《石蜡切片免疫组化及免疫荧光染色方法（干货分享）.doc》由会员分享，可在线阅读，更多相关《石蜡切片免疫组化及免疫荧光染色方法（干货分享）.doc（7页珍藏版）》请在三一文库上搜索。
1、石蜡切片免疫组化及免疫荧光染色方法1、组织的采集、固定和保存：采取组织后，方法一：4%多聚甲醛（）4C 固定1小时(根据组织大小和致密程度调整固定时间）或过夜方法二:采用uns固定RT 2h(68d ts）r RT 过夜（成年sis)缓冲液洗三次，每次5min,4C保存于0%乙醇中.2、组织的包埋、切片、展片及保存： 固定后的样品经梯度乙醇脱水、二甲苯透明，24石蜡包埋,常规切片，切片厚 10mm，贴于处理过的干净载玻片上，7C烤片过夜，之后收集于载片盒中，RT密封保存。 石蜡包埋:保存于4C 7%乙醇中的组织样品 8乙醇 15 min 95%乙醇15 i 100乙醇 1mn 1/2乙醇1/2
2、二甲苯 5 m 二甲苯透明 510in 1/二甲苯12石蜡30 min 石蜡(） 1.5r 石蜡（2） 。5.5h 石蜡（3） 包埋R保存3、石蜡组织切片的免疫组化方法： 密封保存于R的组织切片 二甲苯(1）2 i 二甲苯（2） 0mi 0乙醇 20mi 9乙醇 10mn 0乙醇 1min 通风橱晾干,阻水笔在组织周围画圈 切片在PBS中浸泡 5min2 0.Tox RT 10 mn 切片在PBS中浸泡 5 min3 3%H2O2RT 0min 切片在PBS中浸泡 5 i3 025胰酶RT 10min 切片在PBS中浸泡 m*3 Blocg buffer(3%SA+5GS0。2%Trionx1
3、00 in PBS)T 60n 倾去blokg bufer，勿洗 一抗4C vernigh in bckibuffer 取出切片复温1h,切片在PBS中浸泡 5in* 二抗nloking buffer GAR1:00（GM1:100)，T 1h 切片在S中浸泡 5 min*3 显色10min（0微升A+5微升+0微升PBS+5微升%H22） 如果是增强型AB只要1min即可。 切片浸入PBS终止显色，H衬染1s， 玻片架放入泡沫盒，流水冲洗m，肉眼看到淡淡的紫色即可停止。 若颜色太深，可用.1-0。5%盐酸乙醇分色12秒钟(或更久） 脱水5%乙醇 5 min 95%乙醇 n 无水乙醇 min
4、无水乙醇 n 二甲苯（1） 0in 二甲苯（2） 0min 中性树胶封片，室温干燥保存、石蜡组织切片的免疫荧光方法: 密封保存于RT的组织切片 二甲苯(1） 2 n 二甲苯（2） 0 n 10乙醇 20mn 9%乙醇 1 min 80%乙醇 10 n 通风橱晾干，阻水笔在组织周围画圈 切片在PBS中浸泡 in*2 0。4TritonxRT 1 min 切片在PBS中浸泡 min*3 切片在B中浸泡 5 *3 0.5胰酶T 0n 切片在BS中浸泡 5 mn3 Blocing bffr（3BSA+%NS+0.2%Titnx100in PBS） 60mi 倾去boibuffer，勿洗 一抗4C overh blocking bffr 取出切片复温1h,切片在PS中浸泡 5 min3 荧光二抗n lcng fer GAy ：000，GAM-481：10RT1h DAPI（：00请根据二抗说明稀释二抗） 切片在BS中浸泡 5min3 il封片,避光4C保存.谢阅.7 / 7文档交流