内将手术切除标本置于 10% NBF内,1Ruschoff, et al.Mod Pathol 2012;25:63750.,NBF，中性缓冲福尔马林,冷缺血时间和经验证的方案1,冷缺血时间 = 组织切除到开始福尔马林固定之间的时间 可影响蛋白表达，使HER2检测结果解释不准确，导致假阴性结果2,3 采用指南建议范围之外的冷缺血时间必须经过验证 应分别

7、验证活检和手术切除标本。 验证必须将标本固定地点（是新鲜转运至实验室，还是在手术室内开始固定）考虑在内 在手术室需要做的： 应在检查申请单中注明切除和置于固定剂的时间 应将标本置于耐用的尺寸适当的容器内，浸泡于10% NBF内 在浸入前应切开手术标本并标记方向,1Kim, et al.Asia Pac J Clin Oncol 2014; 2.Yildiz-Aktas, et al.Mod Pathol 2012;25:1098-105; 3.Neumeister, et al.J Natl Cancer Inst 2012;104:181524.,HER2，人表皮生长因子受体2；NBF，中性

8、缓冲福尔马林,固定：一个影响检测结果的重要因素,可变且未经验证的检测流程在亚太地区常见，这是结果不可靠的主要原因 标本固定受以下因素影响： 温度 渗透速率 标本尺寸（最好厚度不超过4mm） 固定剂与组织体积的比值 pH值 固定时间 必须优化并验证这些参数,Kim, et al.Asia Pac J Clin Oncol 2014.,指南对固定的建议概述,Kim, et al.Asia Pac J Clin Oncol 2014.,NBF，中性缓冲福尔马林,远距离的样本运送,检测实验室应与当地实施组织采样的中心密切协同以确保对标本进行适当的运送准备 如果标本将在已验证的固定时间内到达HER2检测

9、实验室： 当地中心应根据建议开始固定 应固定标本，密封在适合长距离运输的容器内 如果标本将在已验证的固定时间以外到达HER2检测实验室： 应在运输之前处理标本，用蜡块包埋,Kim, et al.Asia Pac J Clin Oncol 2014.,HER2，人表皮生长因子受体2.,抗原修复1,推荐自动控温抗原修复 即使是自动化系统也必须优化，并根据生产商建议进行验证 抗原修复不佳是导致假结果的常见原因 过度修复可能活化内源性生物素，导致基于亲和素-生物素染色检测中过强的背景染色，并可导致假阳性结果2,1Kim, et al.Asia Pac J Clin Oncol 2014; 2.Buss

10、olati, et al.Histopathology 1997;31:4007.,检测1,实验室应使用标准化的商用IHC和ISH分析 可能与可靠性和重复性差相关 应建立并验证胃癌标本专用的检测流程 所有检测必须在实验室内验证 不同的IHC抗体导致不同的染色强度 可能影响阳性率2 为无、低和高水平的HER2蛋白表达生成参考图像以进行标准化评分,1Kim, et al.Asia Pac J Clin Oncol 2014; 2.Cho, et al.Mod Pathol 2013;26:677-84.,HER2，人表皮生长因子受体2；IHC，免疫组织化学；ISH，原位杂交,对照,每个标本玻片上都

11、应有HER2表达水平明确的对照 用于检测假阳性和假阴性结果 IHC： 对照应包括无（IHC 0）和强IHC染色（IHC 3+)的切片 如果可能还应包括不确定染色（IHC 2+) 应使用与胃癌标本相似的固定剂、处理和石蜡包埋技术准备对照样品,Kim, et al.Asia Pac J Clin Oncol 2014.,HER2，人表皮生长因子受体2；IHC，免疫组织化学,胃癌HER2检测结果解读和评分建议,胃癌的独有特征,胃癌是一种形成腺体和生成粘液的肿瘤，呈不完全基底侧方/侧方染色模式 胃癌的结果解读和评分指导原则不同于乳腺癌 将乳腺癌的指导原则用于胃癌标本将使HER2阳性标本评为阴性,Kim

12、, et al.Asia Pac J Clin Oncol 2014.,HER2，人表皮生长因子受体2.,乳腺癌和胃癌的区别,乳腺癌图像由Dako回赠；胃癌图像来自F.Hoffmann-L；a Roche,GOJ，胃-食管结合部；IHC,免疫组织化学,IHC 0,IHC 1+,IHC 3+,IHC 2+,乳腺癌,胃癌,由于组织和生物学差异，乳腺癌和胃及胃食管癌的评分不同,胃癌中异质性染色常见1,2,存在于高达30%的HER2阳性胃癌病例中3 更常见于IHC2+病例或混合组织学分型内4 影响检测的各个阶段，从采样到评分 问题 尽管使用现行评分标准分类为HER2阴性， 阳性染色细胞10%的肿瘤对H

13、ER2靶向治疗有染色吗？,1Hofman, et al.Histopathology 2008;52:797805; 2.Jouret-Mourin, et al.Acta Gastroenterol Belg 2012;75:913; 3.Ruschoff, et al.Mod Pathol 2012;25:63750; 4.Cho, et al.Ann Surg Oncol 2013;20:47784.,HER2，人表皮生长因子受体2；IHC，免疫组织化学,解释异质性：IHC评分,Kim, et al.Asia Pac J Clin Oncol 2014.,HER2，人表皮生长因子受体2；

14、IHC，免疫组织化学,在10%的细胞中观察到强、完全/基底侧方或侧方膜染色,在不同的蜡块切片上重复ICH染色,仍不能确定?,使用ISH确定HER2基因扩增和最终HER2状态,原发和转移性肿瘤的不一致性,原发和转移性胃癌间的HER2状态不一致并不罕见1,2 IV期病变：应在原发和远端转移样本中进行HER2检测（如可能）3 应在做出最终治疗决定前将不一致的证据报告至肿瘤学家3,1Cho, et al.Mod Pathol 2013;26:677-84; 2.Lee, et al.Eur J Cancer 2013;49:144857; 3.Kim, et al.Asia Pac J Clin On

15、col 2014.,HER2，人表皮生长因子受体2.,胃癌HER2检测程序,IHC是胃癌的主要检测方法1 曲妥珠单抗可为高表达HER2蛋白的患者提供最大获益(曲妥珠单抗胃癌ToGA试验)2 ISH用于IHC不确定病例的HER2状态确认1 首选亮视野ISH法以有效确定HER2扩增区域 澳大利亚胃癌HER2检测研究(GaTHER)认为IHC 3+强烈提示阳性ISH结果3,1Kim, et al.Asia Pac J Clin Oncol 2014; 2.Bang, et al.Lancet 2012;376:68797; 3.Fox, et al.Am J Surg Pathol 2012;36:

16、57782.,HER2，人表皮生长因子受体2；IHC，免疫组织化学；ISH，原位杂交,使用IHC HER2染色评估侵袭性癌,1Bang, et al.Lancet 2012;376:68797.,HER2，人表皮生长因子受体2；IHC，免疫组织化学, 对于活检无百分比截断值；单需要至少5个阳性细胞成簇 摘自Bang, et al.1,显微镜放大倍数法则1,关联染色强度和显微镜放大倍数与IHC评分1 可提高IHC和ISH结果的一致性2,1Ruschoff, et al.Mod Pathol 2012;25:63750; 2.Ruschoff, et al.Mod Pathol 2012;25:6

17、3750.,HER2，人表皮生长因子受体2；IHC，免疫组织化学,HER2基因扩增评估,H25:63750; 2.Bartlett, et al.J Clin Pathol 2011;64:64953.,CEP17, 染色体计数探针 17; HER2, 人表皮生长因子受体2; ISH，原位杂交,摘自Ruschoff, et al.1,排除标准,出现下列情况时应拒绝检验： 未验证的检测前处理流程，尤其是固定 由于切片机伪影、杂交信号强度和/或双探针检查中同时存在两种信号，不符合检测要求 对照结果不满意 组织切片中无肿瘤成分 超期4-6周准备切片的阴性结果（未石蜡包埋和/或在4下保存）,Kim,

18、et al.Asia Pac J Clin Oncol 2014.,质量控制,内部质控：验证,HER2检测实验室应每天对所有抗原（包括HER2）至少进行10次IHC检测 同时具有IHC和ISH能力的实验室进行首次胃HER2检测需要： 同时使用IHC和ISH分析25至50个胃癌病例 实现一致性 90% 包括至少5个HER2阳性病例（10-20%验证病例） 验证必须独立于乳腺癌方案 如果检测条件、试剂、材料和方法变更必须重新验证 病理学家应每年至少评分50个胃癌病例,Kim, et al.Asia Pac J Clin Oncol 2014.,HER2，人表皮生长因子受体2；IHC，免疫组织化学；

19、ISH，原位杂交,外部质控程序,帮助实验室确保日常检测的标准一致 允许实验室之间长期互相检查HER2检测质量,Kim, et al.Asia Pac J Clin Oncol 2014.,HER2，人表皮生长因子受体2.,总结,关键点概述,Kim, et al.Asia Pac J Clin Oncol 2014.,对亚太实验室有何意义？,亚太指南极大的扩充和明确了现有的国际指导原则 所有修订都旨在使现有指南更贴近于亚太实验室环境和他们所面对的日常挑战 实验室应尽力符合最佳实践指导原则以提高胃癌中HER2检测的精确性和可靠性 应对一些建议进行调整，以适应国家其他政策，例如IHC不确定病例的ISH复检,要点概述,制订亚太指南以强调当地检测环境，提高国际指南在该区域的可应用性。 强调了多学科协作对晚期/转移性胃癌患者治疗的重要性 涵盖了HER2检测的各阶段 在所有HER2检测实验室中应执行并遵守最佳实践指导原则，以确保胃癌患者获得精确和可靠的HER2检查,