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1、凝血酶滴定法测定水蛭素活性步骤实验目的:凝血酶滴定法测定水蛭素活性含量实验仪器和试剂:电子天平 酸度计 离心机 移液器 45度试管架 三羟甲基氨基甲烷(Tris) 盐酸(Hcl) 生理盐水 蒸馏水 凝血酶 纤维蛋白原及常用玻璃仪器实验步骤:1、称取1.21g三羟甲基氨基甲烷加蒸馏水充分溶解,定溶到50ml,浓度为0.2mol/L。2、用移液器取429ul盐酸加蒸馏水充分溶解,定溶到50ml,浓度为0.1ml/L。3、从1去25ml,从2取40ml混合调PH到7.4(用1或2调),加蒸馏水定溶到100ml。4、称取样品1g放入试管加生理盐水5ml充分溶解30分钟。5、把4放入离心机离心10分钟,
2、4000转/分。6、取3(Tris缓冲液)1.6ml,稀释纤维蛋白原0.008g,浓度0.5%。7、用生理盐水配制40u/ml的凝血酶溶液。8、从5取上清液100ul。9、从6取200ul加入8充分摇匀后,吹一小气泡。10、从7每分钟取5ul加入9迅速摇匀后,匀速转动试管,观察反应,溶液上的小气泡随液面转动时视为反应的终点(记录好滴加凝血酶的次数)。11、计算公式为:其中C1=凝血酶的浓度C2=样品的浓度V1=滴加凝血酶的体积V2=取样的体积注:1、滴加次数超过5次还不凝固的,应按一定倍数稀释样品。2、为了提高滴定的准确度可梯度配用不同浓度的凝血酶溶液。3、为了提高滴定的准确度同时也可在临近凝固的下一次滴加凝血酶5u/次,改为4u/次,3u/次,2u/次,1u/次。4、如果样品是溶液,直接取样100ul检测,检测步骤和计算方法不变。5、如果样品是可溶性粉状物,加溶液溶解后,取溶液100ul检测,检测步骤和计算方法不变。2建筑业