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1、二甲双胍通过线粒体途径诱导人骨髓瘤细胞株二甲双胍通过线粒体途径诱导人骨髓瘤细胞株 U266U266 细胞凋亡细胞凋亡 背景多发性骨髓瘤（multiple myeloma,MM）是因为浆细胞恶性增殖而导致 的疾病,是第二大血液系统恶性肿瘤,临床表现为异常的单克隆浆细胞分泌单克 隆免疫球蛋白或其片段 （M 蛋白） ,并且浆细胞浸润相关组织器官,从而引起损伤。 临床表现为溶骨性骨质破坏、贫血、高钙血症、肾功能不全、感染、淀粉样变性 等。 近来年随着化疗方案的更新和造血干细胞移植技术治疗发展,患者生存期明 显延长。但是因个体差异、肿瘤耐药等因素,目前仍无法治愈。 更有部分多发性骨髓瘤患者应用当前手段治
2、疗无效,无法控制疾病进一步进 展,严重危及患者生存质量及患者生命。 因此,我们需要进一步寻找新型药物及新 作用靶点治疗来治疗多发性骨髓瘤。 二甲双胍（metformin）是一种广泛使用的双胍类口服降糖药物。通过多种 信号通路调节血糖水平。 最近的研究表明,二甲双胍能够降低肿瘤发生的风险以及改善肿瘤的预后, 二甲双胍在体外实验中具有抑制消化系统恶性肿瘤、 肺癌等肿瘤细胞生长的作用。 本研究通过二甲双胍干预人多发性骨髓瘤细胞株 U266,观察二甲双胍对其细胞 增殖的影响,初步探讨二甲双胍对多发性骨髓瘤细胞作用的分子机制。 目的二甲双胍对多发性骨髓瘤细胞株 U266 细胞增殖、周期和凋亡的影响及 其
3、作用机制。研究方法将不同浓度的二甲双胍作用于骨髓瘤细胞株 U266,采用 MTT 法检测细胞增殖抑制率、PI 单染检测细胞周期。 蛋白质印迹法（Western blot）检测BCL-2 蛋白家族蛋白表达量的变化以及 细胞色素 C 的释放。结果 1.二甲双胍在 550 mmol/L 的实验浓度范 围之间对 U266 细胞的增殖呈抑制作用,分别以各浓度作用 24、48 和 72 h,其抑 制率明显高于对照组,且抑制率随浓度增大而增高（各浓度下作用 24、48、72 h 的 r 值分别为 0.948、0.953 和 0.851） 。 2.二甲双胍作用于 U266 细胞 48 h 后,G0/G1期细胞
4、 所占比例升高,S 期细胞所占比例减少,分别以 10 和 20 mmol/L 浓度的二甲双胍 处理细胞 48 h,G0/G1期细胞所占比例分别为 63.5%和 89.2%,而空白对照组为 52.8%。提示二甲双胍作用 48 h 后,U266 细胞阻滞在 G1期（P0.05） 。 3.二甲双胍作用 U266 细胞 48 h 后与对照组相比,BCL-2、BCL-XL 的蛋白表 达量降低,而 BAX 的蛋白表达量升高,差异均有统计学意义 （P0.05）;且下游 凋亡信号通路蛋白 PARP 的蛋白质剪切增强。此外,在二甲双胍的作用下,细胞色 素 C 从线粒体释放到细胞质中的量增加（P0.05） 。 结论本研究将不同浓度的二甲双胍作用于骨髓瘤细胞株 U266,采用 MTT 法检 测细胞增殖抑制率、PI 单染检测细胞周期。蛋白质印迹法检测 BCL-2 蛋白家族 蛋白表达量的变化以及细胞色素 C 的释放。 将所获数据加以综合分析,主要研究结果如下:1、二甲双胍能够抑制 U266 细胞增殖及诱导细胞凋亡。2、线粒体凋亡途径可能是二甲双胍诱导细胞凋亡的 机制之一。