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1、仪器法血细胞检查,1,仪器法血细胞检查,仪器法血细胞检查,2,授课内容,概述 仪器法测定原理 方法学评价 分析仪应用进展 先进技术预览,仪器法血细胞检查,3,概 述,1.手工法： 原理简单、方便实用，但是比较费时费力、影响因素较多。 2.仪器法： 灵敏度高、技术 先进、信息含量大、容易标准化，规范化。 1)电阻式 2)光学式 3)离心式,仪器法血细胞检查,4,仪器法测定原理,电阻式仪器法测定原理及临床意义 光学式仪器法测定原理 离心式仪器法测定原理,仪器法血细胞检查,5,电阻式仪器法测定原理及意义,一白细胞分析原理 二红细胞分析原理 三血小板分析原理 四分析仪检测参数及临床意义 （一）细胞直方
2、图的应用 （二）RDW的临床意义 （三）血小板参数的临床意义,仪器法血细胞检查,6,1电阻抗法血细胞分析仪基本结构示意图2W.H.Coulter原理: 根据血细胞非传导的性质,以电解质溶液,中悬浮的白细胞，在通过计数小孔时引起的电阻变化，而进行血细胞的计数和体积测定。 3根据检测项目的不同设定小孔直径的不同。 4根据细胞大小的不同，所形成的脉冲信号强弱不同。 白细胞体积的大小经过溶血剂的处理后，形成大小不等的颗粒。小细胞区主要是淋巴细胞；中间细胞区主要是M、E、B等；大细胞区主要是中性粒细胞。,WBC Analyzer,仪器法血细胞检查,7,5血细胞的脉冲信号经过放大、甄别、整形后，送入计数系
3、统，得出计数结果。（细胞分布直方图）,图1-2 白细胞体积分布直方图,仪器法血细胞检查,8,1红细胞计数（RBC）和红细胞比积（Hct） 1）RBC原理（脉冲数的多少） 2）Hct/PCV原理（脉冲的高度与叠加） 3）白细胞数的干扰 4）红细胞体积分布直方图 2血红蛋白（Hb）含量测定 1）原理： 血液稀释剂溶血剂 Hb溶血剂 血红蛋白衍生物（HiCN,SLS-Hb） Hb检测系统 2）溶血剂配方不同所形成的Hb衍生物也不同 3）ICSH推荐HiCN法为仪器校正的标准方法 4）HiCN最大吸收在540nm，含毒性。,RBC溶解,RBC Analyzer,仪器法血细胞检查,9,3各项红细胞指数检
4、测原理 1）MCV,MCH,MCHC计算原理同手工法 2）RDW(红细胞体积分布宽度） RDW反映外周血液红细胞体积异质性的参数， 或是反映外周血红细胞体积大小不等的客观指标。 3）RDW的表示方法 RDW-CV RDW-SD,仪器法血细胞检查,10,1与RBC共一系统，不同的域值（230fl）为PLT 1）脉冲多少PLT 2）脉冲大小MPV 2 专门设置：鞘流技术、浮动界标、拟合曲线等血 小板 准确性技术。,PLT Analyzer,仪器法血细胞检查,11,（一）细胞直方图的应用 1WBC直方图/及“分类”计数 1）初步估计细胞群体的变化 2）技术因素或病理变化,100,200,300,40
5、0,fl,fl,100,200,300,400,仪器法血细胞检查,12,2RBC体积直方图 要注意观察图形峰的位置、峰底的宽度、峰顶的 形状及有无双峰现象。 1）缺铁性贫血 2）轻型Hb合成障碍 3）铁粒幼细胞性贫血 4）叶酸缺乏的巨幼细胞性贫血 5）其他,100,200,fl,仪器法血细胞检查,13,3血小板直方图 当血小板计数和血小板体积直方图呈现异常现象时，均 应检查血液是否有血小板凝聚和微小血块，必要时作血涂片 检查，观察是否有小红细胞、红细胞碎片或大血小板增多现 象。,10,20,30,fl,仪器法血细胞检查,14,（二）RDW的临床意义 1鉴别缺铁性贫血和-珠蛋白生成障碍性贫血 1
6、）共同点：小细胞性贫 血，峰左移。 2）鉴别点： aRDW增高，峰底宽 bRDW正常，峰底窄 2诊断缺铁性贫血 为小细胞低色素性贫血，伴有RDW异常增高者 （RDW正常可排除） 3进行贫血的新的形态学分类（MCV/RDW）,a,仪器法血细胞检查,15,1PLT 正常参考范围（100300）109 /L 2MPV的变化： 1）鉴别血小板减少 PLT而MPV：Pt破坏增多（如DIC、ITP等） PLT而MPV：M增生不良、AIDS、M纤维化、 再障、M瘤、白血病化疗、败血症等 2）鉴别血小板增高 PLT而MPV：反应性Pt增多症，失血等。 PLT而MPV正常：M增生性疾病，如PLT增多症。 3）其
7、他 PLT正常而MPV ：慢性M性白血病、脾切等 因MPV先于PLT变化，MPV可用于观察病情变化， 如MPV 表示BM恢复，局部炎症MPV正常，败血症MPV 升高。 对于出血倾向评估：MPV与出血倾向呈负相关。,（三）血小板参数的临床意义,仪器法血细胞检查,16,光学式仪器法测定原理, 根据每个细胞所产生的散射角度判断细胞的体积和 形态特征进行白细胞分类。,一原理示意图：,二原理： 1又称光散射式计数法。由 细胞悬液中的血细胞通过流通检 测器阻断一次光束，细胞不断阻 断光束使检测器在单位时间内检 出光束阻断的次数，从而计算出 细胞数。,仪器法血细胞检查,17,离心式仪器法测定原理,一原理：
8、（干式细胞计数仪）血液AC荧光染色剂 离心 红细胞、粒细胞、淋巴细胞、血小板、血浆 二细胞着色的特点 1红细胞不着色，为暗红色。2粒细胞呈桔黄色。3淋巴细胞呈绿色。4血小板呈淡黄色。5血浆为透明的浅黄色。,细胞着色,仪器法血细胞检查,18,方法学评价,一WBC计数及分类计数 1手工法：用显微镜目视计数是基础方法，但是存在固有误差（计数板、吸管等系统误差）、技术误差（重复性、准确性相对较差）。 2仪器法：可标准化，便于质控。精密度、准确性较高（需经严格校正后） 二仪器法分类计数为大致的分群不是真正的分类，不能完全代替手工法,仪器法血细胞检查,19,1人员培训 1）仪器原理、操作规程、注意事项、异
9、常报警的含义。 2）运用质控图的变化进行仪器的调试。 2仪器的鉴定 包括总变异、携带污染率、线性范围、可比性和准确性。 3仪器的校正：随机的标准品、或者严格的手工法。 4标本的采集和运送 1）要求用抗凝的静脉血 2）抗凝血在室温下，WBC、RBC、PLT可以稳定24h，血 小板不适合在低温下保存。 5注意分析中的几个问题 1）最适宜温度为1822 2）溶血剂用量及溶血时间 3）仪器的半堵孔现象 6分析后的注意事项,三仪器法的应用必须全面实行质量管理,仪器法血细胞检查,20,分析仪应用进展,一仪器测试原理的改进。 1容量、电导、光散射白细胞分类法 2阻抗与射频技术联合的白细胞分类法 3光散射与细
10、胞化学技术联合应用于白细胞分类法 4多角度偏振光散射白细胞分类技术 二仪器自动化水平的提高。 三各种特殊技术的应用。,仪器法血细胞检查,21,先进技术预览,图1半自动分析仪,这是一个容易操作的 系统。接通电源后，仪器 处于正常的操作待机状态 时，只要把20l 血液样 品在机外稀释，混匀后放 在样品架上，按下计数键 它就可以对15种血液指标 和3个细胞直方图进行一次分析。测定完成后结果会立即在LCD上显示并将结果打印出来。,仪器法血细胞检查,22,图2全自动分析仪,这是一台用于临 床实验室体外诊断的 全自动血液分析仪， 能为血液异常病人提 供准确的筛选结果， 并提示其需作进一步 检查。能每小时分析 80份样品，打印出18 份参数和3种细胞分布 曲线图。操作简便， 快速。,仪器法血细胞检查,23,图3CD-3500 血球计数分析仪,30个参数，10项白细胞分类，7个分布图，7个散射表示图 可以做网织红细胞分析，以及动物血液测试高达60个品种 采用最先进的激光技术和电阻法技术 20个质控程序，120个带25个参数的质控样品的SD.CV均值,仪器法血细胞检查,24,HST-330 SE-9000/R-3000/SP-100 从血球计数、白血球分类到网织红细胞测定以及标本 的推片、染色，全面实现了自动化。 实现了高效率的检测。,图4HS血液常规检查流水线,