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1、1,专题2 细胞工程 动物细胞融合与单克隆抗体,海南省文昌中学 生物组 林春娘,2,教学目标,了解动物细胞融合的原理、过程和意义。 理解单克隆抗体制备的过程和应用,3,重点难点,1.教学重点： 单克隆抗体的制备和应用 2.教学难点： 单克隆抗体的制备过程,4,问题探讨,“番茄马铃薯”（理想图）,通过长期的实验，科学家们采用体细胞杂交技术获得了“番茄马铃薯”植株。,植物体细胞杂交过程示意图,5,如果将奶牛的细胞与植物细胞杂交，得到绿色的小奶牛，那岂不是只要晒晒太阳就可以挤出牛奶吗？,动物细胞也能融合吗？,6,A细胞,B细胞,人工诱导,1.1动物细胞融合的概念,杂交细胞,动物细胞融合（也称细胞杂交
2、）：是指两个或多个细胞融合形成一个单核细胞的过程。,一、动物细胞融合,细胞膜的流动性,灭活病毒、PEG、电激等,融合后的细胞进行有丝分裂，形成完整的杂交细胞,诱导的手段？,融合后细胞的类型？,AB杂种细胞遗传物质有什么点？,三种AA、AB、BB（A、B）,含两种生物的遗传物质,1.2动物细胞融合过程,原理？,为什么灭活的病毒能作诱剂？,灭活丧失感染性,保留融合活性,8,1.3动物细胞融合技术的意义和应用,9,1.4 比较动、植物细胞杂交技术,10,强调：效应B淋巴细胞是能够产生抗体的B淋巴细胞，下文将其简称为B淋巴细胞,抗体：能够与抗原发生特异性结合的免疫球蛋白。 能产生抗体的细胞是浆细胞（即
3、效应B细胞）。,温故知新,二、单克隆抗体,B淋巴细胞,效应B淋巴细胞,记忆B淋巴细胞,分化,11,抗体的传统生产方法,抗原,反复注射动物,从动物的血清中分离抗体,该法制备抗体的缺点： 产量低、纯度低，且抗体的特异性差、灵敏度低。,如何解决这个问题呢？,单克隆抗体！,12,读下面一段资料，找出单克隆抗体的概念,人们发现，在动物发生免疫反应的过程中，体内的B细胞可以产生多达百万种以上的特异性抗体，但是每个B细胞只分泌一种化学性质单一、特异性强的抗体。要想获得大量的单一抗体，必须用单个B细胞进行无性繁殖，即克隆。,2.1单克隆抗体的概念,单克隆抗体：单个B细胞克隆产生的化学性质单一、特异性强的抗体,
4、13,一个B淋巴细胞只分泌一种特异性抗体 骨髓瘤细胞能无限增殖,杂交瘤细胞,动物细胞培养技术,动物细胞融合技术,单克隆抗体,既能产生特异性抗体， 又能大量增殖的细胞,1975年英国科学家米尔斯坦和柯勒的实验,2.2单克隆抗体的制备,14, 如何大规模进行培养得到大量的单克隆抗体？,为什么给小鼠注射特定的抗原蛋白？,获得产生相应抗体的B细胞, 会有几种融合方式？,BB 、B瘤 、瘤瘤 （B、瘤）, 杂交瘤细胞是如何筛选出来的？有何特点？,选择性培养基：只有杂交瘤细胞才能存活,杂交瘤细胞特点：既能产生特异性抗体， 又能大量增殖。, 是否所有的杂交瘤细胞都能产生专一性抗体？,选能产生所需专一抗体的杂
5、交瘤细胞,体外培养,小鼠腹腔内培养,15,2.3单克隆抗体的应用,诊断试剂最广泛应用 准确、高效、简易、快速,单克隆抗体最主要的优点：特异性强，灵敏度高，并能大量制备。,治疗疾病和运载药物,主要用于治疗癌症治疗， 单克隆抗体作为载体， 运载抗癌药物，形成“生物导弹”， 准确杀伤癌变细胞。,“生物导弹” 单克隆抗体药物 单抗导向，药物为弹头,16,两个过程,动物细胞培养过程,单克隆抗体制备过程,三个“一”,一个诱导细胞融合的新方法 灭活病毒,一个新细胞杂交瘤细胞,一个优势单克隆抗体特异性 强、灵敏度高的优势,本节小结,重点,17,谢谢,18,(1)若A细胞是小鼠骨髓瘤细胞，则B细胞是取自小鼠体内
6、的 细胞，从小鼠体内提取分离该细胞之前，应给小鼠注射_类物质。 （2）d过程是一个_过程，该过程的进行常用_或_的诱导。 (3)假设仅考虑某两个细胞的融合，则可形成 种类型的C细胞，因此需用_培养基筛选出D细胞用于培养，D细胞的名称是 ，其特点是_。,效应B,抗原,细胞融合,聚乙二醇 灭活的病毒,选择性,3,既能无限增殖又能产生特异性抗体,杂交瘤细胞,19,(4)在培养时通过_分裂方式大量繁殖。D细胞体外培养需要注意的条件是（要求答5项）_。 （5）单克隆抗体在疾病的诊断、治疗和预防方面，与常规抗体相比，其特点是_。,特异性强、灵敏度高,有丝,无菌、无毒的环境；充足的营养；适宜的温度和pH；适
7、宜的气体环境,20,15、（1）单克隆抗体是指 。,（2）制备单克隆抗体的步骤： 将_注入小鼠体内，从小鼠脾脏中获得淋巴细胞，其中至少1个淋巴细胞带有抗该抗原的抗体。 将步骤获得的B淋巴细胞与步骤培养的骨髓瘤细胞在_的诱导下融合。 将诱导后产生的多种细胞，放在_培养基的多孔培养板上培养，筛选。 这样获得的杂交瘤细胞既具有B淋巴细胞_的能力，又具有_的本领。 检测和分离带有抗X抗体的阳性细胞，培养板中每孔放一个细胞进行培养。 将阳性细胞进行增殖，从而制备出大量抗该抗原的单克隆抗体。,化学性质单一，特异性强的抗体,抗原,聚乙二醇,选择性,无限增殖,产生专一抗体,21,（3）大量制备单克隆抗体的方法
8、主要有两种： 体外培养法，可获得10g/mL的抗体；动物体内诱生法可获得520mg/mL的抗体。你选择的方法及原因是 。,（4）用本法制备出的单克隆抗体仍具有局限性，因为它是用小鼠的_细胞制备的，其化学本质是_，应用于人体，会作为 产生 ，解决这个问题的方法是_。,大量生产选，小规模生产选,效应B,蛋白质,异物,免疫反应,采用人的效应B细胞制备,22,15、右图为某同学根据杂交瘤技术的方法，设计的生产破伤风杆菌抗体的实验方案。据图回答：（1）该方案能达到预期效果吗？。原因是 _。（2）图中为 过程，常用 作为诱导剂。该细胞继承了_ ，因此不仅能分泌_，还有 本领。,不能,没有将抗原注入小鼠体内，无法获得产生专一抗体的B淋巴细胞,细胞融合,灭活病毒,双亲细胞的遗传物质,特异性抗体,大量增殖,制备单克隆抗体,（3）该方案的目的是_。,素材和资料部分来自网络，如有帮助请下载!,