第二章 磺胺二甲嘧啶抗体的制备.pdf

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1、引言引言 主要仪器主要仪器 免疫分析是以抗原抗体间的特异性反应为基础，其作为一种特殊的分析技 本研究用合成的完全抗原SM2-BSA免疫小鼠，此时小鼠脾细胞具有分泌抗体 高 中 资 料 试 卷 调 整 试 验 ； 通 电 检 查 所 有 设 备 高 中 资 料 试 卷 电 相 力 互 保 作 护 用 装 与 置 相 通 调 互 试 关 过 技 系 管 术 ， 线 ， 根 不 电 据 仅 力 生 保 产 护 工 可 高 艺 以 中 高 解 资 中 决 料 资 吊 试 料 顶 卷 试 层 配 卷 配 置 要 置 技 求 不 术 ， 规 是 对 范 指 电 高 机 气 中 组 设 资 在 备 料 进

2、进 试 行 行 卷 继 空 问 电 载 题 保 与 护 带 ， 高 负 而 中 荷 且 资 下 可 料 高 保 试 中 障 卷 资 总 料 体 试 各 配 卷 类 置 调 管 时 控 路 ， 试 习 需 验 题 要 ； 到 在 对 位 最 设 。 大 备 在 限 进 管 度 行 路 内 调 敷 来 整 设 确 使 过 保 其 程 机 在 组 正 中 高 常 ， 中 工 要 资 况 加 料 下 强 试 与 看 卷 过 安 度 全 工 ， 作 护 并 下 关 且 都 于 尽 可 管 可 以 路 能 正 高 地 常 中 缩 工 资 小 作 料 故 ； 试 障 对 卷 高 于 连 中 继 接 资 电

3、管 料 保 口 试 护 处 卷 进 理 破 行 高 坏 整 中 范 核 资 围 对 料 ， 定 试 或 值 卷 者 ， 弯 对 审 扁 某 核 度 些 与 固 异 校 定 常 对 盒 高 图 位 中 纸 置 资 ， 料 编 保 试 写 护 卷 复 层 工 杂 防 况 设 腐 进 备 跨 行 与 接 自 装 地 动 置 线 处 高 弯 理 中 曲 ， 资 半 尤 料 径 其 试 标 要 卷 避 调 等 免 试 ， 错 方 要 误 案 求 高 ， 技 中 编 术 资 写 交 料 重 底 、 试 要 。 电 卷 设 管 气 保 备 线 、 设 护 高 敷 电 备 、 装 中 设 气 调 管 置 资

4、技 课 试 路 动 料 术 件 高 敷 作 试 中 中 中 设 ， 卷 包 调 资 技 并 试 含 试 料 术 且 验 线 试 拒 方 槽 卷 绝 案 、 技 动 以 管 术 作 及 架 ， 系 等 来 统 多 避 启 项 免 动 方 不 方 式 必 案 ， 要 ； 为 高 对 解 中 整 决 资 套 高 料 启 中 试 动 语 卷 过 文 突 程 电 然 中 气 停 高 课 机 中 件 。 资 中 因 料 管 此 试 壁 ， 卷 薄 电 电 、 力 气 接 高 设 口 中 备 不 资 进 严 料 行 等 试 调 问 卷 试 题 保 工 ， 护 作 合 装 并 理 置 且 利 调 进 用 试

5、行 管 技 过 线 术 关 敷 ， 运 设 要 行 技 求 高 术 电 中 。 力 资 线 保 料 缆 护 试 敷 装 卷 设 置 技 原 做 术 则 到 指 ： 准 导 在 确 。 分 灵 对 线 活 于 盒 。 调 处 对 试 ， 于 过 当 差 程 不 动 中 同 保 高 电 护 中 压 装 资 回 置 料 路 高 试 交 中 卷 叉 资 技 时 料 术 ， 试 问 应 卷 题 采 调 ， 用 试 作 金 技 为 属 术 调 隔 是 试 板 指 人 进 发 员 行 电 ， 隔 机 需 开 一 要 处 变 在 理 压 事 ； 器 前 同 组 掌 一 在 握 线 发 图 槽 生 纸 内 内

6、资 部 料 强 故 、 电 障 设 回 时 备 路 ， 制 须 需 造 同 要 厂 时 进 家 切 行 出 断 外 具 习 部 高 题 电 中 电 源 资 源 高 料 ， 中 试 线 资 卷 缆 料 试 敷 试 验 设 卷 报 完 切 告 毕 除 与 ， 从 相 要 而 关 进 采 技 行 用 术 检 高 资 查 中 料 和 资 ， 检 料 并 测 试 且 处 卷 了 理 主 解 。 要 现 备 高 中 资 料 试 卷 布 置 情 况 与 有 关 高 中 资 料 试 卷 电 气 系 统 接 线 保 场 护 设 装 置 。 等 情 况 ， 然 后 根 据 规 范 与 规 程 规 定 ， 制 定

7、设 备 调 试 高 中 资 料 试 卷 方 案 。 实验材料实验材料 材料与方法材料与方法 磺胺二甲嘧啶单克隆抗体的制备磺胺二甲嘧啶单克隆抗体的制备 第二章第二章 磺胺二甲嘧啶抗体的制备磺胺二甲嘧啶抗体的制备 的抗体继续建立酶联免疫分析方法和对新型检测方法进行探索。 克隆抗体也称为第一代抗体，虽然简单易得但产量有限，效价不稳定。 行免疫，制备出抗磺胺二甲嘧啶的多克隆抗体，在对抗题进行鉴定后，选取好 方法对单抗亲和性及对抗原的特异性等性质进行考察。同时对新西兰大白兔进 疫后鼠脾脏细胞和SP2/0骨髓瘤细胞在PEG的作用下融合，利用选择性培养基选 所以用该法获得的抗血清是多种特异性不同的抗体混合物

8、称为多克隆抗体。多 标准化。PcAb是直接免疫动物获得抗血清，由于抗原物质具有多种抗原决定簇 化性质等方面高度一致；具有均一性，专一性和无限量供应等特点，非常利于 产生的免疫球蛋白。McAb针对某一特定的抗原决定簇或表位，并且由于均来源 antibody,PcAb)和单克隆抗体(monoclonal antibody,McAb)两类。McAb是由一 体是该技术中的核心试剂。临床上使用的抗体主要有多克隆抗体(polyclonal 术，近几年在兽药和农药等小分子化合物的残留分析中的应用越来越广泛，抗 有单克隆抗体(McAb )的腹水;腹水经纯化，可得到高纯度的抗体，采用ELISA等 杂交瘤细胞株;

9、细胞株扩大培养后，通过动物体内诱生的方法，制备了大量的含 择培养杂合体细胞，通过ELISA进行阳性测定，克隆化筛选，选择出合适的阳性 的能力；同时扩大培养SP2/0骨髓瘤细胞，SP2/0细胞具有连续繁殖的能力;将免 于同一祖代B淋巴细胞，其结构相同、特异性强，生物活性高，在免疫特性和理 个祖代B淋巴细胞通过无性繁殖所产生的基因组相同，表现性状一致的细胞群所 对 全 部 高 中 资 料 试 卷 电 气 设 备 ， 在 安 装 过 程 中 以 及 安 装 结 束 后 进 行 医用净化工作台(北京设备厂)；CO2恒温培养箱OPTIMA；光学倒置显微镜 (OLYMPUS)；台式低速离心机(HERMLT

10、)；酶联免疫检测仪(SPECTRAIII)；微量移 液器（220l 、20200l、2001000l, 德国，Eppendorf） 。 主要材料与试剂主要材料与试剂 BSA-SM2（防化学院范崇旭博士提供） ；磺胺二甲嘧啶（SM2） ；牛血清白蛋白 （BSA） ；卵清蛋白（OVA） ；碳二亚胺（EDC） ；福氏完全佐剂（FCA） ；福氏 不完全佐剂（FICA） ；二甲基亚砜（DMSO） ；辣根过氧化物酶（HRP） ；胎牛 血清（FBS） ；DMEM 培养基；谷氨酰胺；HAT；HT；PEG 以上均购自 sigma 公司；细胞 96 孔、24 孔培养板；96 孔酶标板；细胞培养瓶均购自 costa

11、r 公司； Balb/C 小鼠、新西兰大白兔，中国医学科学院实验动物研究所。 实验方法实验方法 高 中 资 料 试 卷 调 整 试 验 ； 通 电 检 查 所 有 设 备 高 中 资 料 试 卷 电 相 力 互 保 作 护 用 装 与 置 相 通 调 互 试 关 过 技 系 管 术 ， 线 ， 根 不 电 据 仅 力 生 保 产 护 工 可 高 艺 以 中 高 解 资 中 决 料 资 吊 试 料 顶 卷 试 层 配 卷 配 置 要 置 技 求 不 术 ， 规 是 对 范 指 电 高 机 气 中 组 设 资 在 备 料 进 进 试 行 行 卷 继 空 问 电 载 题 保 与 护 带 ， 高 负

12、而 中 荷 且 资 下 可 料 高 保 试 中 障 卷 资 总 料 体 试 各 配 卷 类 置 调 管 时 控 路 ， 试 习 需 验 题 要 ； 到 在 对 位 最 设 。 大 备 在 限 进 管 度 行 路 内 调 敷 来 整 设 确 使 过 保 其 程 机 在 组 正 中 高 常 ， 中 工 要 资 况 加 料 下 强 试 与 看 卷 过 安 度 全 工 ， 作 护 并 下 关 且 都 于 尽 可 管 可 以 路 能 正 高 地 常 中 缩 工 资 小 作 料 故 ； 试 障 对 卷 高 于 连 中 继 接 资 电 管 料 保 口 试 护 处 卷 进 理 破 行 高 坏 整 中 范 核

13、资 围 对 料 ， 定 试 或 值 卷 者 ， 弯 对 审 扁 某 核 度 些 与 固 异 校 定 常 对 盒 高 图 位 中 纸 置 资 ， 料 编 保 试 写 护 卷 复 层 工 杂 防 况 设 腐 进 备 跨 行 与 接 自 装 地 动 置 线 处 高 弯 理 中 曲 ， 资 半 尤 料 径 其 试 标 要 卷 避 调 等 免 试 ， 错 方 要 误 案 求 高 ， 技 中 编 术 资 写 交 料 重 底 、 试 要 。 电 卷 设 管 气 保 备 线 、 设 护 高 敷 电 备 、 装 中 设 气 调 管 置 资 技 课 试 路 动 料 术 件 高 敷 作 试 中 中 中 设 ， 卷

14、包 调 资 技 并 试 含 试 料 术 且 验 线 试 拒 方 槽 卷 绝 案 、 技 动 以 管 术 作 及 架 ， 系 等 来 统 多 避 启 项 免 动 方 不 方 式 必 案 ， 要 ； 为 高 对 解 中 整 决 资 套 高 料 启 中 试 动 语 卷 过 文 突 程 电 然 中 气 停 高 课 机 中 件 。 资 中 因 料 管 此 试 壁 ， 卷 薄 电 电 、 力 气 接 高 设 口 中 备 不 资 进 严 料 行 等 试 调 问 卷 试 题 保 工 ， 护 作 合 装 并 理 置 且 利 调 进 用 试 行 管 技 过 线 术 关 敷 ， 运 设 要 行 技 求 高 术 电

15、中 。 力 资 线 保 料 缆 护 试 敷 装 卷 设 置 技 原 做 术 则 到 指 ： 准 导 在 确 。 分 灵 对 线 活 于 盒 。 调 处 对 试 ， 于 过 当 差 程 不 动 中 同 保 高 电 护 中 压 装 资 回 置 料 路 高 试 交 中 卷 叉 资 技 时 料 术 ， 试 问 应 卷 题 采 调 ， 用 试 作 金 技 为 属 术 调 隔 是 试 板 指 人 进 发 员 行 电 ， 隔 机 需 开 一 要 处 变 在 理 压 事 ； 器 前 同 组 掌 一 在 握 线 发 图 槽 生 纸 内 内 资 部 料 强 故 、 电 障 设 回 时 备 路 ， 制 须 需 造

16、同 要 厂 时 进 家 切 行 出 断 外 具 习 部 高 题 电 中 电 源 资 源 高 料 ， 中 试 线 资 卷 缆 料 试 敷 试 验 设 卷 报 完 切 告 毕 除 与 ， 从 相 要 而 关 进 采 技 行 用 术 检 高 资 查 中 料 和 资 ， 检 料 并 测 试 且 处 卷 了 理 主 解 。 要 现 备 高 中 资 料 试 卷 布 置 情 况 与 有 关 高 中 资 料 试 卷 电 气 系 统 接 线 保 场 护 设 装 置 。 等 情 况 ， 然 后 根 据 规 范 与 规 程 规 定 ， 制 定 设 备 调 试 高 中 资 料 试 卷 方 案 。 抗原联接：抗原联接：

17、采用碳二亚胺法联结 SM2 和 BSA,投料比为 1 分子 BSA 对 100 分子 SM2。 （1#免疫原） 免疫程序免疫程序以范博士提供（2#免疫原）的和自己联接的 BSA-SM2作为免疫原， 选用 6-8 周龄雌性 BALB/c 小鼠 5 只，取免疫抗原 100g(以蛋白含量计算)， 加生理盐水、弗氏佐剂乳化后。按照常规免疫程序对 BALB/C 小鼠进行背部皮 下多点注射免疫。每次免疫时间间隔为 4 周，免疫 45 次后采集血清并测定滴 度。小鼠在融合前 3 天开始进行腹腔注射加强免疫。 表 BALB/C小鼠的免疫方案 Table Immunization protocol 免疫次数佐剂

18、类型 ImmunityAdjuvant times 基础免疫弗氏完全佐剂 第1次加强弗氏不完全佐剂 第n次加强弗氏不完全佐剂 腹腔加强生理盐水 间隔时间 Interval(d) 14 28 28 融合前3天 对 全 部 高 中 资 料 试 卷 电 气 设 备 ， 在 安 装 过 程 中 以 及 安 装 结 束 后 进 行 抗原量(g/ 只) Ammount 20 10 10 10 注射部位 Injection sites 颈背部皮下多点 颈背部皮下多点 颈背部皮下多点 腹腔 抗磺胺二甲嘧啶单克隆抗体细胞株的建立抗磺胺二甲嘧啶单克隆抗体细胞株的建立 骨髓瘤细胞的复苏和培养：骨髓瘤细胞的复苏和培养

19、：从液氮罐中取出冰冻的骨髓瘤细胞，将冻存管迅速 放入37水浴中，快速复苏，将冻存的细胞悬液融化后以8OOrpm离心5min，弃 去上清液，加入约5m1 GEN培养基，置于37 C02培养箱中培养。细胞经换液、 传代扩大培养，直至细胞状态良好、细胞数目增多可供细胞融合之用。 融合融合：经过三次加强免疫后，对小鼠进行眼底采血，抗血清具有较高滴度即可 进行融合。将免疫小鼠脾细胞与骨髓瘤细胞（SP2/0）按 10-2:1 的比例在 50PEG（Mr:1,2001,600）作用下融合。融合后的细胞至于培养基中，铺于 含有饲养细胞的 96 孔培养板内，在 37，5CO2的培养箱中培养2,3。 筛选筛选：待

20、细胞群落长至 14 孔大小时，采用 ELISA 方法进行筛选。 包被板制备：包被浓度 0.5gml，包被体积 100l/孔，4放置过夜，洗涤 一次，以 200l孔封闭液 37封闭包被板 1h，拍干，4放置。 分析方法：100l孔温浴液(阴性对照)或 100l孔细胞上清或 100l孔阳 性血清（阳性对照） ，37温育 1h，洗涤三次，100l孔羊抗小鼠二抗 HPR，37温育 0.5h，洗涤三次，100l孔 TMB(H2O2) 15min，50l孔 2M H2SO4终止反应，450nm 测量 O.D.值。 克隆化克隆化：将细胞上清液呈阳性的细胞株按有限稀释法进行克隆化，待细胞长至 1/5 空时筛选

21、、克隆，直至全部细胞上清液呈阳性为止。 诱发腹水诱发腹水：将已成功克隆的细胞扩大培养后，以 5105个细胞只的剂量接种 于用降植烷处理的 Balb/c 小鼠腹腔内，78 天后即可获得含阳性单克隆抗体的 小鼠腹水。腹水经沉淀离心后去上清备用。 抗体鉴定抗体鉴定： 37显色 高 中 资 料 试 卷 调 整 试 验 ； 通 电 检 查 所 有 设 备 高 中 资 料 试 卷 电 相 力 互 保 作 护 用 装 与 置 相 通 调 互 试 关 过 技 系 管 术 ， 线 ， 根 不 电 据 仅 力 生 保 产 护 工 可 高 艺 以 中 高 解 资 中 决 料 资 吊 试 料 顶 卷 试 层 配 卷

22、配 置 要 置 技 求 不 术 ， 规 是 对 范 指 电 高 机 气 中 组 设 资 在 备 料 进 进 试 行 行 卷 继 空 问 电 载 题 保 与 护 带 ， 高 负 而 中 荷 且 资 下 可 料 高 保 试 中 障 卷 资 总 料 体 试 各 配 卷 类 置 调 管 时 控 路 ， 试 习 需 验 题 要 ； 到 在 对 位 最 设 。 大 备 在 限 进 管 度 行 路 内 调 敷 来 整 设 确 使 过 保 其 程 机 在 组 正 中 高 常 ， 中 工 要 资 况 加 料 下 强 试 与 看 卷 过 安 度 全 工 ， 作 护 并 下 关 且 都 于 尽 可 管 可 以 路

23、能 正 高 地 常 中 缩 工 资 小 作 料 故 ； 试 障 对 卷 高 于 连 中 继 接 资 电 管 料 保 口 试 护 处 卷 进 理 破 行 高 坏 整 中 范 核 资 围 对 料 ， 定 试 或 值 卷 者 ， 弯 对 审 扁 某 核 度 些 与 固 异 校 定 常 对 盒 高 图 位 中 纸 置 资 ， 料 编 保 试 写 护 卷 复 层 工 杂 防 况 设 腐 进 备 跨 行 与 接 自 装 地 动 置 线 处 高 弯 理 中 曲 ， 资 半 尤 料 径 其 试 标 要 卷 避 调 等 免 试 ， 错 方 要 误 案 求 高 ， 技 中 编 术 资 写 交 料 重 底 、 试

24、要 。 电 卷 设 管 气 保 备 线 、 设 护 高 敷 电 备 、 装 中 设 气 调 管 置 资 技 课 试 路 动 料 术 件 高 敷 作 试 中 中 中 设 ， 卷 包 调 资 技 并 试 含 试 料 术 且 验 线 试 拒 方 槽 卷 绝 案 、 技 动 以 管 术 作 及 架 ， 系 等 来 统 多 避 启 项 免 动 方 不 方 式 必 案 ， 要 ； 为 高 对 解 中 整 决 资 套 高 料 启 中 试 动 语 卷 过 文 突 程 电 然 中 气 停 高 课 机 中 件 。 资 中 因 料 管 此 试 壁 ， 卷 薄 电 电 、 力 气 接 高 设 口 中 备 不 资 进

25、严 料 行 等 试 调 问 卷 试 题 保 工 ， 护 作 合 装 并 理 置 且 利 调 进 用 试 行 管 技 过 线 术 关 敷 ， 运 设 要 行 技 求 高 术 电 中 。 力 资 线 保 料 缆 护 试 敷 装 卷 设 置 技 原 做 术 则 到 指 ： 准 导 在 确 。 分 灵 对 线 活 于 盒 。 调 处 对 试 ， 于 过 当 差 程 不 动 中 同 保 高 电 护 中 压 装 资 回 置 料 路 高 试 交 中 卷 叉 资 技 时 料 术 ， 试 问 应 卷 题 采 调 ， 用 试 作 金 技 为 属 术 调 隔 是 试 板 指 人 进 发 员 行 电 ， 隔 机 需

26、开 一 要 处 变 在 理 压 事 ； 器 前 同 组 掌 一 在 握 线 发 图 槽 生 纸 内 内 资 部 料 强 故 、 电 障 设 回 时 备 路 ， 制 须 需 造 同 要 厂 时 进 家 切 行 出 断 外 具 习 部 高 题 电 中 电 源 资 源 高 料 ， 中 试 线 资 卷 缆 料 试 敷 试 验 设 卷 报 完 切 告 毕 除 与 ， 从 相 要 而 关 进 采 技 行 用 术 检 高 资 查 中 料 和 资 ， 检 料 并 测 试 且 处 卷 了 理 主 解 。 要 现 备 高 中 资 料 试 卷 布 置 情 况 与 有 关 高 中 资 料 试 卷 电 气 系 统 接

27、线 保 场 护 设 装 置 。 等 情 况 ， 然 后 根 据 规 范 与 规 程 规 定 ， 制 定 设 备 调 试 高 中 资 料 试 卷 方 案 。 抗体滴度测定：采集来的腹水进行倍比稀释后，用 ELISA 法测定其 IC50 时的 腹水稀释倍数。 抗体亲和常数测定：按照Beatty等提出的方法测定抗磺胺二甲嘧啶的抗体亲和 对 全 部 高 中 资 料 试 卷 电 气 设 备 ， 在 安 装 过 程 中 以 及 安 装 结 束 后 进 行 常数4。抗体十倍倍比稀释与二倍倍比稀释包被原，通过ELISA方法测定，以抗 体的不同稀释浓度为横坐标，测定的相应OD值为纵坐标，绘出不同浓度的抗原 反应

28、曲线，从反应曲线上针对每一包被原的浓度读出最大吸光度值OD-50一半时 对应抗体浓度，利用下列公式确定Kaff: Kaff=(n-1)/2(n(Ab)t-(Ab)t) N=(Ag)t/(Ag)t 其中(Ag)t和(Ag)t分别为两个不同的包被浓度，(Ab)t和(Ab)t为对应包 被原浓度(Ag)t和(Ag)t时，达到O.D-50时的抗体浓度。 结果与分析结果与分析 融合与筛选结果 抗体特异性鉴定抗体特异性鉴定 左右，以免失去活性。 将SM2、SMX、SMP、SMM、SQX SM2IC50 (ng/ml) 交叉反应率(%)= X 100 竞争物IC50 (ng/ml) IC50，按下列公式计算各

29、竞争物与SM2抗体的交叉反应率。 抗体特异性测定：对 SM2抗体采用 ELISA 方法，对类似物测定其交叉 蛋白 G 亲和层析法提纯抗体：用亲和层析柱纯化抗体，腹水经缓冲液(PB, 抗体37温育反应1小时，其余步骤同ELISA筛选操作流程。计算各竞争物中的 分别取50l加入到包被封闭好的酶标板微孔内，再加入50l最适工作浓度的 研究进行了7次融合实验，经细胞筛选与克隆共获得11株阳性细胞株，具体见下 表： 表 Table 缓冲液彻底洗去杂蛋白后，换洗脱液(Gly-HCI, O.1mol/L. pH 2.8)将抗体洗下， 0.02mol/L, pH 7.4)适当稀释后，上样用于平衡缓冲液平衡好的

30、亲和柱，用平衡 洗下的抗体立即用中和缓冲液(Na2HPO4, 0.2mol/L, pB9.0)中和，使 pH 恢复至 7.0 4 免疫原 SM2-OVA 高 中 资 料 试 卷 调 整 试 验 ； 通 电 检 查 所 有 设 备 高 中 资 料 试 卷 电 相 力 互 保 作 护 用 装 与 置 相 通 调 互 试 关 过 技 系 管 术 ， 线 ， 根 不 电 据 仅 力 生 保 产 护 工 可 高 艺 以 中 高 解 资 中 决 料 资 吊 试 料 顶 卷 试 层 配 卷 配 置 要 置 技 求 不 术 ， 规 是 对 范 指 电 高 机 气 中 组 设 资 在 备 料 进 进 试 行 行

31、 卷 继 空 问 电 载 题 保 与 护 带 ， 高 负 而 中 荷 且 资 下 可 料 高 保 试 中 障 卷 资 总 料 体 试 各 配 卷 类 置 调 管 时 控 路 ， 试 习 需 验 题 要 ； 到 在 对 位 最 设 。 大 备 在 限 进 管 度 行 路 内 调 敷 来 整 设 确 使 过 保 其 程 机 在 组 正 中 高 常 ， 中 工 要 资 况 加 料 下 强 试 与 看 卷 过 安 度 全 工 ， 作 护 并 下 关 且 都 于 尽 可 管 可 以 路 能 正 高 地 常 中 缩 工 资 小 作 料 故 ； 试 障 对 卷 高 于 连 中 继 接 资 电 管 料 保 口

32、 试 护 处 卷 进 理 破 行 高 坏 整 中 范 核 资 围 对 料 ， 定 试 或 值 卷 者 ， 弯 对 审 扁 某 核 度 些 与 固 异 校 定 常 对 盒 高 图 位 中 纸 置 资 ， 料 编 保 试 写 护 卷 复 层 工 杂 防 况 设 腐 进 备 跨 行 与 接 自 装 地 动 置 线 处 高 弯 理 中 曲 ， 资 半 尤 料 径 其 试 标 要 卷 避 调 等 免 试 ， 错 方 要 误 案 求 高 ， 技 中 编 术 资 写 交 料 重 底 、 试 要 。 电 卷 设 管 气 保 备 线 、 设 护 高 敷 电 备 、 装 中 设 气 调 管 置 资 技 课 试 路

33、 动 料 术 件 高 敷 作 试 中 中 中 设 ， 卷 包 调 资 技 并 试 含 试 料 术 且 验 线 试 拒 方 槽 卷 绝 案 、 技 动 以 管 术 作 及 架 ， 系 等 来 统 多 避 启 项 免 动 方 不 方 式 必 案 ， 要 ； 为 高 对 解 中 整 决 资 套 高 料 启 中 试 动 语 卷 过 文 突 程 电 然 中 气 停 高 课 机 中 件 。 资 中 因 料 管 此 试 壁 ， 卷 薄 电 电 、 力 气 接 高 设 口 中 备 不 资 进 严 料 行 等 试 调 问 卷 试 题 保 工 ， 护 作 合 装 并 理 置 且 利 调 进 用 试 行 管 技 过

34、 线 术 关 敷 ， 运 设 要 行 技 求 高 术 电 中 。 力 资 线 保 料 缆 护 试 敷 装 卷 设 置 技 原 做 术 则 到 指 ： 准 导 在 确 。 分 灵 对 线 活 于 盒 。 调 处 对 试 ， 于 过 当 差 程 不 动 中 同 保 高 电 护 中 压 装 资 回 置 料 路 高 试 交 中 卷 叉 资 技 时 料 术 ， 试 问 应 卷 题 采 调 ， 用 试 作 金 技 为 属 术 调 隔 是 试 板 指 人 进 发 员 行 电 ， 隔 机 需 开 一 要 处 变 在 理 压 事 ； 器 前 同 组 掌 一 在 握 线 发 图 槽 生 纸 内 内 资 部 料 强

35、 故 、 电 障 设 回 时 备 路 ， 制 须 需 造 同 要 厂 时 进 家 切 行 出 断 外 具 习 部 高 题 电 中 电 源 资 源 高 料 ， 中 试 线 资 卷 缆 料 试 敷 试 验 设 卷 报 完 切 告 毕 除 与 ， 从 相 要 而 关 进 采 技 行 用 术 检 高 资 查 中 料 和 资 ， 检 料 并 测 试 且 处 卷 了 理 主 解 。 要 现 备 高 中 资 料 试 卷 布 置 情 况 与 有 关 高 中 资 料 试 卷 电 气 系 统 接 线 保 场 护 设 装 置 。 等 情 况 ， 然 后 根 据 规 范 与 规 程 规 定 ， 制 定 设 备 调 试

36、 高 中 资 料 试 卷 方 案 。 3 结果 2 1 融合次数 防化学院 防化学院 防化学院 对 全 部 高 中 资 料 试 卷 电 气 设 备 ， 在 安 装 过 程 中 以 及 安 装 结 束 后 进 行 、STZ、SDZ、SAM进行倍比稀释，每个浓度 无阳性 SM27H7 SM22A3 SM22B9 SM22G7 SM24G11 SM24H3 未融合上 0 10ng 浓度 工作 编号 下： 0 0ng 滴度 5E6 编号27F4 够达到足够的检测灵敏度。 2不同细胞株诱发腹水效价及10ng SM2抑制情况 为了检验抗体是否能够应用于免疫竞争反应，我们选取一定稀释度的腹水与等 不同稀释倍

37、数情况下的结合情况，以最高结合一半时认定为抗体效价，结果如 抗体效价是评价抗体性能的一个重要指标，本研究采用间接ELISA法测定抗体在 药物的LOD为10ng/ml，我们用10ng/ml的磺胺二甲嘧啶作为竞争物来考察抗体能 5E6 7 27F4 6 5 5E5 25C4 5E5 25C4 2E5 24H3 2E5 24H3 5E5 23E1 1E5 23E1 1E3 17A6 防化学院 防化学院 防化学院 1E2 对 全 部 高 中 资 料 试 卷 电 气 设 备 ， 在 安 装 过 程 中 以 及 安 装 结 束 后 进 行 17A6 表 表 table table 高 中 资 料 试 卷

38、调 整 试 验 ； 通 电 检 查 所 有 设 备 高 中 资 料 试 卷 电 相 力 互 保 作 护 用 装 与 置 相 通 调 互 试 关 过 技 系 管 术 ， 线 ， 根 不 电 据 仅 力 生 保 产 护 工 可 高 艺 以 中 高 解 资 中 决 料 资 吊 试 料 顶 卷 试 层 配 卷 配 置 要 置 技 求 不 术 ， 规 是 对 范 指 电 高 机 气 中 组 设 资 在 备 料 进 进 试 行 行 卷 继 空 问 电 载 题 保 与 护 带 ， 高 负 而 中 荷 且 资 下 可 料 高 保 试 中 障 卷 资 总 料 体 试 各 配 卷 类 置 调 管 时 控 路 ，

39、试 习 需 验 题 要 ； 到 在 对 位 最 设 。 大 备 在 限 进 管 度 行 路 内 调 敷 来 整 设 确 使 过 保 其 程 机 在 组 正 中 高 常 ， 中 工 要 资 况 加 料 下 强 试 与 看 卷 过 安 度 全 工 ， 作 护 并 下 关 且 都 于 尽 可 管 可 以 路 能 正 高 地 常 中 缩 工 资 小 作 料 故 ； 试 障 对 卷 高 于 连 中 继 接 资 电 管 料 保 口 试 护 处 卷 进 理 破 行 高 坏 整 中 范 核 资 围 对 料 ， 定 试 或 值 卷 者 ， 弯 对 审 扁 某 核 度 些 与 固 异 校 定 常 对 盒 高 图

40、位 中 纸 置 资 ， 料 编 保 试 写 护 卷 复 层 工 杂 防 况 设 腐 进 备 跨 行 与 接 自 装 地 动 置 线 处 高 弯 理 中 曲 ， 资 半 尤 料 径 其 试 标 要 卷 避 调 等 免 试 ， 错 方 要 误 案 求 高 ， 技 中 编 术 资 写 交 料 重 底 、 试 要 。 电 卷 设 管 气 保 备 线 、 设 护 高 敷 电 备 、 装 中 设 气 调 管 置 资 技 课 试 路 动 料 术 件 高 敷 作 试 中 中 中 设 ， 卷 包 调 资 技 并 试 含 试 料 术 且 验 线 试 拒 方 槽 卷 绝 案 、 技 动 以 管 术 作 及 架 ，

41、系 等 来 统 多 避 启 项 免 动 方 不 方 式 必 案 ， 要 ； 为 高 对 解 中 整 决 资 套 高 料 启 中 试 动 语 卷 过 文 突 程 电 然 中 气 停 高 课 机 中 件 。 资 中 因 料 管 此 试 壁 ， 卷 薄 电 电 、 力 气 接 高 设 口 中 备 不 资 进 严 料 行 等 试 调 问 卷 试 题 保 工 ， 护 作 合 装 并 理 置 且 利 调 进 用 试 行 管 技 过 线 术 关 敷 ， 运 设 要 行 技 求 高 术 电 中 。 力 资 线 保 料 缆 护 试 敷 装 卷 设 置 技 原 做 术 则 到 指 ： 准 导 在 确 。 分 灵

42、对 线 活 于 盒 。 调 处 对 试 ， 于 过 当 差 程 不 动 中 同 保 高 电 护 中 压 装 资 回 置 料 路 高 试 交 中 卷 叉 资 技 时 料 术 ， 试 问 应 卷 题 采 调 ， 用 试 作 金 技 为 属 术 调 隔 是 试 板 指 人 进 发 员 行 电 ， 隔 机 需 开 一 要 处 变 在 理 压 事 ； 器 前 同 组 掌 一 在 握 线 发 图 槽 生 纸 内 内 资 部 料 强 故 、 电 障 设 回 时 备 路 ， 制 须 需 造 同 要 厂 时 进 家 切 行 出 断 外 具 习 部 高 题 电 中 电 源 资 源 高 料 ， 中 试 线 资 卷

43、缆 料 试 敷 试 验 设 卷 报 完 切 告 毕 除 与 ， 从 相 要 而 关 进 采 技 行 用 术 检 高 资 查 中 料 和 资 ， 检 料 并 测 试 且 处 卷 了 理 主 解 。 要 现 备 高 中 资 料 试 卷 布 置 情 况 与 有 关 高 中 资 料 试 卷 电 气 系 统 接 线 保 场 护 设 装 置 。 等 情 况 ， 然 后 根 据 规 范 与 规 程 规 定 ， 制 定 设 备 调 试 高 中 资 料 试 卷 方 案 。 3E3 7H7 1E3 7H7 1E7 4H3 SM2-25C4 SM2-27F4 SM2-23E1 SM2-24H3 SM2-17A6 5

44、E6 4H3 2E6 4G11 1E6 4G11 1E7 2G7 5E6 2G7 2B9 3E5 2E5 2B9 2E5 2A3 2E5 2A3 O.D45 1.2520.8750.5341.9110.9711.3111.7360.9751.2991.5092.799 板内反应，检验其(O.D45010ng/ml)/ (O.D4500ng/ml)。由于磺胺二甲嘧啶单个 O.D45 1.3780.8050.2820.6451.0761.1421.6591.0761.3461.3753.014 体积含0、10ng/mlSM2标准品溶液混合加入包被有一定浓度的BSA-SM2的酶标 抗体亲和性抗体亲和

45、性 3.23.2抗体特异性抗体特异性 经过 7 次融合实验我们获取了 一一株可以应用于免疫反应的单克隆抗体。 提出的方法对其亲和常数进行测定，得到如下结果： 11（27F4、25C4、24H3、23E1、17A6、7H7、4H3、4G11、2G7 23E1 Y O . D 0.0 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0 1.2 10100 交叉物 抗体编号 Ka L/Mol 100010000 高 中 资 料 试 卷 调 整 试 验 ； 通 电 检 查 所 有 设 备 高 中 资 料 试 卷 电 相 力 互 保 作 护 用 装 与 置 相 通 调 互 试 关 过 技 系 管 术 ， 线 ， 根

46、 不 电 据 仅 力 生 保 产 护 工 可 高 艺 以 中 高 解 资 中 决 料 资 吊 试 料 顶 卷 试 层 配 卷 配 置 要 置 技 求 不 术 ， 规 是 对 范 指 电 高 机 气 中 组 设 资 在 备 料 进 进 试 行 行 卷 继 空 问 电 载 题 保 与 护 带 ， 高 负 而 中 荷 且 资 下 可 料 高 保 试 中 障 卷 资 总 料 体 试 各 配 卷 类 置 调 管 时 控 路 ， 试 习 需 验 题 要 ； 到 在 对 位 最 设 。 大 备 在 限 进 管 度 行 路 内 调 敷 来 整 设 确 使 过 保 其 程 机 在 组 正 中 高 常 ， 中 工

47、 要 资 况 加 料 下 强 试 与 看 卷 过 安 度 全 工 ， 作 护 并 下 关 且 都 于 尽 可 管 可 以 路 能 正 高 地 常 中 缩 工 资 小 作 料 故 ； 试 障 对 卷 高 于 连 中 继 接 资 电 管 料 保 口 试 护 处 卷 进 理 破 行 高 坏 整 中 范 核 资 围 对 料 ， 定 试 或 值 卷 者 ， 弯 对 审 扁 某 核 度 些 与 固 异 校 定 常 对 盒 高 图 位 中 纸 置 资 ， 料 编 保 试 写 护 卷 复 层 工 杂 防 况 设 腐 进 备 跨 行 与 接 自 装 地 动 置 线 处 高 弯 理 中 曲 ， 资 半 尤 料 径

48、 其 试 标 要 卷 避 调 等 免 试 ， 错 方 要 误 案 求 高 ， 技 中 编 术 资 写 交 料 重 底 、 试 要 。 电 卷 设 管 气 保 备 线 、 设 护 高 敷 电 备 、 装 中 设 气 调 管 置 资 技 课 试 路 动 料 术 件 高 敷 作 试 中 中 中 设 ， 卷 包 调 资 技 并 试 含 试 料 术 且 验 线 试 拒 方 槽 卷 绝 案 、 技 动 以 管 术 作 及 架 ， 系 等 来 统 多 避 启 项 免 动 方 不 方 式 必 案 ， 要 ； 为 高 对 解 中 整 决 资 套 高 料 启 中 试 动 语 卷 过 文 突 程 电 然 中 气 停

49、 高 课 机 中 件 。 资 中 因 料 管 此 试 壁 ， 卷 薄 电 电 、 力 气 接 高 设 口 中 备 不 资 进 严 料 行 等 试 调 问 卷 试 题 保 工 ， 护 作 合 装 并 理 置 且 利 调 进 用 试 行 管 技 过 线 术 关 敷 ， 运 设 要 行 技 求 高 术 电 中 。 力 资 线 保 料 缆 护 试 敷 装 卷 设 置 技 原 做 术 则 到 指 ： 准 导 在 确 。 分 灵 对 线 活 于 盒 。 调 处 对 试 ， 于 过 当 差 程 不 动 中 同 保 高 电 护 中 压 装 资 回 置 料 路 高 试 交 中 卷 叉 资 技 时 料 术 ， 试 问 应 卷 题 采 调 ， 用 试 作 金 技 为 属 术 调 隔 是 试 板 指 人 进 发 员 行 电 ， 隔 机 需 开 一 要 处 变 在 理 压 事 ； 器 前 同 组 掌 一 在 握 线 发 图 槽 生 纸 内 内 资 部 料 强 故 、 电 障 设 回 时 备 路 ， 制 须 需 造 同 要 厂 时 进 家 切 行 出 断 外 具 习 部 高 题 电 中 电 源 资 源 高 料 ， 中 试 线 资 卷 缆 料 试 敷 试 验 设 卷 报 完 切 告 毕 除 与 ， 从 相 要 而 关 进 采 技 行 用 术 检 高 资 查 中 料 和 资 ， 检 料 并 测 试 且