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1、辽东楤木叶总皂苷抗人乳腺癌作用及其毒性研究目的：通过对辽东楹木叶总皂苷的药效学和毒理学研究, 探讨其体内外抗肿瘤作用、作用机制及其药物安全性。方法： 通过 MTT法检测总皂苷体外对人乳腺癌 MCF-7细胞增殖的影响； Hoechst 33258 染色和 Annexin V-FITC PI 双染法检测总皂苷对MCF-7细胞凋亡及对细胞形态的影响；Fluo.3AM染色法检测总皂苷对细胞内钙离子分布变化的影响；免疫印迹法检测总皂苷对activecaspase-9, active caspase-3, Bax, cleaved PARP, Pro-caspase-9,Pro-caspase-3,Bcl
2、-2,PARP, ERK1/2,P-ERK1/2,P38,P-P38,JNK, P-JNK,Grp78/Bip, PERK, ATF-6 , IRE1 , Pro-caspase-4, PERK, P-PERK, eIF2,P-eIF2 , ATF-4 and Chop 蛋白表达的影响；免疫印迹法检测P 38,JNK,ERK 抑制剂预先作用后 , 总皂苷对相应蛋白表达的影响： 建立裸鼠乳腺癌模型 , 检测总皂苷的体内抗肿瘤作用及对免疫器官的影响；Tunel 染色法检测各给药组瘤组织中细胞凋亡情况；免疫组织化学染色法检测各给药组瘤组织中active caspase一9,active caspas
3、e一 3 蛋白表达情况。在长期毒性研究中 ,Beagle 犬口服总皂苷 (50,100,200 mg/kg)12周, 停止给药后 , 继续观察 4 周。实验期间 , 记录临床毒性症状 , 死亡情况 , 行为学变化 , 体重变化 , 食物消耗量和体温变化情况。检测心电指标 , 尿液指标 , 血液学指标 , 血清生物化学指标和脏器重量变化情况。同时 , 进行眼科检查和各脏器的组织病理学检查。结果：辽东楤木叶总皂苷可明显抑制MCF-7细胞增殖和诱导细胞凋亡, 并呈现明显的剂量依赖性；辽东楤木叶总皂苷作用后,MCF-7 细胞出现明显的凋亡形态；辽东楤木叶总皂苷作用后, 细胞浆内钙离子浓度增加；辽东楤木
4、叶总皂苷可明显的上调 active caspase-9,active caspase-3, Bax, cleaved PARP,P-ERK1/2, P-P38,P-JNK, Grp78/Bip, P-PERK, P-eIF2,ATF-4 and Chop 蛋白表达和下调 Pro-caspase-9,Pro-caspase-3, Bcl-2,PARP,PERK,ATF-6 ,Pro-caspase-4,PERK 和 eIF2 蛋白表达 , 而对 IRE1蛋白表达无影响； 体内实验表明 , 辽东楤木叶总皂苷具有较强的体内抗肿瘤作用 , 对脾脏的相对重量无明显影响； Tunel 染色结果表明 , 与
5、模型组比较 , 各给药组瘤组织中 Tunel 阳性细胞数均显著增加；免疫组织化学染色结果表明 , 与模型组比较 , 各给药组瘤组织中active caspase一 9, active caspase一 3 阳性细胞数均显著增加。长期毒性研究表明 , 与模型组比较 , 给药期间 , 高剂量组动物体重和食物消耗量均显著下降。恢复期时 , 体重和食物消耗量均逐渐恢复正常； 给药和恢复期间 , 动物体温均无明显变化 ; 给药期间 , 高剂量组动物出现恶心、 呕吐、稀便等不良反应。 恢复期时 , 未发现上述不良反应；与模型组比较 , 给药和恢复期 , 在血液学、血清生物化学、尿液参数、心电参数上一些指标发生的变化并无毒理学意义； 组织病理学分析结果表明 , 各脏器和组织并未发现与药物直接相关的病理变化。结论：辽东楤木叶总皂苷具有明显的体内外抗乳腺癌作用 , 其机制与诱导细胞凋亡、激活胞内线粒体、 内质网凋亡通路和胞外丝裂原活化蛋白激酶通路有关。 Beagle 犬口服辽东楤木叶总皂苷重复给药90 天, 未见明显与给药相关的毒性病理改变 , 停药 4 周后 , 未见明显与给药相关的延迟或蓄积毒性病理改变。在 200mg/kg 剂量下 , 动物摄食量减少 , 体重降低 , 出现较明显的胃肠道反应,但停药后可恢复。未见毒性反应剂量为100mg/kg. 。