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1、精品资源实验观察人血涂片本实验在中学是为学习血涂片制作，了解红细胞与白细胞的形态特点。但常 因怕取血、和推片不匀、染色出现色渣及白细胞观察不清等而不作此实验。 为此 教师必须解决涂片技术及观察指导等问题。一、目的要求（一）了解本实验的准备。（二）掌握血涂片制作技术及注意事项。（三）掌握红细胞与白细胞的特征。二、材料用具采血针（三棱针或大号缝衣针）、脱脂棉球、酒精棉球、载片、显微镜、滴 管、伊红-甲基蓝染液、血细胞彩色挂图或剪贴图。三、实验步骤（一）按照生理卫生本实验指导制作涂片观察（染色后再观察）。（二）讨论本实验关键及如何指导实验。四、实验准备（一）配制伊红-甲基蓝染液实验前半年，取伊红-甲
2、基蓝粉末0.1克（旧称瑞氏染剂），放在研林内加适 量甘油研磨。量取纯甲醇60毫升，少许倒入研林内使染料溶解，已溶部分移入 棕色瓶中，未溶部分再加少许甲醇研磨，直到全部溶解为止。把装染液的棕色瓶 密封放阴暗处保存。如来不及配制，可就近向医院化验室索取。（二）配制缓冲液用缓冲液作血涂片稀释液效果更好。取磷酸二氢钾（ KH2PO4） 6.63克，磷 酸氢二钠（Na2HPO4） 2.56克，溶于蒸储水或去离子水 1, 000毫升中其pH值 是6.4的缓冲液。（三）培训小组长血涂片的关键在推片手法的掌握。必须先使小组长熟练掌握，可取兔血多推 两片，并镜检厚薄是否合适。（四）载片去污所用的载片要放肥皂水中
3、煮沸20分钟，洗涤干净后再放入肥皂水中浸泡一 天,取出用自来水冲净，再用蒸储水冲 12次，放入95%酒精中浸泡后，用银 子取出以干净的绸或涤纶擦净，放入培养皿保存备用。五、实验指导参照生理卫生本实验指导，可分消毒、取血、推片、染色，观察等 5个步骤 进行。（一）消毒应先按摩取血部位，使血流通畅后，再用酒精消毒针和取血部位。（二）取血待酒精干后，刺破皮肤，待血自然流出，勿挤。取干净载片，让血滴在离载 片一端中45毫米处，注意手指持握载片的边缘，勿触及其表面。不能使载片 接触取血部位的皮肤。必须两人密切配合，抓紧时间，一人取血，另一人迅速推 片。（三）推片这步最重要，但又不易推均匀。取一块边缘光滑
4、的载片做推片。 将其一端置 于血滴前方，向后移动到接触血滴，血液便均匀分散在推片与载片的接触处。 然 后使推片与载片呈30。40。角，向另一端平才I地推片，如图 9-17所示。注意 用力要均匀，角度始终不变，才能推成均匀的涂膜。用力太轻，涂膜过厚，无法 观察，且不能推第二次。用力太重，又会损伤血细胞。涂片推好后，迅速在空气 中摇动载片，使之自然干燥，不要用火加热。（四）染色用特种玻璃铅笔在血膜两侧画两条线，防止染液外溢。再将伊红-甲基蓝染液滴在血膜上，至染液淹没全部血膜，染半分钟。加等量蒸储水或缓冲液与染液 混合再染5分钟。最后用自来水把染液冲掉，用吸水纸吸干，待自然干燥后，即 可。涂片如有色
5、渣，可用三种方法清除：一是再加伊红-甲基蓝染液于涂片上，略加摆动，使色渣溶于甲醇中，待甲醇挥发，加蒸储水或缓冲液。二是把血片放 水槽中，保持水平，色渣即从玻片边缘溢出。三是把血片呈45倾斜,吸95%酒精徐徐滴涂片面，至流下酒精变蓝后，清水冲净晾干。涂片如有香柏油，用擦镜纸擦去仍可用酒精处理。制血涂片应注意：(1)所用的玻片必须十分干净，无油污。(2)取血部位、刺针及载片上的酒精挥发完以后才能取出。(3)判断染液是否起到了染色的作用，可在冲洗染色液前观察染液有无一层 黄色的金属光泽，如果没有，则表示染色失败。(4)如染色太浅，可按照原来步骤重染。(5)如染料有很多颗粒沉于载片表面，可将载片滴有染
6、料的一面向下，两端 置于玻棒上架空，使染料靠表面张力附着于载片表面。(五)观察用低倍镜观察血涂片，可见红细胞染成粉红色，呈中间色浅、周围色深的圆 盘状，没有细胞核。白细胞较少，难找到，多集中在涂片边缘或推片方向前缘。 比红细胞大，染成蓝紫、红紫色。主要看白细胞中较多的嗜中性粒细胞与淋巴细 胞的形态。1耆中性粒细胞 细胞质染成红紫色，核染成蓝紫色。核分为 25叶。刚成 熟的细胞仅有一叶呈“ S”状的细胞核。2 .淋巴细胞 直径大小不一，以小淋巴细胞为主，其大小与红细胞相似。细 胞核呈圆形或卵圆形，一侧有凹痕，染色质致密块状，被染成深蓝紫色。核周围 可见少数淡蓝色细胞质。3 .血小板 为不规则小体，直径约23微米。血小板周围部分为浅蓝色，中 央有细小的紫红色颗粒，且聚集成群。教师应经常观察、熟练掌握各种血细胞形状，不能仅凭染色来区分。为更好 观察白细胞，可在看了红细胞后，在涂片上加一滴醋酸使红细胞破坏， 白细胞就 清楚可见。 欢下载