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1、甲醛滴定法测定氨基酸含量一、目的掌握甲醛滴定法测定氨基酸含量的原理和操作要点二、原理水溶液中的氨基酸为兼性离子，因而不能直接用碱滴定氨基酸的 羧基。甲醛可与氨基酸上的一 N+H3结合，形成一NHH-CH2OH N（CH OH）等羟甲基衍生物，使N+H3上的H+游离出来，这样就可以用碱滴 定N+H3放出H+,测出氨基氮，从而计算氨基酸的含量。若样品中只含有单一的已知氨基酸，则可由此法滴定的结果算出氨基酸的含量。若样品中含有多种氨基酸（如蛋白质水解液） ，测不 能由此法算出氨基酸的含量。脯氨酸与甲醛作用后，生成的化合物不稳定，导致滴定后结果偏低；酪氨酸含酚基结构，导致滴定结果偏高。三、材料、试剂与
2、器具（一）试剂1、1姗醐酒精溶液称1g酚醐溶于100ml 95%酒精中。2、0.5%M麝香草酚蓝溶液取0.5澳麝香草酚蓝溶于100ml 20%乙醇溶液中。3、氨基酸溶液4、标准0.100mol/L氢氧化钠溶液5、中性甲醛溶液取甲醛溶液50ml,加1%指示剂2滴,滴加0.1mol/L NaOH溶液，使溶液呈微粉红色,临用前中和。（二）实验器具1、锥形瓶2、碱式滴定管3、移液管洗耳球4、天平5、容量瓶6、试剂瓶7、量筒8、玻棒与烧杯四、操作步骤1、取3只50ml锥形瓶，按下表加入试剂试齐样品1样品2空白氨基酸溶液或样品（ml）1.01.0一蒸储水（ml）5.05.06.0中性甲醛溶液（ml）5.0
3、5.05.00.05%!麝香草酚蓝溶液（滴）2221%醐乙醇溶液（滴）2222、混匀后用标准0.100mol/L 氢氧化钠溶液滴定至紫色(pH8.79.0)3、结果计算氨基酸溶液中含氨基酸的百分比浓度为C=（V-V2） XGX氨基酸分子量/ （10XV样）式中：C:总酸含量（g/100ml）V 1为滴定样品消耗标准氢氧化钠的体积（ml）;V 2为滴空白消耗氢氧化钠的体积（ml）;C 0：标准氢氧化钠准确浓度（mol/L）V 样：样品体积（ml）精品资料4、氢氧化钠标准溶液的标定4 1 H优W定曲4.1 I配制琢取0 g氮象化铜溶于IM mL厂且化碳的水中谯匀，注入聚乙惴容器中.密闭放置至悟球
4、清乳ffit 1的股用螂雕取上层清脱用无二氧化喇棉繇至1 OOOmL帮匀. +SJ”他的标灌满定昨酿度NNHH）WmLL呈梨化的窿液的候机工兀L1我0.$270.5,44.1.2标定赫2的规定棘取于io5C-r.or电也箱中干慎至但重的工作基准试剂第笨二甲酸气弛加生二 氧It喷的水络辘疝2清的故指东都1睫1）,用田制好的县知t的雪段清定至溶液呈粉红包.并保荐 306*同时越空声试机2t(NaOH)X 000氮*3标翱定触的就度上侬加$莘二惟翻的!（上喊无二触赫踊根日ml.|I1L5册0.&1580一!0JL75七鼠氧化陋标落而定斛S的浓度仪NaOID,教值以摩尔每弧mWL/示准式计算:式中：麻
5、一僦二甲艘醐质最触缄他，靴为克；5 一姓彼酷的棕糠似靴为耋阳矶）：卜一空白播敷化翩神期的傩集也为新:mL）；M一邻亲二甲废复根的摩尔质量的城府仲也为克每摩尔【MnolfMfKHCJtOJ2M 22、 五、注意事项(1)利用甲醛滴淀法可以用来测定蛋白质的水解程度。 随着蛋白 质水解度的增加，滴定值也增加，当蛋白质水解完成后，滴定值不再 增加。(2)氨与甲醛反应方程镂根与甲醛反应生成六次甲基四胺盐及强酸：甲醛法(弱酸强化)4N班十+ 6HCIIO =七组西M土垩+ 6坦。(pK = 8.87)NaOH指示列？ PP 预中和游离球(氨的部分电离产生少量镂根，但由第二个反应大量消耗镂根后，氨 电离方程就强烈地偏向右边了)反应生成的六次甲基四胺盐及 3个氢离子都可以跟碱反应，而 溶液中正好有还未反应的氨水，因而第二个反应，中和反应发生(CH2)6N4H+ + NH3 = (CH2)6N4 + NH4+H+ + NH3 = NH4+这第二组反应就是一个释放出中和热的过程，所以溶液就热起来。这里生成的镂盐又重复第一组甲醛强酸化的反应， 一直在和之间循环，直至氨被中和和转化完，理论上讲，最终的极限结果应该是略呈微碱性的六次甲基四胺。Welcome ToDownload !欢迎您的下载，资料仅供参考！