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1、试剂和溶液：除另有规定外，使用分析纯试剂，水为GB/T6682推荐使用的一级水甲醇：色谱纯无水乙醇石油醚：沸程30-60无水乙醚无水硫酸钠氢氧化钾60%氢氧化钾溶液：60克氢氧化钾，加水40ML 混合溶解胆固醇：纯度99%标准贮备液：胆固醇标准品0.05g(精确至0.1mg)，用无水乙醇溶解定容至50mL，溶解每毫升相当于1mg胆固醇，放置4密封可贮藏半年标准工作溶液：分别吸取标准贮备液1.0ml、2.0ml、3.0ml、5.0ml，用无水乙醇定容至10ml，配置相当于0.1mg/ml、0.2mg/ml、0.3mg/ml、0.5mg/ml浓度标准溶液仪器和设备：高效液相色谱仪，具有紫外检测器或
2、相当的检测器分析天平，感量0.1mg色谱柱，C18反相色谱柱（4.6mm*150mm,5um）分析步骤1. 样品处理1.1皂化称取粉碎均匀的样品0.25-10g（胆固醇含量约为0.5mg-5mg,精确至0.1mg)，于250ml平底烧瓶中，加入30ml无水乙醇，10ml60%氢氧化钾溶液（4.7），混匀，将试样在100磁力搅拌加热套皂化回流1h，不时震荡防止试样粘附在瓶壁上，皂化结束，用5毫升无水乙醇（4.2）自冷凝管顶端冲洗其内部，取下圆底烧瓶，冷却至室温1.2提取定量转移全部皂化液于250ml分液漏斗中，用30ml水分2-3次冲洗圆底烧瓶，洗液并入分液漏斗，再用40ml石油醚和乙醚混合液(
3、1+1,体积比）分2-3次冲洗平底烧瓶并入分液漏斗，振摇2min，静置，分层，转移水相于第二个分液漏斗，再用30ml石油醚和乙醚混合液（1+1，体积比）重复提取两次，弃去水相，合并三次有机相，用蒸馏水每次100ml，洗涤提取液至中性，初次水洗时轻轻振摇，防止乳化，提取液通过约10g无水硫酸钠（4.5）脱水，转移到150ml平底烧瓶中1.3浓缩将上述平底烧瓶中的提取液在真空条件下蒸发至近干，用无水乙醇溶解定容至5ml，溶液通过0.45um过滤膜过滤，收集清液于进样瓶中，待色谱仪测定2. 测定2.1色谱参考条件色谱柱：C18反相色谱住柱温：38流动相：甲醇流速：1ml/min测定波长：205nm进
4、样量：10ul标准曲线检测分别取10ul标准工作液注入高效液相色谱仪，在上述色谱条件下测定标准溶液的响应值（峰面积），以浓度为横坐标，峰面积为纵坐标，检测标准曲线2.3样品中胆固醇的测定取10ul样液注入高效液相色谱仪，在上述色谱条件下测定试样的响应值（峰面积），由标准曲线上差得样液中胆固醇的含量，或利用回归方程式计算样液中胆固醇含量3. 结果计算样品中胆固醇的含量（x）以毫克每百克（mg/100g)表示，按下式计算： x=（cV）m100式中：x-样品中胆固醇的含量，单位为毫克每百克（mg/100g)c-样液中胆固醇的含量，单位为毫克每毫升（mg/ml)V-容体积，单位为毫升（ml)m-样品质量，单位为克（g)平行测定结果用算术平均值表示，保留三位有效数字