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1、精品文档实验 2 食品中细菌总数的测定1 目的1.1 学习并掌握细菌的分离和活菌计数的基本方法和原理1.2 了解菌落总数测定在对被样品进行卫生学评价中的意义2 原理菌落总数是指食品经过处理， 在一定条件下培养后， 所得 1g 或 1ml 检样中所含细菌菌落总数。 菌落总数主要作为判别食品被污染程度的标志， 也可以应用这一方法观察细菌在食品中繁殖的动态，以便对被检样品进行卫生学评价时提供依据。菌落总数并不表示样品中实际存在的所有细菌总数， 菌落总数并不能区分其中细菌的种类，所以有时被称为杂菌数，需氧菌数等。3 材料3.1 食品检样3.2 培养基营养琼脂培养基，无菌生理盐水。3.3 其它无菌培养皿
2、，无菌移液管，无菌不锈钢勺。4 步骤4.1 取样、稀释和培养4.1.1 以无菌操作取检样25g （或 ml ），放于 225mL 灭菌生理盐水的灭菌玻璃瓶内（瓶内预置适量的玻璃珠）或灭菌乳钵内，经充分振要或研磨制成1:10 的均匀稀释液。固体检样在加入稀释液后，最好置灭菌均质器中以800010000r/min 的速度处理1min，制成1:10的均匀稀释液。4.1.2 用 1ml 灭菌吸管吸取1:10 稀释液 1ml ，沿管壁徐徐注入含有9ml 灭菌生理盐水的试管内，振摇试管混合均匀，制成1:100 的稀释液。4.1.3 另取 1ml 灭菌吸管，按上项操作顺序，制10 倍递增稀释液，如此每递增稀
3、释一次即换用 1 支 10ml 吸管。4.1.4 根据标准要求或对污染情况的估计，选才123个适宜稀释度，分别在制作10倍递增稀释的同时，以吸取该稀释度的吸管移取1ml 稀释液于灭菌平皿中，每个稀释度做两个平皿。4.1.5 稀释液移入平皿后，将凉至46 营养琼脂培养基注入平皿约 15ml ，并转动平皿，混合均匀。同时将营养琼脂培养基倾入加有1ml 稀释液（不含样品）的灭菌平皿内作空白对照。4.1.6 待琼脂凝固后， 翻转平板， 置 36 1 温箱内培养48 2h ，取出计算平板内菌落数目，乘以稀释倍数，即得每克（每毫升）样品所含菌落总数。4.2 菌落计数方法作平皿菌落计数时， 可用肉眼观察，
4、必要时用放大镜检查，以防遗漏。 在记下各平皿的菌落总数后，求出同稀释度的各平皿平均菌落数。 到达规定培养时间， 应立即计数。如果不能立即计数，应将平板放置于0 4 ，但不要超过24h 。4.3 菌落计数报告方法4.3.1 平皿菌落数的选择选取菌落数在30300之间的平皿作为菌落总数测定标准。每一个稀释度应采用两个平皿平均数， 其中一个平皿有较大片状菌落生长时， 则不宜采用， 而应以无片状菌落生长的平皿作为该稀释度的菌落数， 若片状菌落不到平皿的一半， 而其余一半中菌落分布又很均匀，则可以计算半个平皿后乘以 2 以代表全皿菌落数。4.3.2 稀释度的选择4.3.2.1 应选取平均菌落数在3030
5、0之间的稀释度报告（表 2-1 ）。表2-1计算菌落总数方法举例两个稀释度菌落数菌落数之比不同稀释度的平均菌落数之比（个/ml ）10 110 210 311365164201640022760295461.63775032890271602.2271004无法计数16505135130005271152706无法计数30512305004.3.2.2 若有二个稀释度均在 30300之间时，应以二者比值决定，比值W 2取平均数，比彳！2则其较小数字（表 1中例2和3）。4.3.2.3 若所有稀释度均300 ,则取最高稀释度的平均菌落数乘以稀释倍数报告之（表1中例4）。4.3.2.4 若所有稀释
6、度均30 ,则以最低稀释度的平均菌落数乘稀释倍数报告之（表 1中例 5）。4.3.2.5 若所有稀释度均无菌落生长，则应按 1乘以最低稀释倍数报告之（表 1中例6）。4.3.2.6 若所有稀释度均不在30300之间，有的300 ,有的又30 ,则应以最接近 300或30的平均菌落数乘以稀释倍数报告之（表 1中例7）。4.3.4菌落计数报告方法菌落数在1100时，按实有数字报告，如大于 100时，则报告前面两位有效数字,第三位数按四舍五入计算，为了缩短数字后面的零数，也可以 10 的指数表示。5 结果5.1 将实验测出的样品数据以报表方式报告结果。5.2 对样品菌落总数作出是否符合卫生要求的结论。6 思考题6.1 食品检验为什么要测定细菌菌落总数？6.2 食品中检出的菌落总数是否代表该食品上的所有细菌数？为什么？6.3 为什么营养琼脂培养基在使用前要保持在 46 1 的温度？7 7.1随意编辑