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1、!课题3血红蛋白的提取和分离课堂对点训练-KE TANG DUI DIAN XUM LIAN题型一血红蛋白的提取与分离的原理1.利用凝胶色谱法分离蛋白质的原理是（）A.蛋白质分子与凝胶的亲和力的大小B.蛋白质相对分子质量的大小C.蛋白质所带电荷的多少D.蛋白质溶解度的大小答案B解析 凝胶色谱法是根据相对分子质量的大小来分离蛋白质的有效方法，相对分子质量小的蛋白质容易进入凝胶内部的通道， 路程长，移动的速度慢，相对分子 质量大的蛋白质不容易进入凝胶内部的通道， 路程短，移动的速度快，因此相对 分子质量不同的蛋白质得以分离。2.凝胶色谱分离法分离蛋白质时，凝胶的种类较多，但其作用的共同点是（）A.
2、改变蛋白质分子通过凝胶时的路径B.吸附一部分蛋白质，从而影响蛋白质分子的移动速度C.将酶或细胞固定在凝胶中D.与蛋白质分子进行化学反应，从而影响其移动速度答案A解析 凝胶的种类较多，但每一种凝胶内部都有孔隙。相对分子质量不同的蛋白 质通过凝胶时，相对分子质量较小的蛋白质容易进入凝胶内部的通道， 路程较长， 移动速度较慢；相对分子质量较大的蛋白质只能在凝胶外部移动，路程较短，移动速度较快，相对分子质量不同的蛋白质分子因此得以分离，A正确。3.如图能正确表示相对分子质量不同的蛋白质在凝胶中的行进过程的是）（I)CI)答案B解析 相对分子质量小的蛋白质容易进入凝胶内部的通道，路程长，移动的速度慢；相
3、对分子质量大的蛋白质不容易进入凝胶内部的通道，路程短，移动的速度快，B正确。4 .下列有关电泳的叙述，不正确的是（）A.电泳是指带电粒子在电场的作用下发生迁移的过程B.待测样品中各种分子的形状、大小及带电性质的差异等会影响其在电泳中的 迁移速度C.进行电泳时，带电粒子会向着与其所带电荷相同的电极移动D.常用的电泳方法是琼脂糖凝胶电泳、聚丙烯酰胺凝胶电泳答案C解析 电泳是指带电粒子在电场的作用下发生迁移的过程，在电场的作用下，带 电分子会向着与其所带电荷相反的电极移动， A正确，C错误；由于待分离样品 中各种分子带电性质的差异以及分子本身的大小、形状的不同，会使带电分子产 生不同的迁移速度，从而
4、实现样品中各种分子的分离，B正确；琼脂糖凝胶电泳和聚丙烯酰胺凝胶电泳是两种常见的电泳方法，D正确。5 . SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳法中加入的 SDS的作用是（）A .增大蛋白质的相对分子质量B.将蛋白质分解成单个氨基酸C.掩盖不同蛋白质分子间的电荷差别D.增加不同蛋白质分子间的电荷差别答案C解析SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳法中加入 SDS的目的是使蛋白质完全变性，解 聚成单条肽链；同时SDS所带负电荷的量大大超过了蛋白质分子原有的电荷量， 因而掩盖了不同蛋白质间的电荷差别， C正确。）（.下列有关透析的叙述，错误的是 6.A.用于透析的薄膜要具有选择透过性B.透析膜一般是用硝酸纤维素制成的C.透析
5、袋能使小分子自由进出，而将大分子保留在袋内D.透析可用于更换样品的缓冲液答案A解析 透析袋一般是用硝酸纤维素（又称玻璃纸）制成的，它没有生物活性，故不 具有选择透过性（活的生物膜才具有选择透过性），B正确，A错误；透析袋能使 小分子自由进出，而将大分子保留在袋内，C正确；透析可以去除样品中相对分 子质量较小的杂质，或用于更换样品的缓冲液，D正确。题型二 血红蛋白的提取与分离的实验过程7 .下列关于血红蛋白提取和分离实验的描述，正确的是 （）A.红细胞的洗涤：加入蒸储水，缓慢搅拌，低速短时间离心8 .血红蛋白的释放：加入生理盐水和甲苯，置于磁力搅拌器上充分搅拌C.分离血红蛋白：将搅拌好的混合液离
6、心、过滤后，用分液漏斗分离D.透析：将血红蛋白溶液装入透析袋，然后置于pH为4.0的磷酸缓冲液中透析12 h答案C解析 红细胞洗涤过程中应该用生理盐水，不能用蒸储水， A错误；血红蛋白的 释放应该加入蒸储水和甲苯，使红细胞吸水涨破，释放其中的血红蛋白，B错误； 将搅拌好的混合液通过离心、过滤后，用分液漏斗分离出血红蛋白溶液，C正确； 透析所用的磷酸缓冲液的pH为7.0, D错误。8.在血红蛋白的整个提取过程中，不断用磷酸缓冲液处理的目的是（）A .磷酸缓冲液会加速血红蛋白的提取过程B.血红蛋白是一种两性物质，需要酸进行中和C.防止血红蛋白被氧气氧化D.让血红蛋白处在稳定的pH范围内，以维持其结
7、构和功能答案D解析 在一定范围内，缓冲溶液能够抵制外界的酸和碱对溶液pH的影响，维持pH基本不变，防止血红蛋白的结构发生改变，从而有利于血红蛋白的分离。）（.凝胶色谱柱制作的程序一般是 9.橡皮塞打孔挖凹穴装玻璃管盖尼龙网盖尼龙纱将橡皮塞插入玻璃管接尼龙管、装螺旋夹柱顶插入安装了 玻璃管的橡皮塞A.一一一一一一一B.一一一一一一一C.一一一一一一一D.一一一一一一一答案B解析凝胶柱制作的一般流程是：选择玻璃管一选择合适的橡皮塞一打孔一挖凹 穴一装玻璃管一盖尼龙网一盖尼龙纱一将橡皮塞插入玻璃管一接尼龙管一装螺 旋夹一柱顶插入安装了玻璃管的橡皮塞。10.下列关于凝胶色谱柱的操作，不正确的是 ()A
8、.在色谱柱中装填凝胶的时候要尽量紧密B.凝胶用酒精充分溶胀后，配成凝胶悬浮液C .加样前，打开色谱柱下端的流出口D.在凝胶色谱制作过程中，不能发生洗脱液流干，露出凝胶颗粒的现象答案B解析 凝胶应用蒸储水充分溶胀后，配成凝胶悬浮液，B错误。11 .将处理破裂后的红细胞混合液以 2000 r/min的速度离心10 min后，离心管中的溶液分为四层，从上到下的顺序依次是 ()A.血红蛋白、甲苯层、脂质物质层、细胞破碎物沉淀层B.甲苯层、细胞破碎物沉淀层、血红蛋白、脂质物质层C.脂质物质层、血红蛋白、甲苯层、细胞破碎物沉淀层D.甲苯层、脂质物质层、血红蛋白、细胞破碎物沉淀层答案D解析 将处理破裂后的红
9、细胞混合液以 2000 r/min的速度离心10 min后，离心管 中的溶液分为四层，从上到下的顺序依次是甲苯层、脂质物质层、血红蛋白、细 胞破碎物沉淀层。12 .在装填凝胶柱时，不得有气泡存在的原因是 ().气泡会搅乱洗脱液中蛋白质的洗脱次序，降低分离效果A.B.气泡阻碍蛋白质的运动C.气泡能与蛋白质发生化学反应D.气泡会在装填凝胶的时候，使凝胶不紧密答案A解析 在装填凝胶柱时，不得有气泡存在的原因是气泡会搅乱洗脱液中蛋白质的洗脱次序，降低分离效果，A正确。13 .红细胞含有大量血红蛋白，红细胞的机能主要是由血红蛋白完成的， 血红蛋 白的主要功能是携带。或CO,我们可以选用猪、牛、羊或其他脊
10、椎动物22的血 液进行实验，来提取和分离血红蛋白，请完成下列有关问题：(1)血红蛋白提取和分离的程序可分为四步： ? 和。(2)实验前取新鲜的血液,要切记在采血容器中预先加入柠檬酸钠，取血回来，马上进行离心，收集血红蛋白溶液。加入柠檬酸钠的目的是 以上所述的过程即是样品处理，它包括?: 分离血红蛋白溶液。(3)收集的血红蛋白溶液在透析袋中透析，这就是样品的粗分离。透析的目的是-透析的原理是(4)然后通过凝胶色谱法将样品进一步纯化，最后经 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳进行纯度鉴定。样品纯化的目的是-血红蛋白有什么特点? J这一特点对进行蛋白质的分离有什么意义？ 答案(1)样品处理 粗分离 纯化 纯
11、度鉴定(2)防止血液凝固红细胞的洗涤血红蛋白的释放(3)去除相对分子质量较小的杂质 透析袋能使小分子自由进出，而大分子则 保留在袋内(4)通过凝胶色谱法将相对分子质量大的杂质蛋白除去 血红蛋白呈现这在 凝胶色谱分离时可以通过观察颜色来判断什么时候应该收集洗脱液；红色.使血红蛋白的分离过程非常直观，大大简化了实验操作程序解析(1)血红蛋白的提取和分离一般分为四步：样品处理、粗分离、纯化和纯度 鉴定0(2)采取血液时要在采血容器中预先加入柠檬酸钠以防止血液凝固。样品处理包括红细胞洗涤、血红蛋白释放、分离血红蛋白溶液。透析即是血红蛋白的粗分离，透析的目的是除去分子量较小的杂蛋白。透析的原理是透析袋能
12、使小分子自由进出，而大分子则保留在袋内。(4)样品的纯化是通过凝胶色谱法将相对分子质量大的杂质蛋白除去。血红蛋白呈红色，在凝胶色谱分离时可以通过观察颜色来判断什么时候应该收 集洗脱液，使血红蛋白的分离过程非常直观，大大简化了实验操作程序。14 .下面是凝胶色谱法分离血红蛋白时样品的加入 (图I)和洗脱(图n )示意图, 请据图回答下列问题：操作压图口(1)在加样示意图中，正确的加样顺序是 C?贴着管壁加样、0(2)用吸管加样时，应注意正确操作，分别是(3)等样品时，才加入缓冲液，待 接近色谱柱底端时，用试管收集流出液，每 mL收集一管，连续收集。答案(1)一一一(2)不要破坏凝胶面 使吸管管口
13、沿管壁环绕移动(3)完全进入凝胶层 红色的蛋白质5管口沿着管壁环吸管应贴着管壁，加样品时应严格按要求进行操作，解析.绕移动，还应注意不要破坏凝胶面。等样品完全进入到凝胶层时，才加入缓冲液 进行洗脱。待红色的蛋白质接近色谱柱底端时，用试管收集流出液，每 5 mL收 集一管，连续收集。-课后提能训练-KE HOU Tl NENG XUN LIAN1.分离不同种类的蛋白质依据的原理不包括 （）A.分子的形状和大小B.所带电荷的性质和多少、吸附性质C.对其他分子的亲和力D.蛋白质分子的组成元素答案D解析 分离不同种类的蛋白质依据的原理包括分子的形状和大小、所带电荷的性质和多少、吸附性质、对其他分子的亲
14、和力和蛋白质分子的溶解度等。 蛋白质分子的组成元素不是分离不同蛋白质的依据。2.下面说法不正确的是（）A.在一定范围内，缓冲溶液能够抵制外界的酸和碱对溶液 pH的影响，维持pH 基本不变B.缓冲溶液通常由12种缓冲剂溶解于水中配制而成C.血红蛋白由4条肽链组成D.透析袋能使大分子自由进出，而将小分子保留在袋内答案D解析 透析袋一般是用硝酸纤维素（又叫玻璃纸）制成的。透析袋能使小分子自由 进出，而将大分子保留在袋内。透析可以除去样品中相对分子质量较小的杂质， 或用于更换样品的缓冲液。3.关于电泳的说法不正确的是（）A .琼脂糖凝胶电泳和聚丙烯酰胺凝胶电泳是两种常用的电泳方法B.带电分子会向着与其
15、所带电荷相反的电极移动C.蛋白质在聚丙烯酰胺凝胶中的迁移率取决于它所带净电荷的多少聚丙烯酰胺凝胶电泳，蛋白质的电泳迁移率完全取决于分子的SDS.用D.大小答案C解析 蛋白质在聚丙烯酰胺凝胶中的迁移率取决于它所带净电荷的多少以及分子的大小等因素，SDS能与各种蛋白质形成蛋白质一SDS复合物，SDS所带负电 荷的量大大超过了蛋白质分子原有的电荷量， 因而掩盖了不同种蛋白质间的电荷 差异，使电泳迁移率完全取决于分子的大小。4.在血红蛋白的提取过程中，下列有关叙述不正确的是 （）A.要使红细胞中的血红蛋白释放出来，需蒸储水和甲苯的共同作用B.离心后的血红蛋白混合液第1层为白色薄层固体C.猪成熟红细胞中
16、缺少细胞器和细胞核，提纯时杂蛋白较少D.洗涤红细胞时，使用生理盐水可防止红细胞破裂答案B解析 血红蛋白的释放需要蒸储水和甲苯的共同作用，A正确；离心后的血红蛋白混合液第1层为无色透明的甲苯层，B错误；哺乳动物成熟红细胞中缺少细胞 器和细胞核，可获得较纯净的血红蛋白， C正确；洗涤红细胞时，洗涤的目的是 去除杂蛋白以利于后续步骤的分离纯化，加入的生理盐水，可防止细胞破裂，D正确。5.取1 mL血红蛋白溶液装入透析袋中进行透析，相关说法不正确的是（）A.透析液为300 mL 20 mmol/L的磷酸缓冲液B.透析时间至少为12 h,时间过长血红蛋白也会渗漏出去C.除去了相对分子质量较小的杂质，实现
17、了样品的粗分离D.透析也可用于更换样品的缓冲液答案B解析 透析过程除去了相对分子质量较小的杂质，实现了样品的粗分离，透析也 可用于更换样品的缓冲液，C、D正确；进行血红蛋白溶液的透析时烧杯中加入 300 mL 20 mmol/L的磷酸缓冲液，透析时间为12小时，充分让小分子杂质与血 红蛋白分离，A正确，B错误。6 .下列关于凝胶色谱柱的装填的说法，不正确的是 （）A.在装填凝胶柱时，不得有气泡产生 .在操作过程中，不能让洗脱液流干 B.C.样品洗脱结束后，及时倒掉色谱柱中的凝胶D.干的凝胶要用蒸储水充分溶胀后，才能装填 答案C解析已装填好的凝胶柱可重复多次使用，在使用过程的间隔，要用蒸储水保持
18、 凝胶湿润。7 .对在凝胶柱上加入样品和洗脱的操作，不正确的是 （） A .加样前要使柱内凝胶面上的缓冲液下降到与凝胶面平齐 B.让吸管管口沿管壁环绕移动贴壁加样至色谱柱顶端，不要破坏凝胶面 C .打开下端出口，待样品完全进入凝胶层后，直接连接缓冲液洗脱瓶开始洗脱 D.待红色的蛋白质接近色谱柱底端时，每 5 mL收集一管，连续收集流出液 答案C解析 样品完全进入凝胶层后，加入磷酸缓冲液到适当高度，再连接缓冲液洗脱 瓶开始洗脱。8 .下列各项中，一般不影响在凝胶色谱法分离蛋白质中的分离度的是（）A.层析柱高 B.层析柱的直径.样品的分布D.缓冲溶液CB答案分离度取决于柱高，为分离不同组分，凝胶柱
19、床必须有适宜的高度，解析影响不符合题意；缓冲溶液的不符合题意；样品的分布也影响分离度，ADpH不符合题意；只有层析柱的直蛋白质分子的结构与功能，因此也影响分离度，C径一般不影响分离度，B符合题意。.红细胞含有大量血红蛋白，红细胞的机能主 要是由血红蛋白完成。我们9可以选用猪、牛、羊或其他脊椎动物的血液进行实 验，提取和分离血红蛋白。下 图表示血红蛋白提取和分离的部分实验装置，请回答下列问题:叮 皿皿乙(1)血红蛋白是人和其他脊椎动物红细胞的主要组成成分，其在红细胞中的作用体现了蛋白质具有功能。我们通常选用猪、牛、羊等动物的血液进行实验,实验时加入柠檬酸钠的目的是 甲装置中，B是血红蛋白溶液，则
20、 A是;该操作目的是去除样品中 乙装置中，操作压一定，保证 C溶液的流速(K “快” “慢”或“一定” )o用乙装置分离蛋白质的方法叫 。(4)最后经SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳进行 。(5)还有同学将大肠杆菌破碎并提取得到大肠杆菌蛋白质，一同学利用琼脂糖凝胶电泳技术将得到的蛋白质进行分离， 在电泳过程中，影响蛋白质迁移速度的因素包括蛋白质分子的分子大小、 以及分子的形状等。而另一位同学则利 用乙图分离，待蛋白质接近色柱底端时，用试管连续收集流出液。先收集到的蛋 白质与后收集到的蛋白质的区别是先收集到的蛋白质 。答案(1)运输防止血液凝固(2)磷酸缓冲液分子量小的杂质一定(3)凝胶色谱法(4)纯度
21、鉴定(5)带电性质分子量大解析(1)血红蛋白具有运输氧气的功能；在分离血红蛋白的实验中，加入柠檬酸 钠的目的是防止血液凝固。(2)在血红蛋白的溶液中，加入适宜的磷酸缓冲溶液，可以除掉分子量较小的杂质；在利用凝胶色谱法分离蛋白质的时候，洗脱液的速度应当保持一定。装置乙分离蛋白质的方法是凝胶色谱法。(3).(4)最后用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳对血红蛋白进行纯度鉴定。(5)利用琼脂糖凝胶电泳进行蛋白质分离时， 蛋白质的相对分子质量、带电性质、 分子形状等因素都能影响蛋白质的移动速度； 采用凝胶色谱法进行蛋白质分离时， 结果是相对分子质量较大的蛋白质，运动路程较短，先被洗脱出来。10 .凝胶色谱法可
22、测定蛋白质的相对分子质量，现有 A、B两种蛋白质，请运用 凝胶色谱法完成下列实验，确定 A、B两种蛋白质相对分子质量的大小。(1)凝胶色谱法的原理是材料用具：玻璃管、橡皮塞、打孔器、移液管、尼龙网、螺旋夹、凝胶、缓 冲液。(3)实验步骤：凝胶色谱柱的制作：注意底塞中插入的玻璃管的上部不得超出橡皮塞的，否则难以铺实 ,还会导致液体残留，蛋白质分离不彻底。凝胶色谱柱的装填：装填时轻轻敲动色谱柱的原因是 样品的加入和洗脱： (4)预期结果及结论：答案(1)根据相对分子质量的大小分离蛋白质凹穴底面 尼龙网 使凝胶装填均匀 将A、B两种蛋白质的混合液加到 凝胶色谱柱的上端，用缓冲液进行洗脱，检测它们洗脱
23、的先后顺序(4)若A先于B洗脱出来，则A的相对分子质量大于B;若B先洗脱出来，则B 的相对分子质量大于A解析(1)凝胶色谱法是根据相对分子质量的大小分离蛋白质的有效方法。(3)制作凝胶色谱柱时，选择橡皮塞打孔，然后将橡皮塞挖出锅底状凹穴，然后插入玻璃管，注意不能超出橡皮塞凹穴底面，否则难以铺实尼龙网。装填时轻轻 敲动色谱柱，使凝胶装填均匀。用吸管取混合液沿壁环绕加样后， 再用缓冲液洗 脱。(4)相对分子质量较小的蛋白质进入凝胶内部的通道，路程较长，移动速度较慢；而相对分子质量较大的蛋白质无法进入凝胶内部的通道，只能在凝胶外部移动， 路程较短，移动速度较快。11 .电泳技术是在外电场作用下，利用
24、分子携带的净电荷不同，把待测分子中进 行分离和分析的实验技术，利用它)如琼脂糖凝胶(的混合物放在一定的介质.可分离氨基酸、多肽、蛋白质、核甘酸、核酸等物质。如图是电泳装置和电泳结 果，请据图分析回答：待测混合物（负极、（：）正极L J 工 缓冲液 琼脂糖凝胶（+）正极图2电泳进行中图I电泳前图3某氨基酸混合物电泳结果在电泳过程中,带电分子会向着与其所带电荷 的电极移动。（2）图3是把含有21个氨基酸的多肽进行水解，得到的氨基酸混合物进行电泳的结果，由图可推知该多肽由 种氨基酸构成。电泳过程中分子的迁移速率除与本身所带净电荷的多少有关外，你认为影响因素还包括 （少列出两种） 答案相反6待测分子的大小、待测分子的形状、电泳的电压、凝胶的种类、凝胶的密度（以 上各项任选两项即可）解析（1）根据电荷之间作用的基本原理，分子应朝向与其所带电荷相反的电极移 动。因为不同氨基酸大小、所带电荷均不同，故在电泳中条带也不一样，即有几 条条带就有几种氨基酸。（3）影响电泳的因素很多，除与待测分子本身所带的净电荷的多少相关外，还与 待测分子的大小、待测分子的形状、电泳的电压、凝胶的种类、凝胶的密度等有关。