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1、2007级生物工程专业生化技术（课程代码：090900411）课程试卷（A卷）参考答案及评分标准一、填空题（每空1分，共20分）1、蛋白质盐析时，带入大量盐离子杂质，可采用透析、凝胶层析和膜分离方法脱盐。2、根据过滤介质的不同过滤主要包括 膜过滤和 非膜过滤两类。3、双水相萃取的效果是由组分在双水相体系中 分配系数决定的。4、吸附层析洗脱方法有 溶剂洗脱法、 置换洗脱法和 前缘洗脱法三种。5、不连续凝胶电泳具有电荷效应 、浓缩效应和分子筛效应等三种效应。6、华勃氏呼吸仪检压法主要用于氧气的吸收量的检测和二氧化碳放出量的检测。7、生物检测的范围主要包括 安全试验 和 生物效价测定 。8、放射性同
2、位素危害人体的途径有 内照射 和 外照射 两种。9、根据固定相的不同气相层析分为 气液层析 和 气固层析 两种。二、选择题（每题1分，共20分） 1、采用酶法破碎革兰氏阳性菌宜选用 A 。 A、溶菌酶 B、-葡聚糖酶 C、几丁质酶 2、截留的主要物质是生物小分子、盐、离子的过滤属于 D 。 A、粗滤 B、 微滤 C、 超滤 D、 反渗透 3、胰蛋白酶可采用 A 提取。 A、酸溶液 B、盐溶液 C、 碱溶液 D、 有机溶剂 4、实验室和生产中使用的各种真空抽滤机过滤属于 C 。A、 常压过滤 B、 加压过滤 C、 减压过滤5、超临界CO2适合萃取 D 物质。 A、 酸性 B、 碱性 C、极性 D
3、、非极性6、在反胶束萃取系统中，水中的离子强度对极性物质萃取是 A 的。 A、有利 B、不利 C、没有影响7、有关凝胶层析的说法错误的是D。A、凝胶层析也称为排阻层次B、凝胶是一类具有三位多空网状的结构C、凝胶的网孔大小与交联度有关D、分子量大的组分移动较慢，后出峰 8、将抗体固定在层析柱的载体上，使抗原从流经此柱的蛋白质样品中分离出来，这技术属于 D 。 A、吸附层析 B、离子交换层析 C、分配层析 D、亲和层析 E、凝胶过滤、9、可用于等点聚焦电泳的两性电解质是 C 。 A、Acr B、Bis C、Ampholine D、SDS10、G-M管最适宜作 B 的探测。 A -粒子 B -粒子
4、C -射线11、LD50越大，表明药物的毒性 B 。 A 越大 B 越小 12、突变试验是属于 C 。 A、 急性毒性试验、 B、 长期毒性实验 C、 特殊毒性试验13、SDS是一种 A 去污剂。 A、 阴离子 B、 阳离子 C、 非离子 14、在凝胶层析中，若被分离物质能全部进入凝胶网孔内，则洗脱体积为 C 。 A、Vo+VgB、Vo+VtC、Vo+ViD、Vo+Ve 15、不连续PAGE电泳浓缩胶中称为快离子的是A。 A、氯离子 B、甘氨酸 C、蛋白质 D、Tris 16、在提纯-淀粉酶时，常采用 D 。 A 盐析沉淀法 B 有机溶剂沉淀法 C 复合沉淀法 D 选择性变性沉淀法17、有关S
5、ephadex的叙述错误的是 D 。 A、具有三维空间网状结构 B、 G后面的数字表示每克干凝胶吸水量10C、网孔的大小取决于交联度D、数字越大交联度越小，分离分子量大的物质18、分离含有二硫键的肽段可以用 B 。 A SDS-PAGE B 对角线电流 C 琼脂糖电泳19、制备聚丙烯酰胺凝胶常用催化系统是 B 。 A、Bis-TEMED B、过硫酸铵-TEMEDC、过硫酸铵 D、TEMED E、Bis-过硫酸铵20、有关DNA的转移电泳分析为D。 A、Southern blot B、Northern blotC、Western blot D、Eastern blot 三、名词解释（每题2分，共
6、20分）1、分段盐析在不同盐浓度下，对不同组分进行沉淀析出的技术。（2分）2、双水相萃取是利用组分在两个互不相溶的水相中的溶解度不同而达到分离的萃取技术。(2分)3、反渗透是借助于反渗透膜将不同大小的分子或离子分分离的技术。（2分） 4、外水体积层析床中基质颗粒之间体积的总和。（2分）5、流动相在层析过程中推动固定相上的物质向一定方向移动的液体或气体称为流动相。在柱层析时，流动相又称洗脱剂或洗涤剂，在薄层层析时流动相又称展层剂。（2分）6、等电点聚焦电泳在电泳系统中，加进两性电解质载体。当通以直流电时，两性电解质载体即形成一个由阳极到阴极连续增高的pH梯度。当蛋白质等两性电解质进入这个体系时，
7、会移动到与其等电点相当的pH位置上，从而使不同等电点的蛋白质等两性电解质得以分离。这种电泳技术称为等电点聚焦电泳。（2分）7、气体检测技术利用物质在生化反应中放出或吸收气体的性质,通过测量气体的量的变化而对物质进行定性定量分析的技术。（2分）8、半致死剂量（LD50）是指被实验动物中，死亡率为50%时的药物剂量。（2分）9、放射自显影技术利用样品中放射性物质放出的射线，作用于核子乳胶片上显影，从而探测放射性物质的位置和分布情况。这种技术称为放射性自显影技术。（2分）10、电渗在电场中，液体对于固体支持物的相对移动称为电渗。（2分）四、判断题（对的打，错的打。每题1分，共5分）1、抽提两性电解质
8、时应避开其等电点。（）2、酸性物质易溶于酸性溶剂中，碱性物质易溶于碱性溶液中。（）3、所有的微滤都属于粗滤（）4、温度升高不利于反胶束萃取。（）5、凝胶层析与凝胶电泳分离物质的原理是一样的（）五、简答题（每题5分，共15分）1、简述影响抽提的因素A 溶解度（1分）B 扩散速度（1分） C 温度（1分） D p H值（1分） E 提取液的体积（1分）2、简述超临界萃取的原理。超临界萃取的原理如下; 超临界萃取又称超临界流体萃取，是利用欲分离物质与杂质在超临界流体中的溶解度不同而达到分离的一种萃取技术。（1分）超临界流体具有和液体同样大的溶解能力，而又具有气体易扩散的特性，在超临界流体中不同的物质
9、有不同的溶解度，溶解度大的物质溶解在超临界液体中，与不溶解或溶解度小的物质分开。（2分）然后升高温度或降低压力，使超临界流体变为气态，使目的物与超临界流体分离而得到所需的物质。（2分）3、简述亲和层析的原理。亲和层析的原理如下： 是利用生物分子与配基之间具有的专一而又可逆的亲和力，使酶等生物分子分离纯化的技术。(2分) 欲分离的大分子物质S和相对应的专一物质L（配体）以次级结合，能生成一种可解离的络合物L-S，其中L又能与活化的基质M以共价键首先结合，而形成M-L-S复合物。根据L-S之间能可逆地结合与解离的原理发展起来的层析方法。（3分）六、问答题（每题10分，共20分）1、 当含有下列性质
10、的蛋白质混合物：（1） 甲蛋白质Mr为12000 pI =10 （2） 乙蛋白质Mr为62000 pI =4（3） 丙蛋白质Mr为28000 pI =7 （4） 丁蛋白质Mr为9000 pI =5若不考虑其他因素，问 A .当它们流经DEAE阴离子交换树脂时，用线性盐浓度洗脱时，这些蛋白质被洗脱的顺序如何？为什么？ B当它们流经SephadexG50凝胶层析柱时，这些蛋白质被洗脱的顺序如何？为什么？答：A当它们流经DEAE阴离子交换树脂时这些蛋白质洗脱的先后顺序是甲蛋白质、丙蛋白质、丁蛋白质、乙蛋白质。（2分）阴离子交换剂对带负电荷的阴离子有较强的吸附作用，而对带正电荷的阳离子吸附力较弱。对上
11、述的四种蛋白质的PI值不同，则在同一PH条件下，它们带电荷的性质和带电荷的数量不同，这样它们与阴离子的吸附作用有差别，洗脱时，从DEAE阴离子交换树脂色谱柱洗出的顺序应有先后之别。洗脱顺序是根据PH=PHPI大小来判断的。PH越大说明该蛋白质所带的负电荷越多，DEAE阴离子交换树脂对它吸附力越大，则洗脱所需的时间越长，洗下的顺序越靠后。上述四种蛋白质PH的大小顺序是乙蛋白质丁蛋白质丙蛋白质甲蛋白质，则洗脱的顺序是甲蛋白质、丙蛋白质、丁蛋白质、乙蛋白质。（3分）B 当它们流经SephadexG50凝胶层析柱时，这些蛋白质被洗脱的先后顺序是乙蛋白质、甲蛋白质、丙蛋白质、丁蛋白质。（2分）凝胶层析是
12、根据物质分子量的大小分离各组分的，大分子物质由于不能进入凝胶颗粒内，经过的路程短，洗脱所要的时间也短，小分子能够进入凝胶内，经过的路程长，洗脱所需的时间也长，大分子物质先被洗脱下来，小分子物质后被洗脱下来。所以上述四种蛋白质洗脱的先后顺序是乙蛋白质、甲蛋白质、丙蛋白质、丁蛋白质。（3分）2、试论述SDS-PAGE测定蛋白质相对分子量的原理。 答：带电粒子在电场中移动的现象称为电泳。蛋白质在凝胶电泳时 ，其迁移率主要取决于它所带的电荷以及分子的大小和形状，（4分）而在凝胶是加入SDS，则蛋白质分子的电泳迁移率主要取决于其相对分子质量，而与它的形状及所带的电荷无关。（4分）在一定条件下蛋白质相对分子量与其电泳迁移率的关系可用公式lgM=C-bm （M为分子量、m为迁移率、C、b为常数）通过已知相对分子量的蛋白质来求出末知蛋白质的分子量。（2分）共 4 页第 4 页