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1、不同类型铅中毒大鼠模型的神经系统毒性（学习记忆障碍）机制比较研究摘要大量的流行病学调查和研究表明，铅中毒可诱发肾脏、神经系统、造血系统损伤，特别是对脑发育的影响备受关注，大家公认为发育大脑更容易受到铅的损害，国内外有许多关于铅中毒对脑发育影响机制研究，但其物质基础如何，仍未完全明确。铅中毒对成熟大脑影响的报道相对较少，有关铅中毒对发育大脑和成熟大脑影响的机制差异并没有系统报道。本次实验采用幼年和成年的大鼠以腹腔注射和自由饮用醋酸铅溶液的方式给药，分别选用幼年和成年大鼠分别建立了急性和慢性铅中毒模型，造模成功后，进行水迷宫实验，了解大鼠的记忆和识别能力，处死大鼠后，采用病理和免疫组化方法，研究不
2、同类型铅中毒大鼠中枢神经系统的神经元、星状胶质细胞的生长情况，了解神经元环路的变化情况。采用原子吸收测定、生化试剂测定、酶联免疫法方法和分子生物学技术研究中枢神经系统的氧化和抗氧化防御系统，了解活性氧的产生情况和氧化应急的损伤情况，同时分析脑组织中钙离子代谢、多种激酶的活性及主要神经递质和信号分子的变化情况，了解铅中毒对大脑内的代谢和信息传递的影响。通过一系列实验对不同类型铅中毒大鼠的行为学，解剖组织学、代谢学和信息学等多方面比较，寻找两种大鼠铅中毒模型的差异，进行有关指标的进一步研究，寻找可能的新机制，为铅对中枢神经系统的毒性机制进一步研究提供理论支持，同时为排铅药物筛选研究提供实验基础。铅
3、中毒，大鼠，大脑，中枢神经系统。不同类型铅中毒大鼠模型的神经系统毒性（学习记忆障碍）机制比较研究一、项目可行性报告（一）立项的背景和意义铅对环境的污染日益加剧,已由职业环境扩展到日常环境.实际上，随着我国的社会经济发展，特别是汽车保有量和房屋装修业的迅速增加，每个城市都面临环境中的铅负荷不断上升的危险，而铅可通过皮肤、呼吸道、消化道进入人体，诱发肾脏、神经系统、造血系统损伤1。1999年8月全国部分地区和城市儿童血铅水平调查，平均38.8%的儿童血铅水平超过100 gdL-1。也就是说，我国城市儿童中有约40%左右受到铅中毒的威胁2。近年人们生活条件提高了，但铅中毒事件任然严重，国内外常常报道
4、铅超标或中毒的事件3,4,美国、加拿大等均报道交通警察血铅超标严重4。浙江省近年不同地方报道中毒的事件， 2005年浙江中部的东阳、兰溪、永康、义乌、浦江、绍兴等市县的锡箔产业的大量从业人员和上千名儿童发生铅中毒事件，2011年在浙江台州和德清的电池生产厂引起周围数百位居民铅中毒事件。由此可见，铅中毒已经是比较严重的社会问题，探索铅中毒的毒性机理，研究防治措施和筛选相关药物有非常重要的现实意义。在铅中毒对人体的危害方面，研究发现5-6，铅能引起贫血，脑发育、肝、肾功能损害，降低免疫功能，致癌等作用。其中对脑的影响最为严重，由于脑是铅最敏感的器官，微量铅即可引起神经系统的功能障碍,严重中毒可引起
5、中枢神经细胞退行性改变，导致脑病，儿童可导致智力低下，认知缺陷5，因此，铅中毒的很多深入研究是关于脑部的毒性损害。铅对脑的损害集中在一些特殊的区城。最首要的部位包括大脑皮质的额前区，海马回和小脑。这些区域的神经元如颗粒细胞和小球周细胞等主要参与学习记忆，而在这些区域的胆碱能系统中重要的神经环路，如隔-海马、斜角带-嗅球、Meynert基底核（NBM）-新皮层等具有维持正常的学习记忆功能7-8。星状胶质细胞参与维持正常的学习记忆功能9。铅中毒的一些特征性的临床表现有可能正是与这种特殊的解剖部位的特点密切相关。如大脑皮质额前区的损伤可以引起认知功能的损害，并可引起进行性的注意力分散10。大量研究显
6、示11，铅引起氧化应急损伤，一方面铅作为氧自由基的启动剂而诱发氧自由基的产生，铅通过线粒体产生活性氧,同时还可抑制氧自由基的清除酶(SOD，CAT)活力，使血，肝和脑中MDA含量增高。另一方面铅作为琉基的亲合物质易于与含疏基的酶(GSHPx，G6PD，GR)或物质(GSH)结合而使相应酶活力下降和琉基耗竭，因此使机体的抗氧化能力下降，进一步增强脂质过氧化的毒理效应。Yiin和Lin等人的研究证明12，铅能显著增加油酸，亚油酸和花生四烯酸中MDA的含量，且脂肪酸中双键数目越高，其相应体系中MDA含量也越高。铅能诱导花生四烯酸的聚集，从而增加细胞膜脂质过氧化的敏感性13。铅在体外能与磷脂双分子膜紧
7、密结合14。体内实验也证明15，脂质过氧化水平的增加和磷脂水平的下降与脑区的铅浓度显著相关。因此，转变的膜脂质成分可导致细胞膜完整性，渗透能力的变化,使细胞质膜结构受损，细胞内的线粒体和内质网释放凋亡相关物质，促进细胞凋亡。铅可取代钙的作用，影响细胞内多种激酶的活性等多个环节，铅可以通过与钙离子竞争进入细胞内，干预突触前终端钙离子而对LTP起作用16。还可作用于突触后膜上电压依赖性的钙离子通道，阻断钙离子电流6,铅可以激活蛋白激酶C(PKC)系统，引起细胞内游离钙浓度的升高，而胞内钙离子超载是神经细胞损伤死亡的重要原因。铅还作用于钙调素-蛋白激酶和cAMP-蛋白激酶等使钙调蛋白依赖性蛋白激酶(
8、CaMK)失活5,17，减少ERK2活性维持时间，降低ERK2通过调节细胞骨架蛋白、核蛋白和信号蛋白等发挥其对突触可塑性的调节和学习记忆的形成。铅还可以通过抑制腺苷酸环化酶间接抑制蛋白酶磷酸化过程，从而影响学习记忆过程18。铅可以破坏星形胶质细跑19。另外的几项研究表明 20,21,铅模拟钙样作用，激活NMDA受体复合物、活化NOS，引发自由基气体分子（NO）合成增加及自由基连锁反应，导致组织细胞的变性与坏死;同时，NMDA受体复合物的激活与N0对sGC的活化引起胞内cAMP水平升高，进而刺激突触前膜兴奋性氨基酸释放异常，导致神经兴奋与传导异常，表现出神经行为异常。总之，有关铅对脑损伤机制方面
9、，国内外学者目前已经达成广泛的共识5-6：铅通过诱发细胞内过氧化物含量升高，破坏细胞的结构；通过影响钙离子代谢、细胞内多种激酶的活性等多个环节，影响脑内少突胶质细胞和星状细胞的正常功能，并诱导神经元凋亡的过度表达。这个机制解释了许多铅致脑损伤的毒理原理，但仍有一些机理任未明确，如神经环路受损便出现严重的学习记忆障碍的问题，虽然国内外学者普遍认为铅中毒可引起严重的认知障碍，但这种神经行为障碍是否与基底前脑胆碱能系统异常有关仍未明确。针对目前很多铅中毒研究主要集中在发育脑，对成熟脑研究比较少，且一些铅中毒的作用机制不明的情况下，本研究采用系统研究法：通过选用幼年和成年大鼠分别建立急性和慢性铅中毒模
10、型22，测定铅中毒大鼠学习记忆能力，同时观察铅对大鼠脑神经发生、基底前脑成熟胆碱能神经元及星形胶质细胞的毒性效应，另外分析引起铅中毒的主要机制涉及的指标在不同模型动物的表现，发现铅对不同生长时期的脑损伤差异，寻找差异产生的可能原因，进行有关指标的进一步研究，寻找可能的新机制，为铅神经毒性机制的进一步研究积累实验基础。参考文献1Ji A, Wang F, Luo W, Tang R, Chen J, Cai T. Lead poisoning in China: a nightmare fromindustrialisation. Lancet 2011; 377: 147476.2Shen X
11、M，et al. Childhood lead poidoning china A International Symon childhood lead pos prev，Shanghai China:1996，8-183尹平平. 血铅超标的警钟还要敲响多少次? 环境保护,2011,1(24)4East Afr J Public Health. Environmental pollution of lead in traffic air and blood of traffic policemen in Khartoum State, Sudan.2011 Jun;8(2):138-40.5O
12、lympio KPK, Gonalves C, Gnther WMR, Bechara EJH. Neurotoxicity and aggressiveness triggered by low-level lead in children: a review. Pan Am J Public Health. 2009;26(3):26675.6 Talia Sanders1, Yiming Liu1, Virginia Buchner2, and Paul B. Tchounwou1 Neurotoxic Effects and Biomarkers of Lead Exposure: A
13、 Review Rev Environ Health. 2009 ; 24(1): 1545.7王来栓,邵肖梅.中枢胆碱能神经系统功能的研究进展.国外医学,2004,l2(6):457-458 Mesulam MM,Mufson EJ,Wainer BH,et al.Central cholinergic pathways in the rat:an overview based on an alternative nomenclature ch1-ch6. Neuroscience, 1983,10 (4) :1185-1201.9Katoh-Semba R, Asano T, Ueda H
14、, et al.Riluzole enhances expression ofbrain-derived neurotrophic factor with consequent proliferation of granuleprecursor cells in the rat hippocampus.FASEB J,2002,16(10):1328-1330.10Altmann,HL，H Wiegand. Acute lead exposure transiently inhibit shippoeampal neuronal activities in vitro，Brains.1988，
15、455:254ee261)。11Hande G，Nuran E.Can antioxidants is beneficial in the treatment of lead poisoning? Free Radieal Biology & Medicine，2000，29(10):927-94511Shafiq-ur-Rehman，s, Abdulla.M. Impacted lead on phospholipid metabolism in humanErythrocyte membranes.Bull.J toxicol Occup.Enviren， Health. 1993，2:3
16、5;.12Yiin SJ, Lin TH. Lead-catalyzed peroxidation of essential unsaturated fatty acid. Biol Trace Elem Res. 1995，50:167-172.13Lawton.L.J，Donaldson.W.E. Lead-indueed tissue fatty acid alterationst and lipid peroxidation.Biol Trace Elem Res，1991，28:83一97.14Hoogeveen JT. Thermoconductometric investigat
17、ion of PhosPhatidyleholineIn aqueous tertiaryButanol solutions in the absence and presence of metal ions In: Maniloff J，Coleman JR，Miller MW eds.Effects of metals on cells，subcellularelements andmacromolecules.Springfield IL:Thomas:1970:207-269.15Shafi-u-Rehlnan S.;Abdulla M.Impacted lead on phospho
18、lipid metabolism in humanEhrocyte membranes.Bull.J Toxicol Occup Environ Health.1993，2:35;.16高明奇,孙黎光,张天彪,等. 铅对小鼠学习记忆及脑海马细胞内钙库释放的影响.卫生研究2005,32(7):400-40317文涛, 孙黎光, 宗志宏, 邢伟, 刘素媛慢性染铅对小鼠海马Ca2 +2钙调蛋白依赖性蛋白激酶表达的影响中国药理学与毒理学杂志.200519(5):393-39518迪云.铅对儿童学习记忆的影响及其细胞和分子机理.中国药理学与毒理学杂志.1997，11（2）:97-9819Bellinge
19、r D. Neuropsychologic function in children exposed to environmental lead. Epidemeology，1995，6(l):101一103.20.Morita T. Smooth muscle cell derived carbon monoxide is a regulator of vaseular cGMP. Proe Natl Acad Sci USA，1995,92:1475.21Stout AK, etal. Mechanism for nitricoxides enhancement of NMDA一stimu
20、latedH norepine phrine release from hippocampal sliees. Neuro Pharmacol，1995;34(7):723. 22雷洁,古桂雄,马如娅.新生大鼠铅损伤动物模型的建立实验动物科学与管理2003,20 (1):8-10（二）国内外研究现状和发展趋势铅对环境的污染日益加剧，铅中毒已经是比较严重的社会问题，探索铅中毒的毒性机理，对研究防治措施和筛选相关药物有非常重要的现实意义。虽然国内外学者普遍认为铅中毒可引起严重的认知障碍，但这种神经行为障碍是否与基底前脑胆碱能系统异常有关仍未明确。针对目前很多铅中毒研究主要集中在发育脑，对成熟脑研究
21、比较少，且一些铅中毒的作用机制不明的情况下，本研究采用系统研究法：通过选用幼年和成年大鼠分别建立急性和慢性铅中毒模型22，测定铅中毒大鼠学习记忆能力，同时观察铅对大鼠脑神经发生、基底前脑成熟胆碱能神经元及星形胶质细胞的毒性效应，另外分析引起铅中毒的主要机制涉及的指标在不同模型动物的表现，发现铅对不同生长时期的脑损伤差异，寻找差异产生的可能原因，进行有关指标的进一步研究，寻找可能的新机制，为铅神经毒性机制的进一步研究积累实验基础。（三）项目主要研究开发内容、技术关键及主要创新点研究内容1 不同类型铅中毒大鼠模型建立(1) 急性铅中毒模型。A 幼年急性铅中毒大鼠模型建立。幼年铅中毒大鼠模型选用新生
22、大鼠出生当天, 采用腹腔注射醋酸铅溶液，根据血铅浓度变化，确定急性铅损伤动物模型建立， B 成年急性铅中毒大鼠模型建立。选用成年大鼠, 采用腹腔注射醋酸铅溶液，根据血铅浓度变化，确定急性铅损伤动物模型建立，(2) 慢性铅中毒模型。A幼年急性铅中毒大鼠模型建立。幼年铅中毒大鼠模型选用新生大鼠出生当天, 采用自由饮用醋酸铅水溶液，根据血铅浓度，确定慢性铅损伤动物模型建立， B成年急性铅中毒大鼠模型建立。选用成年大鼠, 采用自由饮用醋酸铅水溶液，根据血铅浓度，确定慢性铅损伤动物模型建立2 行为学实验（Morris水迷宫实验）(1)采用定位航行实验，测定大鼠对水迷宫学习和记忆的能力。(2)空间收索实验
23、，测定大鼠学会寻找平台后，对平台空间位置记忆的能力。3组织学实验组织病理实验。取材大脑皮质的额前区，海马回和小脑，进行肉眼形态观察和病理切片观察，同时进行免疫组织化学分析，了解神经干细组织病理实验胞分化为星形胶质细胞或神经元的趋势和状态和新增殖细胞和胆碱能神经元的趋势和状态。4生化、酶联免疫法和分子生物学实验采用试剂盒、原子吸收仪和PCR仪测定各组大鼠脑匀浆中相关离子，神经递质，信号分子以及相关酶的含量和活力，了解氧化应激损伤机制，钙离子代谢机制，主要激酶代谢变化情况。通过对以上实验结果的数据分析，寻找发育大脑与成熟大脑在铅中毒中的差异性，急性和慢性铅中毒的差异性，为铅对中枢神经系统的毒性机制
24、进一步研究积累基础数据为提供理论支持，同时为排铅药物筛选研究提供实验基础。拟解决的问题1. 幼年大鼠和成年大鼠的给药剂量选择，急性铅中毒和慢性铅中毒的时程选择。找出最佳建模方式。2. 了解与学习记忆相关的大脑皮质的额前区，海马回和小脑等组织在铅中毒后的变化情况，从形态、组织病理到免疫组化，为铅中毒的后期机制变化寻找物质基础。3. 比较中枢神经系统铅中毒机制中主要相关代谢和信号通路的差异，结合行为学和组织学情况，全面了解中枢神经系统铅中毒机制，寻找引起差异的可能机制。主要创新点1. 比较不同大鼠铅中毒模型的特点，为不同实验要求提供合适动物模型。2.结合不同层面（行为学、组织学、代谢和信息学）的改
25、变分析了不同类型铅中毒大鼠中枢神经系统变化情况，寻找其差异，了解差异的可能原因，发现可能的新机制，为铅中毒防治提供理论支持。（四）项目预期目标（主要技术经济指标、社会效益、技术应用和产业化前景以及获取自主知识产权的情况）通过本项目实施，预期达到以下目标：1.成功建立大鼠不同类型铅中毒模型2.在国内外重要期刊发表论文2-3篇3.系统比较大鼠不同类型铅中毒模型的中枢神经系统变化异同，为深入开展铅中毒机制研究通过实验数据。（五）项目实施方案、技术路线、组织方式与课题分解项目实施方案1不同类型铅中毒大鼠模型建立(1) 急性铅中毒模型。A、 幼年急性铅中毒大鼠模型建立。幼年铅中毒大鼠模型选用新生大鼠出生
26、当天, 采用腹腔注射醋酸铅溶液，0.36 %、0.12 %醋酸铅溶液0.1mL ,隔日注射1 次,共8 次,至17d 时实验结束。根据血铅浓度变化，确定急性铅损伤动物模型建立， B、成年急性铅中毒大鼠模型建立。选用成年大鼠（200-300 g）, 采用腹腔注射醋酸铅溶液，0.36 %、0.12 %醋酸铅溶液0.1mL ,隔日注射1 次,共8 次,至17d 时实验结束。根据血铅浓度变化，确定急性铅损伤动物模型建立，(2) 慢性铅中毒模型。A、幼年急性铅中毒大鼠模型建立。幼年铅中毒大鼠模型选用新生大鼠出生当天, 采用自由饮用醋酸铅水溶液，醋酸铅溶液浓度为2、0.2、0.05 gL醋酸铅水溶液。染毒
27、60-90天，根据血铅浓度，确定慢性性铅损伤动物模型建立， B、成年急性铅中毒大鼠模型建立。选用成年大鼠（200-300 g）, 采用自由饮用醋酸铅水溶液，醋酸铅溶液浓度为2、0.2、0.05 gL醋酸铅水溶液。染毒60-90天，根据血铅浓度，确定慢性性铅损伤动物模型建立，2行为学实验（Morris水迷宫实验）(1)采用定位航行实验，实验历时4天半，每天分上、下午两个时间段，共9个时间段，大鼠每时间段测试4次，分别从水池的东、南、西、北4个点入水，入水时大鼠面朝池壁。设定120秒为最长逃避潜伏期（escape latency），超过120秒的记录为120秒。每只大鼠在120秒内仍未能找到平台，
28、则由实验者将其引向平台，时间则记为120秒，每次测试间隔为15秒。测试结果记录大鼠寻找平台的逃避潜伏期、运动路程和运动速度。（2）空间探索试验。测试第五天下午将平台移去，将大鼠固定一点放入水中120秒，记录它在120秒内穿过平台位置的次数（穿环次数）。3组织学实验取材大脑皮质的额前区，海马回和小脑，进行肉眼形态观察看有无异常。进行病理切片，进行常规染色，观察脑细胞及周围组织变化情况，同时进行免疫组织化学分析，ChAT、BrdU、NF、GFAP单标或双标反应切片，观察中枢神经元和胶质细胞的存在状态和新增殖趋势和状态。4生化、酶联免疫法和分子生物学实验。采用原子吸收仪测定血铅含量，生化试剂盒测定N
29、O、GTP、谷氨酸、谷胱甘肽 、钙含量，SOD,MDA, GSH-Px, AChE活性。ELISA测定钙调素、蛋白激酶和cAMp、腺昔酸环化酶，鸟昔酸环化酶，磷酸二酯酶，NOS和CaMK活力， PCR仪测定cNOS和CaMKmRNA表达情况。技术路线模型评估病理形态观察免疫组织化学染色，观察神经元和胶质细胞生长情况综合各种结果全面评价不同类型铅中毒大鼠中枢神经系统损害差异，寻找可能原因，发现可能新机制。行为学试验（水迷宫实验）生化试剂和原子吸收测定各种生化指标和铅离子酶法和ELISA方法测定各种代谢酶、神经递质、信号分子等的活力或含量，PCR方法测定关键酶mRNA表达情况。建立大鼠铅中毒模型（
30、六）计划进度安排。2012年7月2013年3月：大鼠铅中毒模型的建立与验证。2013年3月2013年12月： 行为学实验（Morris水迷宫实验），组织病理实验。免疫组织化学分析星形胶质细胞或神经元的状态。生化、酶联免疫法和分子生物学实验。通过测定血液和脑组织铅含量及生化指标，了解各种动物的铅含量状况，酶法及酶联免疫方法测定脑组织中主要代谢酶的活性，酶联免疫法测定相关蛋白的表达状况，RT-PCR测定相关指标的基因变化。对项目进展及成果评估，并进行指导交流。（七）现有工作基础和条件。1、工作基础对本次所列的项目，我们是有信心的。首先，在申请者本人方面，申请者长期在实验动物和动物实验领域从事研究工
31、作。在工作中，开展了多种药物的安全性评价，包括中药、西药的各种剂型的评价。同时积极开展各种疾病模型的建模工作，其中动物涉及家兔，猫，豚鼠，大鼠和小鼠。针对大鼠就已经在实验室成功建立了高脂血症模型、高血压模型、心肌梗塞模型、糖尿病模型、炎症模型、肝纤维化模型、脑缺血模型、老年痴呆模型。在这些工作开展过程中，申请者已经熟练掌握了疾病模型建立的各种基础理论及研究技术手段。其中在脑缺血模型、老年痴呆模型建立中，熟悉了大鼠脑的结构，大脑分区，血管走行，脑片的制作，中枢神经元和胶质细胞的病理识别，神经递质测定，掌握了学习记忆功能的多项测试，如跳台，避暗，水迷宫实验等。其次，申请者在过去的工作中，曾经建立了
32、小鼠铅中毒模型，研究了“好神采排铅口服液”对铅中毒的排铅作用，并对其排铅机理进行研究，最后发表了论文好神采排铅口服液排铅效果的实验研究。通过这些研究，申请者在铅中毒和中枢神经系统研究方面已并积累了较为丰富的理论基础和实践经验。再者，针对本次项目，我们进行了许多尝试性工作，发现了本次研究的可行性。在好神采排铅口服液对铅中毒的排铅作用研究中，我们发现不同造模方式对小鼠的行为反应影响较大，我们尝试了大鼠的铅中毒模型的建立，已经通过腹腔注射的方式成功地建立了大鼠铅中毒模型。我们对这种铅中毒大鼠进行了水迷宫实验，发现大鼠的智力明显下降。 2、工作条件项目承担单位是浙江省新药创制服务平台、实验动物公共服务
33、平台和大型仪器协作平台成员单位，实验室具有适应本课题研究的仪器设备，同时在药物质量分析、药效学研究、病理组织学实验、药物安全性评价及分子生物学领域有丰富的科研经验，且拥有一批经验丰富的研究人员。主要相关设备：动物中心，建有SPF级大、小鼠繁育和实验屏障系统约300平方米，清洁级实验设施150平方米，普通级实验设施约400平方米，繁殖符合SPF级的昆明和BALB/C小鼠。广泛开展药品安全性实验如过敏实验、刺激实验、溶血实验等，每年完成安全性项目达100多批次。自主开展和与外单位合作开展各种疾病动物模型的建立。药物分析室，配备液-质联用仪、飞行质谱、离子阱质谱、气-质联用仪、近红外分光光度计、高效
34、毛细管电泳仪、原子吸收分光光度计、高效液相色谱仪（配有各类检测器）、气相色谱仪（配有各类检测器）等，可用于铅含量、神经递质、信号分子等的测定。病理室，配有德国LeiCa全套病理切片系统，生物图像分析系统等仪器和设备等，可用于病理组织学观察和开展免疫组织化学实验。分子生物学实验室，拥有BECKMAN高速离心机、荧光显微镜、BD FACSCalibur流式细胞分析系统、AB Stepone Plus 荧光定量PCR仪、Bio-Tek荧光酶标仪、Bio-Rad水平及垂直电泳仪，蛋白双向电泳分析系统等设备，可用于涉及分子生物学研究。临检室，配备ADVIA120全自动血球分析议，7020日立全自动生化分
35、析仪，LARGE血小板聚集仪和血凝仪， SPECTRAmax190型酶标仪，可用于血桨生化指标测定。本单位领导对于本课题的研究工作高度重视，同时本实验室经验丰富的科研人员可在本项目所涉及的各个方向如组织病理、铅含量测定、分子生物学研究、生物学等方面提供专业支持。申请人对本次探索性试验项目的完成充满信心。二、经费概算省级科技计划项目经费概算表项目名称：不同类型铅中毒大鼠模型的神经系统毒性（学习记忆障碍）机制比较研究 金额单位： 万元 概算科目名称合计省财政拨款经费自筹经费（1）（2）（3）（4）一、经费支出（合计）88（一）直接费用7.61、设备费0（1）购置设备费0（2）试制设备费0（3）设备
36、租赁费02、材料费4.14.13、测试化验加工费1.01.04、燃料动力费0.50.55、差旅费0.50.56、会议费 117、合作协作研究与交流费8、出版/文献/信息传播/知识产权事务费0.50.59、劳务费10、专家咨询费（二）间接费用11、管理费0.40.412、激励费（三）其他13、其他费用明细说明二、经费来源（合计）1、申请省财政经费2、自筹经费（1）单位自有货币资金（2）地方、部门配套拨款第1年第2年（3）其他资金80各科目支出的主要用途、与项目研究的相关性、概算方法、概算依据1） 设备费 无2） 材料费 a. 购买各种试剂2.5万元b. 购买用于评价模型药物0.5万元c. 购买实
37、验动物SD大鼠200只，35元/只，共0.7万元，ICR小鼠50只，8元/只，共400元。大鼠饲料为8元/公斤，每天每鼠消耗量为0.025公斤，大鼠研究通常为1-3个月考虑到检疫、观察等时间，折合平均饲养时间约为60天，因此大鼠饲养费为0.025 公斤/天8 元/公斤200 只60 天，共计2400元。小鼠饲养费200元。总计费用1万元d. 购买耗材、低值易耗品0.1万元3） 测试化验加工费 1万元。用于RT-PCR的委托测试。4） 燃料动力费 本项目开展所消耗的水电费用。大约0.5万元。5） 差旅费主要用于项目联系、项目汇报、外单位仪器借用的交通费用等方面的差旅费支出，预计0.5万元。6） 会议费项目中期评估和验收会议两次，每次0.5万元，共计1万元。7） 合作、协作研究与交流费无8） 出版/文献/信息传播/知识产权事务费本项目计划发表论文3篇，版面费按1500-2000元/篇，共计0.5万元。9） 人员劳务费无10） 专家咨询费无11） 管理费按单位规定5%计算，共计0.4万元。12） 其他开支无14