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1、1,大黄中蒽醌类的提取与分离,指导老师：肖靓,小老师： 罗天明 潘少涛 武雪莹,2,大黄中蒽醌类的提取与分离,实验原理,2,实验材料,3,实验步骤,4,思考题,5,实验目的,1,3,一、实验目的,4,二、实验原理,大黄(Rheum palmatum L.) 蓼科多年生草本植物，掌叶。大黄的干燥根可入药，性寒味苦，具有清热解毒、活血化瘀、泻火凉血等多种作用。,5,大黄中主要有效成分及结构,大黄中化学成分复杂，主要以蒽醌衍生物为主。包括游离蒽醌、蒽醌苷、二蒽酮苷、鞣质等。 游离蒽醌主要有大黄酚、大黄素、大黄素甲醚、芦荟大黄素、大黄酸。,6,提取分离原理,大黄中的蒽醌苷经酸水解成游离蒽醌苷元，苷元可
2、溶于乙醚而被提取出来。再利用各种蒽醌类化合物酸性不同，采用pH梯度萃取法分离得到各种蒽醌类化合物。,7,三、实验材料,器材： 500ml圆底烧瓶、烧杯、滴管、橡皮管、球形冷凝管、30cm层析缸、标本瓶、索氏提取器一套、250ml分液漏斗、布氏漏斗、抽滤瓶、普通滤纸、薄层板、喷雾器、广泛PH试纸 药品： 大黄20g、NaHCO3、Na2CO3、NaOH、浓硫酸、浓盐酸、浓硝酸、乙醚、石油醚、乙酸乙酯、硅胶G、CMC,8,四、实验步骤,1.粉碎 2.酸解 3.水洗、抽滤、干燥 4.索式提取 5.萃取结晶 6.硅胶薄层层析 7.纤维素柱层析,9,1.粉碎,将大黄药材切片剪碎，用粉碎机粉碎得到大黄粗粉
3、，经80目筛子得到大黄细粉。,80目,10,2.酸解,取大黄粉20 g，加20%H2SO4 200ml，在70水浴上加热 34小时。,70,20g,11,3.水洗、抽滤、干燥,抽滤，滤饼水洗至中性后，于70左右干燥，研成粉末。,真空泵,水洗至中性,12,4.索式提取器,圆底烧瓶内的抽提剂受热挥发，蒸气经导气管向上，在冷凝管中冷却为液体，滴入装有样品滤纸筒的管中，使样品浸在纯净的抽提剂中。 待提取物质逐渐从样品中溶解到抽提剂中。当样品管中的抽提剂液面逐渐上升到与回流管（虹吸管）上端齐平时，在虹吸作用下，携带所提取的物质一同从侧面的虹吸管流入烧瓶中即完成一轮循环。,13,实验装置,14,提取过程,
4、滤饼经干燥后，置索氏提取器中以乙醚约150ml回流提取34小时，得乙醚提取液。,注意颜色的变化喔,15,初步检测,乙醚提取液经薄层检查含有大黄酸、芦荟大黄素、大黄素、大黄素甲醚和大黄酚。 检测方法：取硅胶-CMC-Na板，将上述乙醚提取液点样后，用石油醚（60-90）-醋酸乙酯（7：3）为展开剂，展开晾干，在可见光下观察，可见到4个黄色斑点，Rf值由大到小分别是大黄酚与大黄素甲醚的混合物、大黄素、芦荟大黄素、大黄酸。置氨蒸汽中熏后，斑点变为红色。,16,5.pH梯度萃取,取乙醚提取液2/3量，置250ml分液漏斗中。 1、大黄酸：用2.5% NaHCO3溶液60ml,分三次萃取，合并三次萃取液
5、，用浓盐酸调 pH2-3,抽滤，得大黄酸沉淀。,17,2 、大黄素：分离出大黄酸的乙醚层，用2.5% Na2CO3溶液60ml分三次萃取，合并三次萃取液，用浓盐酸调 pH2-3,抽滤可得大黄素沉淀。,18,3、芦荟大黄素：分离出大黄素的乙醚层，继续用2.5% Na2CO3溶液60ml分四次萃取，合并四次萃取液，用浓盐酸调 pH2-3,抽滤可得芦荟大黄素沉淀。,19,4、大黄酚和大黄素甲醚混合物:将分离出芦荟大黄素的乙醚层，用0.5% NaOH溶液60ml,分三次萃取，合并三次萃取液，用浓盐酸调 pH2-3,抽滤，得大黄酚和大黄素甲醚混合物。,20,酸化结晶,酸化后,碱液,21,6.硅胶薄层层析
6、,薄层层析是一种快速分离和定性分析少量物质的实验技术。 它是将某种吸附剂在玻璃板（或硬制塑料板等）上均匀地铺成薄层，把待分析鉴定的样品溶液点在薄层的一端，然后选择合适的溶剂作为流动相（展开剂），在密闭的层析缸内进行层析，从而达到分离鉴定的目的。 本实验中 吸附剂：硅胶CMC 展开剂：石油醚（6090）：乙酸乙酯7：3,22,薄层的制备,2g硅胶G + 20ml 0.25% CMC ，混合均匀 取20cm5cm的光滑洁净玻璃板一块，水平放置，将已调制好的硅胶G均匀地涂布于玻璃板上 取一洁净的玻璃棒，两手用拇指，食指，中指控制住玻璃棒的两端并始终保持玻璃棒与桌面平行。调整玻璃棒高度使之与玻璃板间的
7、距离约为1.0 mm,23,将玻璃棒从硅胶面上由上至下缓慢匀速拉下。重复两到三次，直到将硅胶层铺好为止（铺好的薄层可以清晰地看见玻璃板下面的手指！） 将硅胶板室温干燥30分钟后置于烘箱内，缓慢升温至105左右烘烤20分钟（使硅胶活化），然后放入干燥箱备用。,105活化,24,薄层层析,用铅笔在距硅胶板点样端约2cm处平行地划上点样标记，用毛细管点样（注意：样点的间距不能小于1cm，点的直径能够不得超过0.5cm!），自然风干 在烧杯中倒入1cm深的展开剂，将点样后的薄板斜放入其中，迅速罩好,12小时后，当展开剂前沿到达薄板34高度时，将薄板自层析缸内取出，立即用铅笔记下展开剂前沿的位置，自然风
8、干,25,注意事项,1.本实验提取方法是采用酸水解法，使药材中蒽醌苷水解得到游离蒽醌化合物，再用连续回流的方法，使游离蒽醌被氯仿提取出来，这样提取的游离蒽醌类成分较为完全，收率高。 2.酸水解后的滤饼一定要水洗至中性，为了节省时间，可将第一次抽滤得到的滤饼混悬在水中，加10%NaOH水溶液调pH值至6，抽滤后再水洗至中性。 3.pH梯度萃取法分离羟基蒽醌，是利用羟基蒽醌的酸性不同，可溶于不同 pH的碱液中，在分离时，应注意萃取的次数不宜过多，否则被分离的成分间回游混杂，最好同时用薄层对照。所用碱液的pH值分别如下：5%碳酸氢钠为8，5%碳酸钠为10-11，0.5%氢氧化钠为12以上。,26,五、思考题,1.简述大黄中5种游离羟基蒽醌化合物的酸性与结构的关系。 2. pH梯度萃取法的原理是什么？如何利用该方法分离大黄中的5种游离羟基蒽醌化合物？ 3.大黄中5种游离羟基蒽醌化合物的极性与结构的关系如何？薄层鉴别时常用何类吸附剂？Rf值顺序如何？,