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中国海洋大学 科学馆319,一 表达载体介绍 二 构建表达载体的基本步骤 三 载体构建具体范例 四 构建表达载体注意事项,中国海洋大学 科学馆319,一 表达载体的介绍,1.载体的分类： 1.1 按进入受体细胞类型分： （1）原核载体 （2）真核载体 （3）穿梭载体,中国海洋大学 科学馆319,1.2 按功能分成： （1）克隆载体：通常都带一个松复制子、一个多克隆位点和一个筛选标记，目的在缩主细胞内复制形成大量的基因克隆，被克隆的基因不表达 。 （2）表达载体：就是在克隆载体基本骨架的基础上增加表达元件（如启动子、 RBS 、终止子等）使目的基因能够表达的载体。 是否含有表达系统元件，即启动子-核糖体结合位点-克隆位点-转录终止信号，这是用来区别克隆载体和表达载体的标志。,中国海洋大学 科学馆319,二 构建表达载体的基本步骤,引物设计,目的基因(CDS区）的克隆,目的基因进行酶切,质粒进行酶切线性化，电泳，胶回收纯化,a遵循引物设计原则; b引物两端加入酶切位点； c保证引物序列扩出的靶基因插入到表达载体MCS上，能够正确读码；,一般先用PCR扩增带酶切位点的目标基因，然后用与消化载体相同的内切酶进行消化和胶回收。,